反相高效液相色譜法測(cè)定吸入用異丙托溴銨溶液的含量(精)

1、反相高效液相色譜法測(cè)定吸入用異丙托 溴銨溶液的含量（1）】目的：采用反相高效液相色譜法測(cè)定吸入用異丙托溴銨溶液的含量。方法：色譜柱為 phenomenex C8 （ 4.6 mmx 250 mm5卩m）,流動(dòng)相為乙腈0.25%庚烷磺酸鈉溶液（29 : 71 ）用磷酸調(diào)pH值至3.2 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm；流速為1.0 mL/min ;進(jìn)樣量20卩L。結(jié)果：異丙托 溴銨在12.8256卩g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.9995 , 日 間、日內(nèi)RSD勻小于1.5%。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確可靠，可用于吸入用異丙托溴銨 溶液的質(zhì)量控制【關(guān)鍵詞】 異丙托溴銨；含量測(cè)定；高效液相色譜法異丙

2、托溴銨是一種具有抗膽堿能特性的四價(jià)銨化合物，可競(jìng)爭(zhēng)性抑制乙酰膽堿 對(duì)氣道平滑肌的收縮作用。通過(guò)抑制細(xì)胞內(nèi)cGM吐成，減少cAMP降解，降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，使氣道平滑肌松弛，肥大細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)下降，終止氣 道擴(kuò)張，呼吸阻力減小。吸入異丙托溴銨后，作用只限于肺部擴(kuò)張支氣管，而 不作用于全身，主采用氣霧吸入給藥1。吸入用異丙托溴銨溶液在臨床上應(yīng) 用較廣泛，主采用壓縮霧化吸入或超聲霧化吸入給藥，常用于預(yù)防和治療兒童 支氣管哮喘。本文考察了異丙托溴銨含量的HPLC測(cè)定方法，為制劑的質(zhì)量控制提供了方法學(xué)依據(jù)。1儀器與材料LC 10ATvp高效液相色譜儀（日本島津公司）；異丙托溴銨對(duì)照品 （購(gòu)自浙江優(yōu)聯(lián)

3、醫(yī)藥化工有限公司，經(jīng)精制后色譜峰為單峰）；吸入用異丙托 溴銨溶液（愛(ài)全樂(lè)）購(gòu)自德國(guó)勃林格殷格翰國(guó)際公司（批號(hào) 638066,規(guī)格為含 異丙托溴銨2 mL： 500卩g）；庚烷磺酸鈉為離子對(duì)色譜試劑，純度 99%， 購(gòu)自上海億日化工科技有限公司；乙腈為色譜純；其它試劑為分析純。2含量測(cè)定2.1色譜條件參照文獻(xiàn)2 4,選定試驗(yàn)條件為：C8色譜柱（phenomenex C85卩m, 4.6 mmx 250 mn）;流動(dòng)相為乙腈0.25%庚烷磺酸鈉溶液（29 : 71） 用磷酸調(diào)pH至3.2 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm；流速為1.0 mL/min ;進(jìn)樣量20卩Lo2.2對(duì)照品貯備液的制備精密稱取在五氧

4、化二磷干燥器中減壓干燥 24h的異丙托溴銨對(duì)照品12.80 mg，精密稱定，置10.0 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖 勻，制成濃度為1.28 mg/mL的異丙托溴銨對(duì)照品液，備用。2.3供試品溶液的制備取本品15瓶，合并內(nèi)容物，混勻，精密量取 10 mL，置50 mL量瓶 中，加0.001 mol/L鹽酸溶液 甲醇（1 : 1）稀釋至刻度，搖勻，作為供試品 溶液。2.4系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)取溴化鉀適量，用流動(dòng)相溶液溶解制成溴化鉀溶液。精密吸取溴化鉀 溶液、“ 2.2 ”、“ 2.3 ”項(xiàng)下溶液適量，分別按“ 2.1 ”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè) 定，記錄色譜圖，詳見圖1。由圖1可知，與異丙托溴銨

5、對(duì)照品比較，供試品 異丙托溴銨色譜峰分離良好，符合高效液相色譜法的求，且溴離子不影響本品 含量測(cè)定。異丙托溴銨的出峰時(shí)間約在22 min。2.5最低檢測(cè)限和最低定量限取異丙托溴銨對(duì)照品適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成供試 液，按上述色譜條件取10卩L進(jìn)樣。經(jīng)試驗(yàn)，當(dāng)進(jìn)樣濃度為0.3卩g/mL時(shí), 信噪比為3 : 1,即最低檢測(cè)限為0.3卩g/mLX 10卩L=3 ng ;當(dāng)進(jìn)樣濃度為 1.1卩g/mL時(shí)，信噪比為10 : 1，即最低檢測(cè)限為1.1卩g/mLX 10卩L=11ngo2.6線性范圍考察取對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別精密吸取 0.1、0.2、0.4、0.8、2.0 mL,置10 mL量瓶中

6、，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得濃度依次為12.8、25.6、51.2、102.4、256卩g/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。照上述色譜條件，進(jìn)樣 20卩L,以樣品 濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為：r=0.9995 ，線性范圍為 12.8A=5900.864C 16415，256 卩 g/mL。2.7 精密度試驗(yàn)分別取12.8、51.2、2560卩g/mL三種濃度的對(duì)照品溶液，于 1 d內(nèi) 分別進(jìn)樣5次及5 d內(nèi)分別進(jìn)樣5次，分別計(jì)算日內(nèi)、日間RSD結(jié)果見表1。 表 1 精密度試驗(yàn)結(jié)果（略）2.8 樣品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取批號(hào)為 638066的樣品，按“ 2.3”項(xiàng)下方法制備

7、供試品溶液，在 12 h內(nèi)每隔3 h進(jìn)樣測(cè)定1次，測(cè)得RSD為1.30%,表明在12 h內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定 性較好。2.9 重復(fù)性試驗(yàn)取批號(hào)為 638066的樣品，按“ 2 . 3 ”項(xiàng)下方法平行制備 5份供試品溶 液，分別進(jìn)樣，測(cè)得RSD為1.03%，表明該法重復(fù)性較好。2.10 回收率試驗(yàn)取異丙托溴銨對(duì)照品約16 mg、20 mg和24 mg各三份，精密稱定，按處方比例加入空白輔料適量，按“ 2.1 ”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表 2。表 2 回收率試驗(yàn)結(jié)果（略）2.11 樣品含量測(cè)定取批號(hào)為 638066樣品，按“ 2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè) 定，樣品含量測(cè)定結(jié)

8、果為 98.8%。3 討論異丙托溴銨為溴化季銨鹽，在溶液狀態(tài)下，其溴以離子形式存在 3，在 210 nm 處有一定紫外吸收。為驗(yàn)證該測(cè)定方法溴離子的存在不影響 異丙托溴銨的含量測(cè)定，故選定溴化鉀進(jìn)行了試驗(yàn)。試驗(yàn)表明，采用該測(cè)定方 法，溴離子不干擾異丙托溴銨的含量測(cè)定。流動(dòng)相采用等度洗脫系統(tǒng)，用二極 管陣列檢測(cè)器測(cè)定異丙托溴銨對(duì)照品的峰純度大于 99.8%，表明主峰為單一 峰，在210400 nm波長(zhǎng)掃描，未漏檢雜質(zhì)峰。異丙托溴銨濃度在12.8256.0卩g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。本方法靈敏度高，方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好，且操作簡(jiǎn)單，可用于吸入用 異丙托溴銨溶液的質(zhì)量控制?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1

9、付笑飛異丙托溴銨的藥理基礎(chǔ)及臨床應(yīng)用現(xiàn)狀J 中華醫(yī)學(xué)雜志, 2005, 29 (02) : 139140+2 Peter JS, Robert WT, Cynthia SG, et al. The separation ofipratropium bromide and its related compoundsJ . J ofPharmaceutical a nd Biomedical A nalysis, 1998， 17: XII S193 汪 潔.吸入液中異丙托溴銨和苯扎氯銨的HPLC測(cè)定J.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志'4 譚生建，張啟明，劉剛，等.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方異維倍克氣 霧劑中異丙托溴銨和鹽酸克侖特羅的含量J 藥物分析雜志，2005, 25(09): 1070 1072.作者：盧