抗埃博拉核蛋白人鼠抗體研究

1、抗埃博拉核蛋白抗埃博拉核蛋白 人鼠嵌合抗體的研究人鼠嵌合抗體的研究 -病原生物學文獻閱讀報告病原生物學文獻閱讀報告埃博拉病毒簡介埃博拉病毒簡介:埃博拉出血熱（Ebola Haemorrhagie Fever , EBHF）是由埃博拉病毒（Ebola virus , EBOV）引起的動物疫源性傳染病，死亡率可高達90%。l 形態(tài)與性狀：埃博拉病毒可呈桿狀、絲狀；直徑約為7090nm，為中 型病毒；單股負鏈RNA病毒；有包膜l 病毒的蛋白：糖蛋白（GP）、核蛋白（NP）、VP35、VP40、VP30、VP24、RNA聚合酶（L蛋白）l 病毒的生活周期：吸附、穿入、脫殼、生物合成、裝配、成熟和釋放l

2、 病毒的傳染源和宿主動物：感染EBOV的患者，以及猴子、黑猩猩等靈長類動物l 傳播途徑：接觸傳播，注射傳播，性傳播，氣溶膠傳播主要臨床特征：主要臨床特征：一一. .早期主要為全身性病毒血癥的癥狀和體征。早期主要為全身性病毒血癥的癥狀和體征。a.癥狀：早期多急性發(fā)病，表現(xiàn)為一系列非特異性癥狀；癥狀：早期多急性發(fā)病，表現(xiàn)為一系列非特異性癥狀；b.體征：體溫以高熱為主，波動較大；重癥患者會出現(xiàn)體征：體溫以高熱為主，波動較大；重癥患者會出現(xiàn)低血壓；脈搏低血壓；脈搏-體溫分離早期較為常見。體溫分離早期較為常見。二二. .晚期表現(xiàn)為全身多臟器的廣泛出血和肝腎功能的嚴晚期表現(xiàn)為全身多臟器的廣泛出血和肝腎功能

3、的嚴重受損。重受損。NP抗體研究目的、原因抗體研究目的、原因由于埃博拉出血熱在我國境內(nèi)尚無病例出現(xiàn)，尤其需由于埃博拉出血熱在我國境內(nèi)尚無病例出現(xiàn)，尤其需要儲備血清學檢測陽性質(zhì)控物。要儲備血清學檢測陽性質(zhì)控物。NP?獲得抗體？獲得抗體？l 通過基因工程抗體技術構建并表達抗埃博拉病毒核蛋白NP人-鼠嵌合抗體，為埃博拉出血熱血清學檢測做人源陽性對照儲備。人人基因基因鼠鼠基因基因新基因新基因抗體抗體如何制備人鼠嵌合抗體如何制備人鼠嵌合抗體 目的基因的獲取1 1l 從分泌抗從分泌抗ebov npebov np抗體的鼠雜交瘤細胞中提取抗體的鼠雜交瘤細胞中提取相應相應RNARNA，逆轉錄合成，逆轉錄合成cD

4、NAcDNA，然后通過，然后通過PCRPCR技術技術擴增該目的基因。擴增該目的基因。 表達載體的構建2l 將鼠抗體輕重可變區(qū)基因和人抗體輕重鏈恒定將鼠抗體輕重可變區(qū)基因和人抗體輕重鏈恒定區(qū)基因插入到區(qū)基因插入到HL51-14HL51-14質(zhì)粒上，成功構建重組質(zhì)粒上，成功構建重組DNADNA分子。分子。 將目的基因倒入受體細胞3l 將連接有輕重鏈基因的表達載體質(zhì)粒用將連接有輕重鏈基因的表達載體質(zhì)粒用PEIPEI轉轉染染293T293T細胞（該細胞是一種感染了腺病毒基因細胞（該細胞是一種感染了腺病毒基因的人腎上皮細胞，其蛋白質(zhì)表達含量高）。的人腎上皮細胞，其蛋白質(zhì)表達含量高）。 目的基因的表達與檢

5、測4l 收獲收獲293T293T細胞產(chǎn)生的上清，用細胞產(chǎn)生的上清，用ELISAELISA法檢測法檢測人人鼠嵌合抗體的表達。鼠嵌合抗體的表達。檢測抗體是否成功表達：檢測抗體是否成功表達：ELISA檢測檢測293T細胞是否成功表達人細胞是否成功表達人-鼠嵌合抗體鼠嵌合抗體包被包被ebove np抗原抗原4過夜過夜次日加入一抗為收獲的嵌合抗體上清次日加入一抗為收獲的嵌合抗體上清二抗為二抗為HRP標記的抗人標記的抗人Fc抗體抗體4. 加底物顯色，底物降解的量即為嵌合抗體的生成量加底物顯色，底物降解的量即為嵌合抗體的生成量結果及其意義：結果及其意義：結果結果：改造過的人鼠嵌合抗體能與埃博拉病毒改造過的人

6、鼠嵌合抗體能與埃博拉病毒核蛋白抗原結合表明其具有抗體的生物學活性。核蛋白抗原結合表明其具有抗體的生物學活性。這些均說明人鼠嵌合抗體的構建是成功的。這些均說明人鼠嵌合抗體的構建是成功的。意義：意義：作為作為Ebola血清學檢測中人源陽性對照血清學檢測中人源陽性對照儲備在埃博拉病毒檢測上起到一定作用。對于儲備在埃博拉病毒檢測上起到一定作用。對于抗埃博拉核蛋白抗體的研究，也為以后抗埃博抗埃博拉核蛋白抗體的研究，也為以后抗埃博拉病毒抗體的研究提供了一定的基礎。拉病毒抗體的研究提供了一定的基礎。預防埃博拉預防埃博拉勤洗手加強鍛煉避免與感染者直接接觸注意飲食衛(wèi)生身體不適立即去醫(yī)院不去有感染報道和懷疑的地方參考文獻參考文獻 埃博拉出血熱埃博拉出血熱，第四軍醫(yī)大學出版社，第一版。，第四軍醫(yī)大學出版社，第一版。 周榮平，孫麗娜，劉洋，蕪為，李川，梁米芳，周榮平，孫麗娜，劉洋，蕪為，李川，梁米芳， 仇佩虹仇佩虹.