「天然產(chǎn)物活性成分檢測」

1、陳羽迪22 12生物制藥（1）茶葉中茶多酚的粗提取與含量測定實驗報告一、實驗目的：1、了解并熟悉茶多酚的元素組成、結(jié)構(gòu)構(gòu)成、理化性質(zhì)。2、掌握溶劑萃取法粗提取茶多酚的原理與操作。3、掌握酒石酸鐵比色法測定茶多酚的含量的原理及操作。4、了解分光光度計的使用方法和注意事項。二、實驗原理和應用：茶多酚（Tea Polyphenols）是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱，包括黃烷醇類、花色昔類、黃酮類、黃酮醇類和酚酸類等。其中以黃烷醇類物質(zhì)（兒茶素）最為重要。茶多酚又稱茶糅或茶單寧，是形成茶葉色香味的主要成份之一，也是茶葉中有保健功能的主要成份之一。研究表明，茶多酚等活性物質(zhì)具解毒和抗輻射作用，能有效地阻止放射

2、性物質(zhì)侵入骨髓，并可使銀90和鉆6 0迅速排出體外，被健康及醫(yī)學界譽為“輻射克星”。目前國內(nèi)外茶多酚粗品的提取的方法主要有：溶劑萃取法、離子沉淀法、樹脂吸附分離法、超臨界流體萃取法、超聲波浸提方法、微波浸提法等等。在這些提取茶多酚的方法中，每種方法都有它各自的針對性和使用范圍，使用時要根據(jù)各自的情況而定。根據(jù)實驗室的條件及實驗要求，本實驗采用溶劑萃取法對干茶葉中的茶多酚進行粗提取，即利用茶多酚易溶于乙酸乙酯等有機溶劑的原理進行液-液萃取。茶多酚的測定方法有高鎰酸鉀直接滴定法和酒石酸鐵比色法，由于高鎰酸鉀直接滴定法操作比較復雜，且靠肉眼觀察顏色判斷終點，如果樣品溶液顏色較深時，可能影響測定結(jié)果。

3、本實驗將應用酒石酸鐵比色法測定茶多酚的含量。酒石酸鐵能與茶多酚生成紫褐色絡合物，絡合物溶液顏色的深淺與茶多酚的含量成正比。因此可以用比色方法測定。該法可避免高鎰酸鉀滴定法所產(chǎn)生的人為視覺誤差。三、實驗儀器、材料和試劑實驗儀器：分光光度計、干燥箱、電子天平、pH計、真空泵、紗布、漏斗、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、 2 5 0ml容量瓶、5 0ml容量瓶、分液漏斗實驗材料：干茶葉（市售散裝茶即可）實驗試劑：硫酸亞鐵 （FeSO4 7H2O），酒石酸鉀鈉（KNaC4H40 6 4H 2 o ）,磷酸氫二鈉 （Na? H P O4 - 12H2O）,磷酸二氫鈉 （NaH2P。4 2 H2O），乙酸乙酯。四、實驗步驟與

4、方法1、溶液的配制酒石酸亞鐵溶液制備：稱取 0. 25 g（準確至0.0001）硫酸亞鐵，1 .2 5 g酒石酸鉀鈉（準確至0. 0 00 1 ），用水溶解并定容至 250 m 1 （低溫保存，有效期1 0天）。2、干茶葉的預處理將干茶葉洗凈、晾干，烘干，最后粉碎。粉碎的目的是與液體的接觸面增大使提取率增高。由于試驗條件的限制，用剪刀代替粉碎機將干茶葉剪碎，并且用研缽研細，干茶葉量為50. 0 0g。3、茶多酚的粗提取與定性檢測稱取經(jīng)過預處理的干茶葉末30. 0 0g,加入2 5 0mL 90c接近沸水中攪拌浸提、 過濾，先后用2 50mL的乙酸乙酯萃取兩次。合并兩次有機相。減壓蒸儲除去乙酸乙

5、酯溶劑得黃色粉末狀茶多酚。從外觀上看 ，為黃色粉末狀。物理性能為，易溶于水及乙醇，味苦澀。4、茶多酚溶液的配置與含量的測定稱取步驟3中提取的茶多酚粉末0. 2500 g,加水溶解定容至2 50 mL，混勻，即為每毫升含1mg步驟3中提取的茶多酚粉末的溶液。分別取茶多酚溶液 1.0m L、2. 0 mL、3. 0mL、4.0mL于 4個 50mL容量瓶中，各加水至1 0m L,再加酒石酸亞鐵溶液10mL,加入pH為7. 5的磷酸緩沖液至刻度，混勻后用1 cm比色皿，以空白試劑作參比，于波長540nm處測定吸光度 A,計算實驗數(shù)據(jù)，并繪制實驗數(shù)據(jù)表格。五、實驗現(xiàn)象和數(shù)據(jù)處理將高山茶葉磨成粉末，加入

6、蒸儲水得混有粉末的深綠色液體，水煮后顏色變黃，變?yōu)椴?綠色。乙酸乙酯萃取后，上層淺黃色透明溶液，下層墨綠色渾濁液體，兩相間的乳化層有大0. 7 9 g黃色粉末茶多酚。茶量較大氣泡。輕微搖晃后氣泡消失分層明顯。經(jīng)過旋蒸后得多酚溶液加入酒石酸亞鐵溶液后顏色變?yōu)樗{紫色，顏色隨茶多酚濃度增加而變深。A 3.913 T1000 V m100%3一茶多酚的含量（）, A一樣品溶液的吸光度值，T樣品溶液的總體積（mL）V測定用樣品溶液的量（mL）,m樣品質(zhì)量（g ）3.91 3 用1cm比色杯，當吸光度為1.0時,試液中茶多酚的濃度為3.9 1 3 （mg/mL）表1實驗數(shù)據(jù)匯總實驗次數(shù)AT (mL)V (m L )m (g)3(%)3 (m g /g)10.1045030 . 00 16 .7 8 36 7.820.2235030 .00 27.27272.730.3 6 25030 .0037. 8 7 07 8 .740.4635030.0 0 47.54975. 55、實驗結(jié)果檢驗一一繪制茶多酚標準曲線根據(jù)步驟4中所得的實驗數(shù)據(jù)，繪制茶多酚標準曲線，斜率R處于0. 9 5-1. 05之間方可