基因操作與醫(yī)學PPT課件

1、2021年12月14日17時22分1The Significance of Gene Manipulating in Medical Develapments第1頁/共58頁基因操作技術在醫(yī)學方面的價值主要包括：（1） 疾病相關基因和疾病分子機制的分析家；（5）高效率、低成本地生產用于疾病防治的生物 活性蛋白質、細胞、器官。（2） 建立新的疾病診斷方法-基因診斷；（4）糾正人類基因缺陷的方法）糾正人類基因缺陷的方法-基因治療；基因治療；（3）發(fā)展出新的法醫(yī)學鑒定方法-法醫(yī)學鑒定；2021年12月14日17時22分2第2頁/共58頁2021年12月14日17時22分3一、疾病相關基因分析 要確認

2、某一疾病的相關基因，就是利用不同的方法將各種基因確定到染色體的實際位置上，并分析基因的結構和疾病狀態(tài)下基因的突變。 1911年Wilson將紅綠色盲基因首次定位到X染色體上，開創(chuàng)了人類基因定位的先河。 1968年Donahue利用系譜分析將Duffy血型基因定位于1號染色體上，這是人類首次將基因定位于常染色體上。第3頁/共58頁2021年12月14日17時22分4 20世紀80年代以前，可進行結構分析的疾病相關基因僅限于個別功能異常非常明確，基因表達產物純化較易的遺傳性疾病，尤其是血液系統(tǒng)疾病如鐮刀狀貧血、地中海貧血等。 20世紀80年代中期以后，隨著分子生物學技術的發(fā)展，尤其是重組DNA技術

3、水平的提高和PCR技術的廣泛應用，使疾病相關基因的鑒定與克隆工作得以迅速發(fā)展。第4頁/共58頁2021年12月14日17時22分5（一）功能性克隆(functional cloning)從對一種致病基因的功能理解出發(fā)，克隆該致病從對一種致病基因的功能理解出發(fā)，克隆該致病基因。實際上是利用純化蛋白克隆致病基因。基因。實際上是利用純化蛋白克隆致病基因。u獲得純化蛋白后的基因克隆方式有兩種：獲得純化蛋白后的基因克隆方式有兩種：獲取部分氨基酸序列，推導出獲取部分氨基酸序列，推導出mRNA序列，合成序列，合成 寡核苷酸探針，篩選寡核苷酸探針，篩選 cDNA 文庫；從基因組文庫文庫；從基因組文庫 獲取其基

4、因組序列。獲取其基因組序列。 制備特異性抗體，篩選表達型制備特異性抗體，篩選表達型cDNA文庫。文庫。只要能獲得部分氨基酸序列就可以進行基因克隆。只要能獲得部分氨基酸序列就可以進行基因克隆。第5頁/共58頁2021年12月14日17時22分6u根據根據mRNAmRNA表達差異來克隆疾病相關基因：表達差異來克隆疾病相關基因：（1 1）削減雜交）削減雜交(subtractive hybridization)(subtractive hybridization)（2 2）差異顯示（）差異顯示（differential displaydifferential display）PCRPCR（3 3）基于

5、）基于PCRPCR的削減雜交法的削減雜交法 將正常與異常的同一組織的mRNA或cDNA文庫進行雜交，篩選出表達有差異的克??； 能很靈敏地擴增兩個mRNA樣品中有差異的片段，克隆后進行分析； 將前兩種方法結合起來，克服了削減雜交靈敏度低，差異顯示PCR假陽性高的缺點。第6頁/共58頁2021年12月14日17時22分7缺點：缺點： 大多數癥狀的生理、生化變化很復雜，對與之有關的蛋白質了解甚少，對其基因表達主要組織也知之不多。 不同組織甚或至于同一組織的蛋白質與mRNA的“正?！辈町惡茈y與特異性差異區(qū)別。 功能性克隆技術成熟、方法直接、費用較低，迄今仍是克隆基因的首選策略。優(yōu)點：優(yōu)點：第7頁/共5

6、8頁2021年12月14日17時22分8（二）定位克?。╬ositional cloning）從一種致病基因的染色體定位出發(fā)，逐步縮小范圍，最后克隆該基因 。系統(tǒng)的定位克隆包含：遺傳學分析：遺傳學分析：分子生物學分析：分子生物學分析： 包括交換分析和連鎖不平衡分析以確定致病基因的染色體定位； 包括染色體異常（缺失、易位等）分析和基因文庫的篩選與基因克隆。第8頁/共58頁2021年12月14日17時22分9杜氏肌營養(yǎng)不良杜氏肌營養(yǎng)不良(DMD) 致病基因的克?。褐虏』虻目寺。?首先，遺傳學的家族連鎖分析確定了致病基因位于Xp21（性染色體X短臂第2區(qū)第1條帶）。 將病人的Xp21 DNA與正常

7、人的雜交，從而減掉了相同的基因序列，最后剩余的序列即為病人缺失的基因。第9頁/共58頁2021年12月14日17時22分10新的技術非定位候選基因克隆策略(position-independent candidate gene approaches)：定位候選基因克隆策略 ( positional candidate gene approaches)： 直接根據分子病理學變化和基因組作圖中各種基因產物功能的了解預測出候選致病基因。 一旦致病基因的染色體定位得以確認，可以利用因特網上的基因網站所提供的基因序列數據鑒定出候選致病基因。第10頁/共58頁2021年12月14日17時22分11（三）基

8、因結構和產物功能的分析利用對于某基因結構和功能的理解，分析其與利用對于某基因結構和功能的理解，分析其與疾病的關系、是否有突變、突變產物的致病機制。疾病的關系、是否有突變、突變產物的致病機制。獲得未知基因后可進一步進行下列工作：1 1克隆和分析全長克隆和分析全長cDNAcDNA序列：序列：根據根據cDNA序列推出序列推出該基因編碼的蛋白質的氨基酸序列；該基因編碼的蛋白質的氨基酸序列；2 2克隆基因全序列：克隆基因全序列：分析存在的內含子，啟動子分析存在的內含子，啟動子以及其調節(jié)位點，探討基因表達調控方式；以及其調節(jié)位點，探討基因表達調控方式；3 3確定基因在的位置和拷貝數：確定基因在的位置和拷貝

9、數：染色體中定位多染色體中定位多用原位雜交法，拷貝數可用用原位雜交法，拷貝數可用Southern雜交法確定。雜交法確定。第11頁/共58頁2021年12月14日17時22分124 4基因表達譜分析：基因表達譜分析：該基因在不同組織、細胞的表該基因在不同組織、細胞的表達狀態(tài)。達狀態(tài)。Northern blotting和點陣雜交檢測和點陣雜交檢測mRNA的的水平。水平。Western blotting檢測蛋白質的表達。檢測蛋白質的表達。5 5基因表達產物的功能分析：基因表達產物的功能分析：（1）找已知功能的同源蛋白或同源結構域。）找已知功能的同源蛋白或同源結構域。（2）在細胞內過量表達該基因，觀察

10、各種功能影響。）在細胞內過量表達該基因，觀察各種功能影響。（3）在細胞內抑制該基因表達，分析細胞功能變化；）在細胞內抑制該基因表達，分析細胞功能變化； 建立基因剔除小鼠，分析基因產物功能。建立基因剔除小鼠，分析基因產物功能。（4）分析與該基因產物相互作用分子，或者是相互）分析與該基因產物相互作用分子，或者是相互 作用的蛋白分子或核酸。作用的蛋白分子或核酸。第12頁/共58頁2021年12月14日17時22分13二、制造生物活性蛋白二、制造生物活性蛋白 基因工程技術的發(fā)展在醫(yī)學上最重要的成就表現在治療用生物活性蛋白或疫苗的生產和使用。 通過基因的克隆，可獲得具有特定生物學活性的蛋白質。這尤其適用

11、于那些來源特別有限的蛋白質，或自然界本不存在的蛋白質。 克隆基因的表達可在大腸桿菌、枯草桿菌、酵母、昆蟲細胞、哺乳類細胞或整體動物體內。第13頁/共58頁2021年12月14日17時22分14生物安全性：生物安全性：活性的可控性：活性的可控性：資源和生產成本：資源和生產成本： 未發(fā)現諸有如此類豬胰島素、牛腦垂體提取的生長激素、人血VIII因子的副作用。 基因工程產品的可重復性要好于生物提取物。 無資源依賴性，生產成本也明顯低于生物提取。基因工程產品比生物提取產品有明顯的優(yōu)勢：基因工程產品比生物提取產品有明顯的優(yōu)勢：第14頁/共58頁產品名稱產品名稱適應癥適應癥乙型肝炎表面抗原乙型肝炎表面抗原人

12、胰島素人胰島素生長激素生長激素組織肝淳蛋白激活物（組織肝淳蛋白激活物（TPA）-干擾素干擾素-干擾素干擾素-干擾素干擾素促紅細胞生成素促紅細胞生成素（EPO）*粒細胞刺激因子（粒細胞刺激因子（GSF）粒細胞粒細胞-巨噬細巨噬細胞刺激因子（GMSF）*表表皮生長因子（皮生長因子（EGF）第第VIII因子因子第第IX因子因子白細胞介素白細胞介素2（IL-2）白細胞介素白細胞介素3（IL-3）白細胞介素白細胞介素4（IL-4）干細胞生長因子（干細胞生長因子（SCF）抗抗CD3抗體抗體CAMPATH-1HCAMPATH-1H（淋巴細胞抗體）（淋巴細胞抗體）抗內毒素抗體抗內毒素抗體抗腫瘤壞死因子抗體抗腫

13、瘤壞死因子抗體注射疫苗用于預防乙型肝炎注射疫苗用于預防乙型肝炎糖尿病糖尿病垂體功能低下垂體功能低下急性心肌梗塞急性心肌梗塞慢性髓系白血病，骨髓瘤慢性髓系白血病，骨髓瘤乙型肝炎，艾滋病人并發(fā)乙型肝炎，艾滋病人并發(fā)kaposis肉瘤肉瘤多發(fā)性硬化（試用）多發(fā)性硬化（試用）抗抗貧血貧血*腎性貧血腎性貧血化化療后白細胞和內體骨髓移植再療后白細胞和內體骨髓移植再生生*嚴重燒傷嚴重燒傷血友病血友病A，B血友病血友病A，B腫瘤免疫治療腫瘤免疫治療化療后促進髓母細胞形成化療后促進髓母細胞形成免疫缺陷病，腫瘤，免疫佐劑免疫缺陷病，腫瘤，免疫佐劑骨髓移植前擴增骨髓干細胞骨髓移植前擴增骨髓干細胞器官移植器官移植類風

14、濕性關節(jié)炎，非何杰金氏淋巴瘤類風濕性關節(jié)炎，非何杰金氏淋巴瘤革蘭氏陽性菌感染革蘭氏陽性菌感染嚴重炎癥，類風濕性關節(jié)炎嚴重炎癥，類風濕性關節(jié)炎表7-1 臨床正在使用或試用的部分基因工程產品2021年12月14日17時22分15第15頁/共58頁質粒質粒噬菌體噬菌體病毒病毒目的基因（外源基因）目的基因（外源基因）基因組基因組DNA cDNA 人工合成人工合成PCR產物產物限制酶消化限制酶消化連接酶連接酶轉化轉化 體外包裝，轉染體外包裝，轉染篩選篩選2021年12月14日17時22分16第16頁/共58頁 是在編碼蛋白質基因的特定位置引入堿基替代、是在編碼蛋白質基因的特定位置引入堿基替代、產生小的堿

15、基缺失或插入，使其編碼的蛋白質的一產生小的堿基缺失或插入，使其編碼的蛋白質的一級結構發(fā)生改變。級結構發(fā)生改變。 在合成在合成PCRPCR引物時，除了在定點誘變的位置引引物時，除了在定點誘變的位置引入相應的突變（點突變、小片段插入或缺失）外，入相應的突變（點突變、小片段插入或缺失）外，其余序列與模板完全配對其余序列與模板完全配對 PCR擴增后，產物中就引入特定的突變；將PCR產物克隆表達，可獲得定點突變的蛋白質。PCR誘變：2021年12月14日17時22分171.蛋白質工程中的定點誘變技術第17頁/共58頁 包括表達載體的構建、受體細胞的建立和表達產物的分離、純化等技術和策略。 涉及目的基因的

16、克隆、復制、轉錄、翻譯、蛋白質產物的加工及分離純化等過程，需要在適合的表達系統(tǒng)中完成。 表達系統(tǒng)可根據受體細胞的不同分為和。2021年12月14日17時22分18第18頁/共58頁大多是穿梭載體2021年12月14日17時22分19第19頁/共58頁大腸桿菌（大腸桿菌（E.coliE.coli）表達體系最常用）表達體系最常用 優(yōu)點是培養(yǎng)方法簡單、迅速、經濟而又適合大規(guī)模生產。 2021年12月14日17時22分20第20頁/共58頁 在真核細胞中表達外源基因的體系主要有酵母、昆蟲細胞（桿狀病毒）、哺乳動物和高等植物。2021年12月14日17時22分21 常用的瞬時表達宿主是來源于非洲綠猴腎C

17、V-1細胞的COS細胞。 常用的穩(wěn)定表達宿主細胞是來源于中國倉鼠卵巢的CHO細胞。第21頁/共58頁2021年12月14日17時22分22（二）轉基因技術簡介轉基因技術轉基因技術(transgenic technique) 利用DNA重組技術在動物體內引入可遺傳給子代的外源基因的技術。被導入的目的基因Microinjection into the Pronucleus of a Bovine Zygote ：目的基因的受體動物第22頁/共58頁基本原理 采用基因轉移技術將目的基因導入受精卵的細胞核內或著床前的胚胎干細胞，然后將細胞導入受體動物子宮，使之發(fā)育成個體。 2021年12月14日17時

18、22分23u基因的導入方式：顯微注射法(最常用)胚胎干細胞法逆轉錄病毒感染法 第23頁/共58頁2021年12月14日17時22分24u顯微注射是最早發(fā)展，也是最為有效的外源顯微注射是最早發(fā)展，也是最為有效的外源 基因導入方法?；驅敕椒ā⒛康幕蛑苯幼⑸涞绞芫褍?，目的基因即可與 受精卵的染色體整合，最終可產生帶有外源基因的 轉基因動物。轉基因動物發(fā)育后，在其體細胞和生殖細胞中都有 外源基因的存在和表達，并可將該基因遺傳給子代?？梢栽跀y帶外源基因的載體內加上組織特異性啟動 子，從而在轉基因動物體內限定表達外源基因的組 織和器官。第24頁/共58頁顯微注射法建立轉基因鼠技術路線目的基因供體

19、動物受精卵受體動物輸卵管動物幼崽轉基因動物微注射移植妊娠出生分子檢測2021年12月14日17時22分25第25頁/共58頁1982年哈佛“制造”的“超級小鼠” 其中有七只帶有融合基因，六只生長迅速，每只體重平均可達44g，為同窩無融合基因小鼠平均體重29g的1.5倍。 把這種重組的質粒注射入小鼠受精卵中，經過充分發(fā)育后分娩出了21小鼠。 將大鼠生長激素基因與小鼠金屬硫蛋白基因的啟動子順序連接，再引入質粒中。轉基因小鼠正常小鼠2021年12月14日17時22分26第26頁/共58頁2000年法國科學家“制造”出發(fā)出綠色熒光的兔子“Alba”。 改造水母的熒光蛋白基因使熒光蛋白發(fā)光率提高了2倍，

20、再將該基因顯微注射轉入到兔子的受精卵中，由此培養(yǎng)出了會發(fā)光的兔子Alba。 在普通光線下它看上去與其它同類沒有區(qū)別，但在較暗光線下它的身體就會放射出奇異的綠光。 2021年12月14日17時22分27第27頁/共58頁u乳腺生物反應器的誕生 1987年Gordon等將組織型纖溶酶原激活劑(tPA)與小鼠乳清蛋白基因的啟動子構成重組基因，培育出了37只在乳汁中能表達tPA 的轉基因小鼠。2021年12月14日17時22分28第28頁/共58頁動物動物多肽藥物多肽藥物用途用途綿羊綿羊a1抗胰蛋白酶蛋白抗胰蛋白酶蛋白治療氣腫治療氣腫綿羊綿羊CFTR治療治療 囊腫性纖維化囊腫性纖維化綿羊綿羊組織型纖溶

21、酶原活化因子組織型纖溶酶原活化因子治療血栓治療血栓綿羊綿羊凝血凝血VIII因子、因子、IX因子因子治療血友病治療血友病綿羊綿羊纖維蛋白原纖維蛋白原傷口愈合傷口愈合豬豬組織型纖溶酶原活化因子組織型纖溶酶原活化因子治療血栓治療血栓豬豬凝血凝血VIII因子、因子、IX因子因子治療血友病治療血友病山羊山羊人蛋白質人蛋白質 C治療血栓治療血栓山羊山羊抗血栓因子抗血栓因子 3治療血栓治療血栓山羊山羊谷氨酸脫羧酶谷氨酸脫羧酶治療治療I型糖尿病型糖尿病山羊山羊Pro542治療愛滋治療愛滋 病病牛牛a-乳清白蛋白乳清白蛋白抗炎癥抗炎癥牛牛凝血凝血VIII因子因子治療血友病治療血友病牛牛纖維蛋白原纖維蛋白原傷口愈

22、合傷口愈合牛牛膠原蛋白膠原蛋白 I, II組織修復組織修復, 治療風濕性關節(jié)炎治療風濕性關節(jié)炎牛牛乳鐵蛋白乳鐵蛋白治療腸道感染治療腸道感染, 感染性關節(jié)炎感染性關節(jié)炎牛牛人血清白蛋白人血清白蛋白維護血液體積維護血液體積雞雞, 牛牛, 山羊山羊單克隆抗體單克隆抗體用于疫苗生產用于疫苗生產2021年12月14日17時22分29第29頁/共58頁2021年12月14日17時22分30第30頁/共58頁u顯微注射法等傳統(tǒng)的轉基因技術具有隨機性和不可預見性、整合率、表達低等式缺陷。外源基因的拷貝數和整合位點都是隨機的；小鼠,大鼠,兔,牛,豬,綿羊陽性率分別為26%、44%、15%、0.7%、0.9%、0

23、.9%。 整合率極低，得到的轉基因動物數量更少。采用非受精卵還出現嵌合體；受到宿主染色體上整合位點的影響，大部分轉 基因表達水平較低。2021年12月14日17時22分31第31頁/共58頁 即體細胞克隆技術，是用顯微操作、電融合等方法將動物體細胞的細胞核全部導入另一個個體的去除細胞核的卵細胞內，使之發(fā)育成為個體。2021年12月14日17時22分32 核轉移技術可使一個細胞變成一個個體，所產生的個體攜帶的遺傳物質與細胞核供體的遺傳物質完全一樣，是一種無性繁殖過程，即克隆(clone)。（三）核轉移技術簡介第32頁/共58頁2021年12月14日17時22分331.動物克隆轉移的核末經修飾第3

24、3頁/共58頁2021年12月14日17時22分34第34頁/共58頁2021年12月14日17時22分35多利羊誕生于多利羊誕生于1996年年7月月5日，日，1997年首年首次向公眾披露。次向公眾披露。被美國被美國科學科學雜雜志評為志評為1997年世界十年世界十大科技進步的第一項，大科技進步的第一項，也是當年最引人注目也是當年最引人注目的國際新聞之一。的國際新聞之一?？茖W家認為，科學家認為，“多多利利”的誕生標志著生的誕生標志著生物技術新時代的來臨。物技術新時代的來臨。u1997年2月27日Nature報道，維爾穆特(Wilmut)和坎貝爾(Campbell)利用克隆技術培育出一只小母羊。第

25、35頁/共58頁2021年12月14日17時22分36 坎貝爾利用克隆多利時冷凍保存下來的，同一只母羊乳腺組織樣本，克隆出“多利四羊組”。第36頁/共58頁 轉基因動物可以作為天然的生物工廠，合成多肽和蛋白質等生物活性物質，制備藥物、抗體和疫苗等，稱為動物生物反應器(animal bioreactor)。 生物藥物生產主要通過乳腺生產(動物乳腺生物反應器)，少數通過腎臟和膀胱。 用于表達的生物反應器包括動物血液、泌尿系統(tǒng)、精囊腺、乳腺等，還包括禽蛋和昆蟲（例如家蠶）個體等。2.轉基因動物生物反應器的制備 轉移的核經過修飾2021年12月14日17時22分37第37頁/共58頁2021年12月1

26、4日17時22分38u1997年6月伊恩維爾穆特(Wilmut)報道用基因改造過的胎兒成纖維細胞為核供體，獲得了表達人凝血因子IX的轉基因克隆綿羊“波莉”。成功克隆出攜帶有人凝血因子成功克隆出攜帶有人凝血因子X基因的綿羊早期基因的綿羊早期 胚胎成纖維細胞；胚胎成纖維細胞；以該細胞系為核供體移植到去核卵母細胞中，經以該細胞系為核供體移植到去核卵母細胞中，經 過處理后將卵母細胞植入假孕綿羊體內發(fā)育。過處理后將卵母細胞植入假孕綿羊體內發(fā)育。獲得獲得3只能高水平表達人凝血因子只能高水平表達人凝血因子X（125g/ml） 的綿羊。的綿羊。第38頁/共58頁 人體移植器官短缺是一個世界性難題，研究人員把目

27、光移向動物以尋求可替代移植器官。 豬器官的體積、形狀和DNA基本與人類相似，是理想的器官供應者，但這種器官移植的主要問題之一是免疫排斥。 三、制造用于移植的細胞、組織和器官三、制造用于移植的細胞、組織和器官2021年12月14日17時22分39第39頁/共58頁解決辦法之一：通過轉基因技術，特別是基因打靶技術：通過轉基因技術，特別是基因打靶技術：敲除敲除-半乳糖抗原決定基因，再結合克隆技術，半乳糖抗原決定基因，再結合克隆技術，培育大量不含免疫排斥的轉基因克隆豬的器官。培育大量不含免疫排斥的轉基因克隆豬的器官。 向供體器官基因組向供體器官基因組敲入敲入某種調節(jié)因子，抑制某種調節(jié)因子，抑制-半半乳

28、糖抗原決定基因的表達；乳糖抗原決定基因的表達；2021年12月14日17時22分40第40頁/共58頁2021年12月14日17時22分41（一）基因打靶技術簡介 可在細胞水平進行，從而建立新的細胞系；也可在動物整體水平進行，以建立基因剔除動物。 基因打靶(Gene targeting)，是一種在胚胎干細胞(ES)技術和同源重組技術的基礎之上，定向改變生物體內某種基因的技術。基因敲除(gene knockout)：定向敲除某種基因基因敲入(gene knockin)：定向替代某種基因第41頁/共58頁2021年12月14日17時22分42基本過程包括：基本過程包括： 用同源基因片段構建含有目的

29、基因的載體；用同源基因片段構建含有目的基因的載體；用顯微注射法將含有目的基因的載體導入用顯微注射法將含有目的基因的載體導入ES細胞，細胞， 與與ES細胞染色體的相應基因發(fā)生同源重組，替代細胞染色體的相應基因發(fā)生同源重組，替代 ES細胞中原有的基因；細胞中原有的基因；將基因替代了的將基因替代了的ES細胞注入動物的囊胚中，使其細胞注入動物的囊胚中，使其 與囊胚中的細胞共同組成囊胚內的細胞團；與囊胚中的細胞共同組成囊胚內的細胞團；將囊胚移植到假孕動物的子宮中，使之發(fā)育成一將囊胚移植到假孕動物的子宮中，使之發(fā)育成一 種既有含目的基因細胞又有原有細胞的嵌合體；種既有含目的基因細胞又有原有細胞的嵌合體；將

30、嵌合體動物與正常動物交配，最終篩選出基因將嵌合體動物與正常動物交配，最終篩選出基因 替代的純合子動物。替代的純合子動物。第42頁/共58頁跨物種感染：跨物種感染： 一般不會感染人的病毒，通過異種器官移植提供的種間細胞親密接觸，可能感染人或者與人的病毒重組形成更危險更致命的病毒，而且免疫系統(tǒng)受到抑制的移植受體比一般人更容易被感染。 更加重要的是，轉基因動物帶的未知病毒是否會從移植受體擴散出去，從而傳播到其他人造成疫病大流行，引起流行病？風險2021年12月14日17時22分43第43頁/共58頁組織工程 是利用人體自身細胞和組織工程的理論與方法，使原先缺損的組織和器官沿著設計好的支架、模型順其自

31、然地成長起來發(fā)。2021年12月14日17時22分44多能干細胞的定向分化多能干細胞的定向分化第44頁/共58頁 2006年，京都大學的山中伸彌(Shinya Yamanaka) 從24個候基因中篩選出4個與胚胎干細胞多能性更為密切相關的基因：Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4； 證實了分化的細胞可以通過少數幾個因子的外源導入而被重編程到具有多能性的狀態(tài)。 將它們導入到小鼠胚胎成纖維細胞和鼠尾成纖維細胞，成功地將其重編程為具有胚胎干細胞多能性的細胞，稱之為誘導多能干細胞(induced pluripotent stem cell, iPS cell) 。（二）誘導產生的多功能性干細胞技術

32、2021年12月14日17時22分45第45頁/共58頁1. Oct3/4Oct-4，也稱，也稱Oct-3，屬于，屬于POU轉錄因子家族的一員。轉錄因子家族的一員。是哺乳動物胚胎發(fā)育的一個關鍵的調控因子。是哺乳動物胚胎發(fā)育的一個關鍵的調控因子。是全能性的標志；是全能性的標志；能夠促使能夠促使ICM形形成、維持胚胎干細成、維持胚胎干細胞未分化前狀態(tài)，胞未分化前狀態(tài)，并促進其增殖。并促進其增殖。2021年12月14日17時22分46第46頁/共58頁2.SOX2基因基因 SOX2基因是編碼轉錄因子的主控基因（master genes）家族的一個成員。 轉錄因子是些與DNA結合并調節(jié)其他基因表達的蛋

33、白質。2021年12月14日17時22分47第47頁/共58頁3.癌癥基因癌癥基因c-MYC 癌癥基因c-MYC，是一種最容易過渡表現于人類的致癌基因， 它對某些成體干細胞的自我更新起一定的作用，并可以抑制ES細胞的分化。2021年12月14日17時22分48第48頁/共58頁4.Klf4 Krueppel-like factor 4，KLF4上皮鋅指轉錄上皮鋅指轉錄因子因子Klf4 (舊稱舊稱GKLF) 調節(jié)體外細胞的增生調節(jié)體外細胞的增生與分化與分化 。 2021年12月14日17時22分49第49頁/共58頁誘導式多能性干細胞實驗流程式2021年12月14日17時22分50第50頁/共58頁制定