臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證1

1、會(huì)計(jì)學(xué)1臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證1第1頁/共150頁第2頁/共150頁第3頁/共150頁第4頁/共150頁第5頁/共150頁第6頁/共150頁正態(tài)分布的基本統(tǒng)計(jì)學(xué)含義可用均數(shù)（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）和概率來說明。第7頁/共150頁第8頁/共150頁第9頁/共150頁第10頁/共150頁第11頁/共150頁第12頁/共150頁第13頁/共150頁第14頁/共150頁第15頁/共150頁第16頁/共150頁第17頁/共150頁第18頁/共150頁第19頁/共150頁第20頁/共150頁第21頁/共150頁第22頁/共150頁第23頁/共150頁理想的核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)理想的核酸

2、擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)A產(chǎn)物分析區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊專用走廊工作流向工作流向擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)第24頁/共150頁產(chǎn)物分析區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊專用走廊工作流向工作流向擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)理想的核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)理想的核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)B第25頁/共150頁“十六字口訣十六字口訣”第26頁/共150頁門門試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備

3、區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)外走廊外走廊門門門門門門門門試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò) 增 及 產(chǎn) 物擴(kuò) 增 及 產(chǎn) 物分析區(qū)分析區(qū)外走廊外走廊門門門門門門門門AB第27頁/共150頁試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò) 增 及 產(chǎn)擴(kuò) 增 及 產(chǎn)物分析區(qū)物分析區(qū)門門門門門門門門空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向第28頁/共150頁走廊走廊走廊走廊試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增和產(chǎn)擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他

4、實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室第29頁/共150頁門試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò) 增 及 產(chǎn)擴(kuò) 增 及 產(chǎn)物分析區(qū)物分析區(qū)門門門空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向+空氣流向空氣流向+走廊走廊試 劑 準(zhǔn) 備試 劑 準(zhǔn) 備區(qū)區(qū)標(biāo) 本 制 備標(biāo) 本 制 備區(qū)區(qū)擴(kuò)增和產(chǎn)擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)物分析區(qū)空氣流向空氣流向+空氣流向+其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室空氣流向第30頁/共150頁產(chǎn)物分析區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊專用走廊工作流向工作流向擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)

5、增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)傳遞窗傳遞窗傳遞窗第31頁/共150頁第32頁/共150頁儀器設(shè)備儀器設(shè)備質(zhì)控方法質(zhì)控方法 頻頻 度度失控標(biāo)準(zhǔn)失控標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增儀儀器校驗(yàn)實(shí)驗(yàn)當(dāng)儀器移動(dòng)時(shí)實(shí)驗(yàn)失敗熱電偶監(jiān)測溫度擴(kuò)增功能檢測每月一次每 4 個(gè)月一次 如靶溫度或溫度差異超出允許范圍待測孔未出現(xiàn)擴(kuò)增，檢測溫度程序打印每次測定時(shí)打印程序不對加樣器校準(zhǔn)每年 2 次不符合要求水浴箱溫度檢測每次實(shí)驗(yàn)不符合要求酶標(biāo)儀預(yù)防性維護(hù)及校準(zhǔn)每年 2 次不符合要求第33頁/共150頁第34頁/共150頁第35頁/共150頁第36頁/共150頁第37頁/共150頁SDSDSDabc222.第38頁/共150頁第39頁

6、/共150頁第40頁/共150頁第41頁/共150頁第42頁/共150頁第43頁/共150頁第44頁/共150頁第45頁/共150頁第46頁/共150頁第47頁/共150頁第48頁/共150頁XXX單位XXX實(shí)驗(yàn)室XXX標(biāo)準(zhǔn)操作程序編號(hào)：啟用日期：版本：第 頁 共 頁一目的：二適用范圍：三職責(zé)或責(zé)任人：四（方法原理）五（檢測設(shè)備和試劑）六（所需的環(huán)境條件）七操作步驟： 1 2 3 五、本操作程序變動(dòng)程序：六、相關(guān)的文件七、相關(guān)的記錄表格和報(bào)告編寫人審核人批準(zhǔn)人第49頁/共150頁第50頁/共150頁第51頁/共150頁第52頁/共150頁第53頁/共150頁第54頁/共150頁第55頁/共15

7、0頁第56頁/共150頁第57頁/共150頁第58頁/共150頁第59頁/共150頁第60頁/共150頁第61頁/共150頁第62頁/共150頁第63頁/共150頁第64頁/共150頁第65頁/共150頁第66頁/共150頁第67頁/共150頁第68頁/共150頁第69頁/共150頁第70頁/共150頁第71頁/共150頁第72頁/共150頁第73頁/共150頁第74頁/共150頁第75頁/共150頁第76頁/共150頁 臨床臨床PCRPCR檢驗(yàn)流程記錄表檢驗(yàn)流程記錄表 檢驗(yàn)日期檢驗(yàn)日期 檢驗(yàn)項(xiàng)目：檢驗(yàn)項(xiàng)目： 擴(kuò)增儀中保存文件名：擴(kuò)增儀中保存文件名： 使用說明：使用說明：1本記錄表須嚴(yán)格遵循試

8、劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)（產(chǎn)物分析區(qū)）單一流向移動(dòng)，嚴(yán)禁逆向移動(dòng)。2各項(xiàng)工作執(zhí)行后，在相應(yīng)敘述前的“”內(nèi)打“”。3本記錄表最后與相應(yīng)的標(biāo)本接收記錄等歸檔保存于擴(kuò)增區(qū)的專用文件柜內(nèi)，以備查找。實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 試劑在有效期內(nèi) 擴(kuò)增儀、加樣器和溫度計(jì)在校準(zhǔn)的有效期內(nèi) 生物安全柜的濾膜在使用有效期內(nèi) 消毒溶液在有效期內(nèi) 洗眼器內(nèi)無菌生理鹽水在有效期內(nèi) 離心管、帶濾芯吸頭已經(jīng)過質(zhì)檢合格 操作者操作者： 第77頁/共150頁 試劑準(zhǔn)備區(qū)（試劑準(zhǔn)備區(qū)（1 1區(qū)）區(qū)）實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)前 ： 打開通風(fēng)設(shè)備 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面清潔（水或70%酒精擦拭） 冰箱溫度：冷藏室（28） ； 冷凍室（182） 實(shí)驗(yàn)室溫度： （允許范

9、圍：1030）；相對濕度： （允許范圍：30%80%）PCR試劑來源： （可直接列出有關(guān)廠家名稱） 批號(hào)：XXXXXXX 檢驗(yàn)項(xiàng)目： 本次實(shí)驗(yàn)用量： 人份，剩余量： 人份。其他有關(guān)試劑配制： 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制1%含氯消毒液 毫升； 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制4NaOH溶液 毫升； 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯 毫升； 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制 毫升； 其他： 儀器設(shè)備使用：儀器設(shè)備使用：離心機(jī)： 正常 不正常 振蕩器： 正常 不正常 超凈臺(tái)： 正常 不正常實(shí)驗(yàn)后：實(shí)驗(yàn)后： 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列

10、出）SOP清潔實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面、加樣器和離心機(jī)，并進(jìn)行紫外照射30分鐘以上。 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。 操作者：操作者： 第78頁/共150頁 標(biāo)本制備區(qū)（標(biāo)本制備區(qū)（2 2區(qū)）區(qū)）實(shí)驗(yàn)前：實(shí)驗(yàn)前： 打開通風(fēng)設(shè)備 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面清潔（水或70%酒精擦拭） 冰箱（柜）溫度：冷藏室（28） ； 冷凍室（182） 實(shí)驗(yàn)室溫度： （允許范圍：1030）；相對濕度： （允許范圍：30%70%）陽性室內(nèi)質(zhì)控物來源： 濃度及批號(hào)： 擴(kuò)增位置： 陰性室內(nèi)質(zhì)控物來源： 批號(hào)： 擴(kuò)增位置： 所取理的標(biāo)本（對應(yīng)標(biāo)本接收的唯一編號(hào)）及擬擴(kuò)增位置：所取理的標(biāo)本（對應(yīng)標(biāo)本接收的唯一編號(hào)）及擬擴(kuò)增位

11、置：1 19 917172525 3333414149 2 2101018182626 34344242503 3111119192727 35354343514 4121220202828 36364444525 5131321212929 37374545536 6141422223030 383846 547 7151523233131393947 558 8161624243232404048 56核酸提取及加樣過程核酸提取及加樣過程：按XXX（列出編號(hào)）SOP進(jìn)行。儀器設(shè)備使用：儀器設(shè)備使用： 生物安全柜： 正常 不正常 恒溫儀溫度校準(zhǔn)： 離心機(jī)： 正常 不正常 振蕩器： 正常 不正

12、常實(shí)驗(yàn)后：實(shí)驗(yàn)后： 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP清潔實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面及儀器設(shè)備。 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。 操作者：操作者： 第79頁/共150頁 擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)（3 3區(qū)）區(qū)）實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)前 打開通風(fēng)設(shè)備 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面清潔（水或70%酒精擦拭） 實(shí)驗(yàn)室溫度： （允許范圍：1030）；相對濕度： （允許范圍：30%70%）擴(kuò)增儀操作： 開機(jī)自檢及運(yùn)行正常 按XXX（列出編號(hào)）SOP進(jìn)行編程、參數(shù)設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算值：標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算值：Slope值值： （ ）Intercept值值： （ ） r值值： （ ）室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果：室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果：結(jié)果： 填

13、寫室內(nèi)質(zhì)控記錄、描質(zhì)控圖 是否失控：是否失控：否 是 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見所附擴(kuò)增儀打印結(jié)果實(shí)驗(yàn)后：實(shí)驗(yàn)后： 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP清潔實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面及儀器設(shè)備。 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。 操作者：操作者： 失控原因及分析：（失控判斷標(biāo)準(zhǔn)及原因分析按XXXSOP進(jìn)行）第80頁/共150頁第81頁/共150頁第82頁/共150頁第83頁/共150頁基本的工作基本的工作需要需要 儀器設(shè)備使用、維護(hù)和校準(zhǔn) 知識(shí)更新 基本實(shí)驗(yàn)技能分析所做分析所做的的工作程序不到位？儀器設(shè)備操作、維護(hù)、校準(zhǔn)？人員操作？質(zhì)控方法？患者或醫(yī)生患者或醫(yī)生投訴投訴 結(jié)果解釋錯(cuò)誤

14、？ 與臨床溝通不夠？ 檢測程序、儀器設(shè)備有問題？ 質(zhì)控問題？第84頁/共150頁第85頁/共150頁第86頁/共150頁第87頁/共150頁第88頁/共150頁第89頁/共150頁第90頁/共150頁第91頁/共150頁第92頁/共150頁第93頁/共150頁第94頁/共150頁第95頁/共150頁第96頁/共150頁第97頁/共150頁第98頁/共150頁第99頁/共150頁第100頁/共150頁第101頁/共150頁第102頁/共150頁第103頁/共150頁第104頁/共150頁第105頁/共150頁第106頁/共150頁第107頁/共150頁第108頁/共150頁第109頁/共150頁

15、第110頁/共150頁第111頁/共150頁第112頁/共150頁第113頁/共150頁第114頁/共150頁第115頁/共150頁第116頁/共150頁第117頁/共150頁第118頁/共150頁第119頁/共150頁陽性質(zhì)控樣本測定結(jié)果偏低或?yàn)殛幮躁栃再|(zhì)控樣本測定結(jié)果偏低或?yàn)殛幮越Y(jié)果偏低結(jié)果偏低陰性陰性臨床標(biāo)本中臨床標(biāo)本中無強(qiáng)陽性無強(qiáng)陽性臨床標(biāo)本中臨床標(biāo)本中有較強(qiáng)陽性有較強(qiáng)陽性臨床標(biāo)本臨床標(biāo)本中有陽性中有陽性臨床標(biāo)本臨床標(biāo)本全為陰性全為陰性觀察臨床標(biāo)本情況觀察臨床標(biāo)本情況所用離所用離心管含心管含抑制物抑制物Taq酶酶活性降活性降低低核酸提核酸提取試劑取試劑效率低效率低更換進(jìn)更換進(jìn)口離心口離

16、心管管更換更換Taq酶酶再檢測再檢測更換核更換核酸提取酸提取試劑試劑所有標(biāo)本重新檢測所有標(biāo)本重新檢測核酸提核酸提取中靶取中靶核酸丟核酸丟失失核酸提核酸提取中抑取中抑 抑物殘抑物殘留留核酸提核酸提取試劑取試劑混入混入擴(kuò)增儀擴(kuò)增儀孔間溫孔間溫度差異度差異隨機(jī)誤差檢測質(zhì)控樣本及檢測質(zhì)控樣本及35份已份已知陽性樣本知陽性樣本質(zhì)控樣本質(zhì)控樣本測定正常測定正常且陽性樣且陽性樣本有些值本有些值增加增加質(zhì)控及已質(zhì)控及已知陽性樣知陽性樣本測定仍本測定仍異常異常按系統(tǒng)誤按系統(tǒng)誤差途徑分差途徑分析析重新提取或已知濃度重新提取或已知濃度DNA在同一孔內(nèi)擴(kuò)增在同一孔內(nèi)擴(kuò)增結(jié)果正常結(jié)果正常結(jié)果仍低結(jié)果仍低進(jìn)行擴(kuò)增進(jìn)行擴(kuò)增

17、儀孔溫度儀孔溫度校準(zhǔn)后再校準(zhǔn)后再檢測檢測Taq酶或酶或逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶失活失活第120頁/共150頁第121頁/共150頁陰性質(zhì)控樣本測定為陽性陰性質(zhì)控樣本測定為陽性臨床標(biāo)本亦全為陽性臨床標(biāo)本亦全為陽性臨床標(biāo)本中有陽性也有陰性臨床標(biāo)本中有陽性也有陰性擴(kuò) 增 產(chǎn) 物擴(kuò) 增 產(chǎn) 物“污染污染”試劑試劑“污染污染”同時(shí)檢測的標(biāo)本情況同時(shí)檢測的標(biāo)本情況擴(kuò) 增 產(chǎn) 物 輕擴(kuò) 增 產(chǎn) 物 輕度度“污染污染”標(biāo) 本 間 交 叉標(biāo) 本 間 交 叉“污染污染”35空管室空管室內(nèi)靜置內(nèi)靜置58份水樣份水樣本檢測本檢測試劑直接試劑直接擴(kuò)增檢測擴(kuò)增檢測驗(yàn)證驗(yàn)證驗(yàn)證驗(yàn)證58份水份水樣本檢測樣本檢測暫停日常檢驗(yàn)，實(shí)暫停日

18、常檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)室清潔、通風(fēng)驗(yàn)室清潔、通風(fēng)更換試劑更換試劑措施措施有陽性，則確認(rèn)有陽性，則確認(rèn)有實(shí)驗(yàn)室有實(shí)驗(yàn)室“污染污染”無陽性，說明為無陽性，說明為標(biāo)本交叉標(biāo)本交叉“污染污染”改善操作改善操作措施措施第122頁/共150頁第123頁/共150頁第124頁/共150頁第125頁/共150頁第126頁/共150頁第127頁/共150頁第128頁/共150頁第129頁/共150頁第130頁/共150頁第131頁/共150頁第132頁/共150頁第133頁/共150頁第134頁/共150頁第135頁/共150頁第136頁/共150頁第137頁/共150頁第138頁/共150頁第139頁/共150頁第140頁/共150頁第141頁/共150頁染色體差異染色體差異1.23%(Fujiyama A,et al. Science, 2002,295(5552):131-4)謝謝謝謝！第142頁/共150頁第143頁/共150頁第144頁/共150頁走廊走廊走廊走廊試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增和產(chǎn)擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室第145頁/共150頁第146頁/共150頁XXX單位XXX實(shí)驗(yàn)室X