免疫檢測技術

1、網格學說（網格學說（lattice theory）抗體過?？贵w過剩抗原過?？乖^?？贵w抗體比例合適抗體抗體比例合適抗原抗原抗體抗體1.沉淀反應沉淀反應2.凝集反應凝集反應3.補體參與的反應補體參與的反應4.中和反應中和反應5.免疫標記技術免疫標記技術絮狀沉淀絮狀沉淀環(huán)狀沉淀環(huán)狀沉淀免疫濁度沉淀免疫濁度沉淀免疫電泳原理圖解免疫電泳原理圖解 加入標準量補體加入標準量補體 加入包被抗體的紅細胞加入包被抗體的紅細胞 檢測紅細胞溶解情況檢測紅細胞溶解情況AgPatientsserum AbNo AbAg整理ppt常見標記免疫技術常見標記免疫技術放射免疫技術放射免疫技術酶免疫技術酶免疫技術熒光免疫技術熒光

2、免疫技術 整理ppt放射免疫分析基本原理放射免疫分析基本原理競爭性結合反應的經競爭性結合反應的經典標記抗原（典標記抗原（AgAg* *）和）和非標記抗原（非標記抗原（AgAg）與限）與限量抗體量抗體(Ab)(Ab)競爭性結合競爭性結合AgAg* *和和AgAg具有等同的具有等同的與與AbAb結合能力結合能力 Ag* Ab Ag 標記抗原標記抗原 特異性抗體特異性抗體 待測抗原待測抗原( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗體復合物抗原抗體復合物分離分離Ag*-Ab 和游離和游離Ag*從標準曲線上讀知含量從標準曲線上讀知含量 測定測定Ag*-Ab和游離和游離Ag*放射性放射性 放射免疫測定法

3、放射免疫測定法(RIA)示意圖示意圖 7550 30 100110100 1000未標記抗原濃度（未標記抗原濃度（ng/mL)結合結合/未結合的放射活性（未結合的放射活性（%）Ag*-AbAg*Ag熒光素標記的熒光素標記的特異性抗體特異性抗體組織切片組織切片Ag熒光素標記熒光素標記的抗抗體的抗抗體組織切片組織切片待測抗體待測抗體免免 疫疫 熒熒 光光 染染 色色 顯顯 示示 細細 胞胞 骨骨 架架 免疫熒光染色是利用抗原抗體特異性結免疫熒光染色是利用抗原抗體特異性結合的原理，用經合的原理，用經熒光染料標記的抗體熒光染料標記的抗體對細胞對細胞或組織內的蛋白質進行定性或定量研究的方或組織內的蛋白質

4、進行定性或定量研究的方法。該技術與熒光顯微鏡觀察相結合，可對法。該技術與熒光顯微鏡觀察相結合，可對特定的蛋白質進行細胞或組織內的精確定位。特定的蛋白質進行細胞或組織內的精確定位。常用于抗原、抗體標記的熒光染料有以下幾種常用于抗原、抗體標記的熒光染料有以下幾種顯示綠色熒光：Fluorescein isothocyancie(FITC),Alexa-488顯示紅色熒光：Rhodamine B, Texas Red, Alexa-546,568,594顯示藍色熒光：Alexa350 用Alexa488標記的抗人-tubulin抗體染色顯示微管 ( 綠 色 ) ; 細 胞 核 : 紅 色 , D A

5、P I 染 色人皮膚角化細胞免疫熒光染色人皮膚角化細胞免疫熒光染色用抗-tubulin抗體染色顯示微管(綠色); 細胞核: 紅色, DAPI染色(激光共聚焦顯微鏡照片)PtK1細胞免疫熒光染色細胞免疫熒光染色底物顯色底物顯色定性或定量的分析定性或定量的分析原理原理包被包被反應反應加入待測抗體或加入待測抗體或抗原和酶標抗原抗原和酶標抗原或抗體或抗體洗滌洗滌使結合在固相上使結合在固相上的抗原抗體復合物的抗原抗體復合物與未結合的分離與未結合的分離1234基本步驟基本步驟適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及低于二價的小分子

6、單價抗原，因其不能形成兩位點夾心原及低于二價的小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心 整理ppt整理ppt整理ppt020,00040,00060,00080,000100,000試劑盒試劑盒儀器儀器特殊防護特殊防護治理污染治理污染人民幣人民幣人民幣人民幣三種免疫測定技術的成本及費用三種免疫測定技術的成本及費用A. 將將Ab吸附在固相載體表面吸附在固相載體表面; B. 加入酶標加入酶標Ag和待測和待測Ag，競爭結合，競爭結合Ab； 對照只加入酶標對照只加入酶標Ag； C. 加底物。對照孔與樣品孔底物降解量的差未知加底物。對照孔與樣品孔底物降解量的差未知Ag量。量。3 競爭法測定抗原競爭法測定抗原原理：原理：抗人抗人IgMIgM鏈抗體包被鏈抗體包被捕獲待測標本中捕獲待測標本中IgMIgM類抗體類抗體加入特異性抗原和酶標記特加入特異性抗原和酶標記特異性抗原的抗體異性抗原的抗體 底物顯色底物顯色 ABS-ELISA法法 ：固相支持物；：固相支持物；：樣品；：樣品；：特異性：特異性IgGIgG；：生物素化抗小鼠：生物素化抗小