基因操作原理PPT學習教案

1、會計學1基因操作原理基因操作原理第1頁/共98頁核酸的凝膠電泳 它是一種分析鑒定重組DNA分子及蛋白質與核酸相互作用的重要實驗手段，同時也是分子生物學研究方法的技術基礎。 第2頁/共98頁彼此分開。第3頁/共98頁第4頁/共98頁第5頁/共98頁瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖是一種從紅色海藻中提取出的線性多糖聚合物。 分為常熔點的瓊脂糖和低熔點（LMP）瓊脂糖。 第6頁/共98頁第7頁/共98頁第8頁/共98頁第9頁/共98頁Separation Range Vs. % AgaroseLow Geling Agarose 第10頁/共98頁第11頁/共98頁第12頁/共98頁Sample Well 2

2、5 ng 1 kb ladder0.8% Agarose124681012kbAgarose Gel ElectrophoresisEtBr Detection Limit: 5-10 ng DNA第13頁/共98頁根據標準DNA相對遷移距離推測待測定的DNA片段的大小第14頁/共98頁Agarose gel electrophoresis第15頁/共98頁Agarose gel electrophoresis第16頁/共98頁第17頁/共98頁PolyAcrylamide Gels第18頁/共98頁第19頁/共98頁第20頁/共98頁PFGE can resolve large DNA fr

3、agments第21頁/共98頁第22頁/共98頁第23頁/共98頁第24頁/共98頁第25頁/共98頁ParameterConcentrationTemplatepHdNTPsGelatinPrimersMg2+ oncentrationEnzymeTotal volume10 attomoles(1106 molecules)8.4（10mM Tris-Hcl）200 M(each one)100 g/ml (optional)0.5 M(each one);(0.11.0M)0.5mM50% at 95 for 40 min1.110-4 substitutions per cycle0

4、.5mM10mM5 to 3only5 adenosines第29頁/共98頁第30頁/共98頁第31頁/共98頁第32頁/共98頁第33頁/共98頁第34頁/共98頁第35頁/共98頁第36頁/共98頁第37頁/共98頁第38頁/共98頁第39頁/共98頁核酸雜交常用幾種膜的核酸雜交常用幾種膜的性能比較性能比較第40頁/共98頁第41頁/共98頁第42頁/共98頁第43頁/共98頁第44頁/共98頁（a）（b）（c）（d）（e）基因組基因組DNADNA限制片段限制片段硝酸纖維素濾膜硝酸纖維素濾膜同探針同源雜交的同探針同源雜交的基因基因DNA片段片段X光底片光底片第45頁/共98頁第46頁/共

5、98頁第47頁/共98頁第48頁/共98頁第49頁/共98頁第50頁/共98頁第51頁/共98頁第52頁/共98頁第53頁/共98頁第54頁/共98頁第55頁/共98頁第56頁/共98頁第57頁/共98頁第58頁/共98頁第59頁/共98頁足跡實驗（足跡實驗（footprinting footprinting assayassay） 第60頁/共98頁第61頁/共98頁第62頁/共98頁第63頁/共98頁第64頁/共98頁凝膠電泳凝膠電泳和和第65頁/共98頁me硫酸二甲酯分離分離DNA并用并用六氫吡啶切割六氫吡啶切割第66頁/共98頁第67頁/共98頁第68頁/共98頁核苷酸鏈的核苷酸鏈的3-末端，從而終末端，從而終止止DNA鏈的延長。鏈的延長。第69頁/共98頁第70頁/共98頁第71頁/共98頁第72頁/共98頁第73頁/共98頁第74頁/共98頁第75頁/共98頁第76頁/共98頁第77頁/共98頁第78頁/共98頁第79頁/共98頁顯示的相應譜帶，直接讀出顯示的相應譜帶，直接讀出待測待測DNA片斷的核苷酸序列。片斷的核苷酸序列。第80頁/共98頁第81頁/共98頁第82頁/共98頁第83頁/共98頁(A)的的N3 410倍倍第84頁/共98頁第85頁/共98頁第86頁/共98頁第87頁/共98頁第88頁/共98頁第89頁/共98頁第90頁