生物化學(xué)課程教學(xué)大綱

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程教學(xué)大綱【課程編號(hào)】17315312【英文名稱】Experiments of Biochemistry【課程學(xué)時(shí)】24【適用專業(yè)】動(dòng)物科學(xué)一、本實(shí)驗(yàn)課程的教學(xué)目的和要求生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)既是生物化學(xué)理論教學(xué)的輔助教程，也是一門動(dòng)物科學(xué)專業(yè)重要的專業(yè)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)技術(shù)課程，它具有很強(qiáng)的理論性和實(shí)用性。在前導(dǎo)課程無(wú)機(jī)化學(xué)、有機(jī)化學(xué)和分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)體現(xiàn)出生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)，為后續(xù)課程如動(dòng)物遺傳學(xué)、動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)、動(dòng)物微生物學(xué)、分子生物學(xué)、動(dòng)物免疫學(xué)等實(shí)驗(yàn)課程的教學(xué)打下基礎(chǔ)。通過(guò)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的教學(xué)，使學(xué)生達(dá)到如下要求：1.在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中生物化學(xué)的理論知識(shí)進(jìn)一步驗(yàn)證、鞏固、擴(kuò)充和提高。2

2、.學(xué)會(huì)正確使用有關(guān)生化儀器。3.培養(yǎng)學(xué)生在進(jìn)行生物學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程、結(jié)果分析、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和動(dòng)手實(shí)驗(yàn)的能力，培養(yǎng)和提高學(xué)生的實(shí)驗(yàn)操作技能。4.掌握包括蛋白質(zhì)、核酸、酶、維生素、脂類和代謝各方面實(shí)驗(yàn)方法和技能，掌握離心、滴定、比色、層析、電泳等各種生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。5.培養(yǎng)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣、重視實(shí)踐、探索進(jìn)取、吃苦耐勞、團(tuán)結(jié)合作的精神。6.培養(yǎng)科研能力和科學(xué)素質(zhì)，使學(xué)生具有嚴(yán)格的科學(xué)學(xué)風(fēng)和發(fā)現(xiàn)、分析、解決問(wèn)題的初步能力。二、本實(shí)驗(yàn)課程與其它課程的關(guān)系本實(shí)驗(yàn)課程上承無(wú)機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)、分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)和有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)，下續(xù)動(dòng)物遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)、動(dòng)物微生物學(xué)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)等課程，因此生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的學(xué)習(xí)是學(xué)生進(jìn)

3、行其他生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的前奏，是今后開展動(dòng)物科學(xué)方面實(shí)驗(yàn)和研究的基礎(chǔ)。三、實(shí)驗(yàn)課程理論教學(xué)內(nèi)容安排（共安排4學(xué)時(shí)）第一部分 生物學(xué)實(shí)驗(yàn)與化學(xué)實(shí)驗(yàn)的主要區(qū)別（0.5學(xué)時(shí)）【目的】通過(guò)各個(gè)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的講授和操作，使學(xué)生熟悉生物學(xué)實(shí)驗(yàn)與化學(xué)實(shí)驗(yàn)的主要區(qū)別。【要求】1、了解實(shí)驗(yàn)的生物學(xué)性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)。2、理解空白（對(duì)照）的含義。3、掌握生物學(xué)實(shí)驗(yàn)與化學(xué)實(shí)驗(yàn)的主要區(qū)別?！窘虒W(xué)內(nèi)容】通過(guò)肝糖原的提取與鑒定、維生素的測(cè)定等實(shí)驗(yàn)掌握生物學(xué)實(shí)驗(yàn)與化學(xué)實(shí)驗(yàn)的主要區(qū)別。第一節(jié) 空白（對(duì)照）實(shí)驗(yàn)的含義第二節(jié) 空白（對(duì)照）實(shí)驗(yàn)的設(shè)定【教學(xué)重點(diǎn)】空白實(shí)驗(yàn)的意義?！窘虒W(xué)難點(diǎn)】設(shè)計(jì)空白實(shí)驗(yàn)。第二部分 比色測(cè)定的方法與原理（2.5

4、學(xué)時(shí)）【目的】通過(guò)對(duì)各種物質(zhì)的比色測(cè)定，熟悉比色測(cè)定的方法與原理?！疽蟆?、了解分光光度計(jì)的使用。2、理解實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理。3、掌握比色測(cè)定的方法與原理。【教學(xué)內(nèi)容】通過(guò)血糖、血清蛋白質(zhì)、血清總脂、血清膽固醇等的測(cè)定，掌握比色測(cè)定的方法與原理。第一節(jié) 關(guān)鍵溶液的分析與配制；第二節(jié) 比色過(guò)程的分析；第三節(jié) 結(jié)果處理方法的選擇；【教學(xué)重點(diǎn)】實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理。【教學(xué)難點(diǎn)】實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)分析。第三部分 電泳的方法與原理（1.0學(xué)時(shí)）【目的】通過(guò)電泳實(shí)驗(yàn)的理論講授，熟悉電泳的原理、電泳的結(jié)果分析和過(guò)程中的關(guān)鍵步驟?！疽蟆?、了解電泳的原理。2、理解實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析。3、掌握電泳過(guò)程中的關(guān)鍵步驟。【教學(xué)內(nèi)容

5、】通過(guò)醋酸纖維素薄膜電泳、瓊脂凝膠電泳分離血清蛋白質(zhì)，掌握電泳的方法與原理。第一節(jié) 電泳材料的前期處理；第二節(jié) 電泳過(guò)程中的關(guān)鍵步驟；第三節(jié) 電泳結(jié)果的分析；【教學(xué)重點(diǎn)】電泳的操作過(guò)程?！窘虒W(xué)難點(diǎn)】電泳過(guò)程中的關(guān)鍵步驟。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容安排1、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的類型及性質(zhì)序號(hào)實(shí)驗(yàn)名稱學(xué)時(shí)類型性質(zhì)驗(yàn)證綜合設(shè)計(jì)演示必做自選1肝糖原的提取與鑒定32維生素C含量測(cè)定及其分析63肝組織的生酮作用44比色法測(cè)血糖45血清膽固醇含量的測(cè)定46酶活性的測(cè)定67血清總蛋白的測(cè)定48血清總脂的測(cè)定69電泳分離血清蛋白410DNA的提取及含量測(cè)定611核酸濃度的測(cè)定312親和層析分離乳酸脫氫酶8實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)數(shù)合計(jì)585206019

6、39實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目數(shù)合計(jì)1211010572、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目說(shuō)明實(shí)驗(yàn)一、肝糖原的提取與鑒定【目的要求】通過(guò)對(duì)肝糖原的提取，驗(yàn)證肝糖原的提取方法和重要的鑒定特點(diǎn)。了解糖原的提取方法和分離措施,了解空白實(shí)驗(yàn)的意義，掌握糖原的性質(zhì)。【內(nèi)容】肝糖原是糖在動(dòng)物體內(nèi)的重要貯存形式，在代謝過(guò)程中是體內(nèi)糖的重要來(lái)源之一。其合成與分解對(duì)血糖的調(diào)節(jié)起重要作用。糖原是高分子化合物，分子量約400萬(wàn)，微溶解于水，無(wú)還原性，與碘作用生產(chǎn)紅色物質(zhì)。糖原的水解產(chǎn)物為葡萄糖，在堿性條件下可將Cu2+還原為紅色的CuO。【方法】乙醇提取法。實(shí)驗(yàn)二、維生素C含量測(cè)定及其分析【目的要求】要求學(xué)生在已掌握生物化學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)、基本理論和基本實(shí)驗(yàn)技能

7、的基礎(chǔ)上，在教師指導(dǎo)下，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件，完成選題、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、實(shí)驗(yàn)實(shí)施和實(shí)驗(yàn)論文撰寫等全過(guò)程。培養(yǎng)學(xué)生動(dòng)手能力、分析解決問(wèn)題的能力和創(chuàng)新思維。通過(guò)對(duì)維生素C的提取和定量，掌握維生素C的提取方法，熟悉定量分析時(shí)空白（對(duì)照）實(shí)驗(yàn)的意義以及對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)方法。【內(nèi)容】維生素C廣泛存在于植物中，其存在形式有還原型維生素C（抗壞血酸）和氧化型維生素C（脫氫抗壞血酸），新鮮的樣品中以還原型維生素C含量最高。維生素C很不穩(wěn)定，對(duì)堿、熱、光、氧、金屬離子等敏感，很容易遭到破壞。在中性和微酸性條件下穩(wěn)定，因此實(shí)驗(yàn)中常用草酸、三氯乙酸、醋酸等來(lái)提取樣品中的維生素C?！痉椒ā拷M織粉碎提取、研缽提取，碘指示，

8、2,6-二氯酚靛酚實(shí)驗(yàn)三、肝組織的生酮作用【目的要求】通過(guò)對(duì)酮體的測(cè)定和檢定，熟悉酮體的性質(zhì)和代謝過(guò)程，掌握酮體的產(chǎn)生和檢定方法。【內(nèi)容】脂肪酸在肝組織中，經(jīng)過(guò)-氧化生成乙酰-CoA，乙酰-CoA可縮合成酮體（乙酰乙酸、-羥丁酸和丙酮，除丙酮外，酮體可以作為組織器官特別是大腦的高效率能量供給者。酮體中的乙酰乙酸可以與檢酮粉生成紫紅色物質(zhì)，來(lái)檢測(cè)肝勻漿生成酶系產(chǎn)生的酮體，同時(shí)肌肉組織中沒(méi)有酮體生成酶系，不產(chǎn)生酮體?！痉椒ā客w檢測(cè)法。實(shí)驗(yàn)四、比色法測(cè)血糖【目的要求】學(xué)生通過(guò)血糖的測(cè)定，掌握血糖的提取和測(cè)定方法，了解原材料的處理過(guò)程，掌握分光光度計(jì)的使用方法及其注意事項(xiàng)。【內(nèi)容】血液中葡萄糖含量的

9、穩(wěn)定，對(duì)動(dòng)物是非常重要的，這表現(xiàn)在學(xué)糖的恒定。血糖含量的變化，是動(dòng)物重要的病理指標(biāo)。血糖測(cè)定的方法很多，本實(shí)驗(yàn)采用福林法測(cè)定，由于有其他還原性物質(zhì)的影響，得到的結(jié)果比實(shí)際的稍高，但可以剔除這些影響，推測(cè)正確的結(jié)果。【方法】蒽酮法、福林（Follin）酚法實(shí)驗(yàn)五、血清膽固醇含量的測(cè)定【目的要求】通過(guò)膽固醇的測(cè)定，熟悉膽固醇的性質(zhì)，掌握膽固醇的提取和測(cè)定方法，進(jìn)一步熟悉分光光度計(jì)的使用和數(shù)據(jù)的處理。【內(nèi)容】膽固醇是環(huán)戊烷多氫菲的衍生物，它不僅參與血漿脂蛋白的形成，而且是細(xì)胞的必須結(jié)構(gòu)成分，它可以參與神經(jīng)纖維絕緣性結(jié)構(gòu)的形成，也合成膽汁酸鹽、皮質(zhì)激素和性激素，是血液中的重要物質(zhì)。膽固醇在血液中可以游

10、離存在，也可以與載脂蛋白形成膽固醇脂，這兩種形式的膽固醇統(tǒng)稱為總膽固醇。在實(shí)踐中，甲狀腺機(jī)能減低癥、嚴(yán)重糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、黃色瘤病、糖原累積癥、肥大性關(guān)節(jié)炎和脂血癥等都引起膽固醇增多?！痉椒ā苦彵蕉兹┓?、香草醛法、硫磷鐵法等。實(shí)驗(yàn)六、酶活性的測(cè)定【目的要求】通過(guò)對(duì)酶活性的測(cè)定，了解酶活性的測(cè)定原理，掌握脂肪酶、酯酶活性的測(cè)定方法，理解酶活力和比活性含義的意義?！緝?nèi)容】酶與底物反應(yīng)后，對(duì)底物或產(chǎn)物的測(cè)定來(lái)定量酶的活性。如脂肪酶水解脂肪，產(chǎn)生的脂肪酸可用標(biāo)準(zhǔn)的堿溶液進(jìn)行滴定而測(cè)定脂肪酶的活力。酯酶可將乙酰-2,6-二氯酚靛酚水解為2,6-二氯酚靛酚，測(cè)定2,6-二氯酚靛酚的含量即可測(cè)出酯酶的

11、活力。【方法】比色法、層析法；實(shí)驗(yàn)七、血清總蛋白的測(cè)定【目的要求】本實(shí)驗(yàn)采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定血清中的蛋白質(zhì)含量。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，了解蛋白質(zhì)的性質(zhì)，熟悉蛋白質(zhì)的測(cè)定方法、比色原理?！緝?nèi)容】蛋白質(zhì)是一切生物體內(nèi)的重要組成部分，是二十余種氨基酸以肽鍵相互連接而成的復(fù)雜高分子化合物，在水溶液中形成親水膠體。血漿中主要含清蛋白、球蛋白和纖維蛋白，血清中則主要是清蛋白和球蛋白?！痉椒ā縿P氏微量定氮法、酚試劑（格林勃Greenberg法）、雙縮脲法、紫外吸收法、考馬斯亮藍(lán)法等。實(shí)驗(yàn)八、血清總脂的測(cè)定【目的要求】通過(guò)總脂的測(cè)定，熟悉血清脂類的組成和性質(zhì)，掌握處理血清樣品的基本技能和測(cè)定血清總脂的方法?！緝?nèi)容】脂類化

12、合物是人類、動(dòng)物和植物組織的基本組成成分和氧化供能物質(zhì)之一，它包括真脂和類脂兩大類?！痉椒ā糠止夤舛确▽?shí)驗(yàn)九、電泳分離血清蛋白【目的要求】通過(guò)電泳操作，了解采用各種支持物電泳分離血清蛋白質(zhì)的原理和方法，掌握電泳的基本技能和關(guān)鍵操作步驟?！緝?nèi)容】電泳技術(shù)是重要的生物學(xué)技術(shù)，它將分離混合物和定量測(cè)定結(jié)合起來(lái)。電泳的方法很多，有顯微電泳、區(qū)帶電泳和自由界面電泳，其中的區(qū)帶電泳的應(yīng)用很廣泛。區(qū)帶電泳按支持物的不同又有濾紙及其他纖維薄膜（玻璃纖維、聚氯乙烯纖維、醋酸纖維素）、粉末電泳（纖維素粉、淀粉、玻璃粉等）、凝膠電泳（瓊脂、聚丙烯酰胺凝膠、硅膠、淀粉凝膠等）和線絲電泳（尼龍線、人造絲等）。從對(duì)象看，

13、電泳分離血清蛋白質(zhì)、同工酶（乳酸脫氫酶）、核酸的水解產(chǎn)物等?！痉椒ā看姿崂w維素薄、凝膠電泳。實(shí)驗(yàn)十、DNA的提取與定量測(cè)定【目的要求】了解DNA的性質(zhì)與提取特點(diǎn)，掌握DNA的提?。}沉淀提?。┓椒ㄒ约皽y(cè)定DNA含量的原理和方法?！緝?nèi)容】可選擇豬脾臟、豬心、肝臟等。1、制備組織勻漿；2、除去蛋白質(zhì)提取DNA；3、用紫外吸收法、定磷法或化學(xué)法測(cè)定DNA的含量和純度。4、Folin-酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量?！痉椒ā控i脾臟、豬心、肝臟等原料中提取DNA并進(jìn)行定量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)十一、核酸濃度的測(cè)定【目的要求】通過(guò)測(cè)定核酸濃度，掌握核酸的紫外吸收特性和測(cè)定核酸濃度的原理和方法?！緝?nèi)容】鉬酸銨與核酸中的磷酸生成

14、磷鉬酸，當(dāng)有還原劑（如抗壞血酸存在時(shí)，磷鉬酸被還原為藍(lán)色的鉬藍(lán)，在660nm處有最大的光吸收而測(cè)定出核酸的含量。另外，核酸在260nm的紫外處有最大的光吸收，因此可用紫外比色法測(cè)定核酸的含量。【方法】定磷法、紫外分光光度比色法；實(shí)驗(yàn)十二、親和層析分離乳酸脫氫酶【目的要求】通過(guò)乳酸脫氫酶的分離，掌握分離豬骨骼肌中乳酸脫氫酶的方法，熟悉親合層析的原理。【內(nèi)容】通過(guò)親和層析劑的制作、親和吸附與洗脫，了解親和層析的操作方法。在層析前后對(duì)乳酸脫氫酶活性、總蛋白質(zhì)的測(cè)定，來(lái)理解親和層析的特點(diǎn)?！痉椒ā坑H和層析法。五、選用教材及主要參考書1、教材動(dòng)物生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，周順伍，北京農(nóng)業(yè)大學(xué)，中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，20002、參考書生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)原理和方法，李建武等，北京大學(xué)出版社，2002生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程，劉箭，科學(xué)出版社，2004基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，余冰賓，清華大學(xué)出版社，2004生化化學(xué)實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)，陳毓荃，科學(xué)出版社，2005現(xiàn)代生化技術(shù)第二版，郭勇，科學(xué)出版社，2005生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)俞建瑛等，化學(xué)工業(yè)出版社，2005基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，呂淑霞，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2003基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)(第2版)，王秀奇等，高等教育