2010版GMP無菌制劑實施指南

1、.無菌制劑 GMP實施指南 Error! No text of specified style in document. 14.6過濾除菌本節(jié)旨在提供系統(tǒng)的方法對除菌過濾工藝進(jìn)行選擇和驗證。除菌過濾過程中的關(guān)鍵設(shè)備為除菌（級）過濾器，對其進(jìn)行的具體確認(rèn)和驗證項目的相關(guān)原理和要求等，將在以下14.6.114.6.3中詳細(xì)闡述。按照不同藥品分類，需要、推薦、可選和評估后確定是否進(jìn)行的確認(rèn)和驗證項目，總結(jié)為下表。項目應(yīng)用于非最終滅菌產(chǎn)品的除菌過濾應(yīng)用于可最終滅菌產(chǎn)品的過濾每種型號除菌級過濾器選型的確認(rèn)（由過濾器生產(chǎn)商完成）每種型號除菌級過濾器的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌截留試驗數(shù)據(jù)與完整性檢測數(shù)值的關(guān)聯(lián)推薦推薦每種型

2、號除菌級過濾器的溶出物分析推薦推薦構(gòu)成過濾器的各種材料的生物安全性推薦推薦每批除菌級過濾器的確認(rèn)（由過濾器生產(chǎn)商完成）每批除菌級過濾器抽樣進(jìn)行細(xì)菌截留標(biāo)準(zhǔn)試驗，并確認(rèn)與完整性檢測數(shù)值關(guān)聯(lián)的持續(xù)有效推薦推薦出廠前每支完整性檢測推薦推薦抽樣進(jìn)行濾出液質(zhì)量確認(rèn)，例如：pH、內(nèi)毒素、總TOC和潔凈度抽樣進(jìn)行濕熱滅菌耐受測試推薦推薦工藝驗證細(xì)菌截留需要可選溶出物需要需要化學(xué)兼容性需要可選產(chǎn)品潤濕的完整性可選可選吸附評估評估很多生產(chǎn)最終滅菌產(chǎn)品的企業(yè)，在最終滅菌前，為控制微生物污染水平，使用過濾器對最終滅菌前的產(chǎn)品進(jìn)行過濾。此時，不論該企業(yè)采用了何種過濾器，包括精度（標(biāo)稱）為0.45m的過濾器、0.2m的

3、微生物污染控制過濾器，甚至0.2m除菌級過濾器，因為這些過濾器的使用目的都是在最終滅菌之前對微生物污染水平進(jìn)行控制，而不是作為產(chǎn)品生產(chǎn)過程中最后一步的滅菌手段，對這些過濾器的工藝驗證要求，低于非最終滅菌產(chǎn)品除菌過濾過程中所使用的除菌級過濾器。14.6.1除菌級過濾器的驗證/細(xì)菌截留【法規(guī)要求】藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010修訂版：附錄1 無菌藥品第九十條 對可最終滅菌的產(chǎn)品不得以除菌過濾工藝替代最終滅菌工藝。如果藥品不能在其最終包裝容器中滅菌，可用0.22mm（更小或相同過濾效力）的除菌過濾器將藥液濾入預(yù)先滅菌的容器內(nèi)。由于除菌過濾器不能將病毒或支原體全部濾除，可采用熱處理方法來彌補(bǔ)除菌過濾的不

4、足。第九十一條 與其它滅菌方法相比，除菌過濾的風(fēng)險最大，因此，宜安裝第二只已滅菌的除菌過濾器再過濾一次藥液。最終的除菌過濾濾器應(yīng)盡可能接近灌裝點。 第九十三條 除菌過濾器使用后，必須采用適當(dāng)?shù)姆椒⒓磳ζ渫暾赃M(jìn)行檢查并記錄。常用的方法有起泡點試驗、擴(kuò)散流試驗或壓力保持試驗。過濾工藝應(yīng)經(jīng)過驗證，驗證中應(yīng)確定過濾一定量藥液所需時間及過濾器二側(cè)的壓力；任何明顯偏離正常時間或壓力的情況應(yīng)有記錄并進(jìn)行調(diào)查，調(diào)查結(jié)果應(yīng)歸入批記錄。第九十四條 同一規(guī)格和型號的過濾器，應(yīng)經(jīng)過驗證確定其使用時限。編者理解：在這里法規(guī)要求的第一個要點是在采用除菌過濾方法時，首先確認(rèn)采用的過濾器為“除菌級”的，即“除菌過濾器”。

5、達(dá)到此要求后，除菌過濾法中的其它無菌保障措施才有意義。定義過濾器是否為除菌級，需要依據(jù)過濾器的微生物截留能力，并完成相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)方法確認(rèn)和工藝驗證。而過濾藥液所用的時間、流速、溫度、濾出總量、過濾器二側(cè)壓力（壓差）、藥液對微生物的生存性的影響和過濾器的重復(fù)使用等情況，都是可能影響過濾器細(xì)菌截留能力的重要因素，需要在驗證過程中考慮并確證。【背景介紹】除菌過濾是指除去流體中微生物的工藝過程，該過程不應(yīng)對產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生不良影響。包括液體和氣體除菌過濾。藥品生產(chǎn)中采用的除菌過濾膜的孔徑一般不超過0.22um（或者0.2um，這兩種標(biāo)稱沒有區(qū)別）。當(dāng)膜過濾器在1960年代出現(xiàn)在市場上時，0.45um孔徑的膜

6、被認(rèn)為是“除菌級”的液體過濾器，并被成功應(yīng)用于注射劑的除菌過濾。這些過濾器采用黏質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens）進(jìn)行挑戰(zhàn)確認(rèn)。在1960年發(fā)布的論文中，美國FDA的Frances Bowman博士觀察到經(jīng)0.45um過濾器“除菌”過濾后的培養(yǎng)基被某種可以在104106/cm2挑戰(zhàn)水平下穿透該孔徑濾膜的微生物反復(fù)污染。這導(dǎo)致ASTM F-838標(biāo)準(zhǔn)的出臺，該挑戰(zhàn)水平成為驗證液體除菌級過濾器的標(biāo)準(zhǔn)方法。 因為缺乏工業(yè)界內(nèi)的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)來衡量孔徑，孔徑的標(biāo)稱對預(yù)測微生物截留和比較不同生產(chǎn)商生產(chǎn)的過濾器產(chǎn)品沒有實際的意義。因而，需要用微生物截留能力來定義除菌級過濾器。通常，除菌級液體過

7、濾器指在工藝條件下每cm2有效過濾面積可以截留107 CFU（colony forming unit, 集落/菌落形成單位）的缺陷假單胞菌（Brevundimonas diminuta, ATCC 19146）的過濾器。【技術(shù)要求】A. 除菌級過濾器的細(xì)菌截留驗證細(xì)菌挑戰(zhàn)實驗驗證過濾器濾膜的級別并采用有代表性的挑戰(zhàn)微生物證明其從某產(chǎn)品或該產(chǎn)品家族中完全去除微生物。除菌級過濾器的驗證需要考慮兩個主要因素：l 濾膜級別，使用可適用的標(biāo)準(zhǔn)化試驗或類似的方法以細(xì)菌挑戰(zhàn)的方式進(jìn)行。l 工藝驗證，由過濾器的使用者或指派的實驗設(shè)施（例如，過濾器的生產(chǎn)者或合同實驗室），使用有代表性的微生物進(jìn)行挑戰(zhàn)，證明過濾器

8、在生產(chǎn)條件下，可以完全去除每個產(chǎn)品或產(chǎn)品家族中的微生物。應(yīng)建立針對每個產(chǎn)品組的科學(xué)解釋并可能需要在實施驗證前經(jīng)合適的監(jiān)管機(jī)構(gòu)審查。這兩種過濾器測試?yán)砟钍遣荒芑Q的，并應(yīng)當(dāng)被獨立驗證。這些測試的目的是為了證明過濾生產(chǎn)過程產(chǎn)生無菌的濾出液。B. 影響細(xì)菌截留的因素應(yīng)對可能影響細(xì)菌截留的因素進(jìn)行風(fēng)險評估，包括但不限于：（1）過濾器源的因素，包括過濾器類型、結(jié)構(gòu)、基礎(chǔ)聚合物、表面改性化學(xué)、孔徑分布和過濾膜的厚度等。（2）工藝源的因素生產(chǎn)工藝、產(chǎn)品或者料液對挑戰(zhàn)微生物的生存性、理化形態(tài)的影響；實際微生物污染水平?jīng)Q定缺陷假單胞菌是否可以作為相關(guān)微生物；產(chǎn)品或者料液中的實際微生物污染水平（是否低于10CFU

9、/100ml）影響過濾除菌工藝的設(shè)計和效能；還應(yīng)考慮潛在的因產(chǎn)品配方或工藝條件，影響微生物的細(xì)胞大小或其它生理和形態(tài)學(xué)特性，從而造成微生物穿透的情況。應(yīng)考慮評估的工藝源因素：l 流體組分（配方、表面活性劑、添加劑）l 流體性質(zhì)（pH值、粘度、滲透壓，離子強(qiáng)度）l 工藝條件（時間、溫度、壓差、流速、滅菌方法和重復(fù)使用）l 產(chǎn)品、料液和生產(chǎn)環(huán)境中實際微生物污染的特點和水平C. 氣體除菌過濾器對于氣體除菌過濾器的細(xì)菌截留要求，尚沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。但是，液體細(xì)菌挑戰(zhàn)被認(rèn)為是氣體除菌過濾器的“最差條件”，因而，參照液體除菌級過濾器執(zhí)行的細(xì)菌截留驗證是被廣泛接受的。其它可以選擇的方法，包括細(xì)菌（孢子）氣溶膠

10、挑戰(zhàn)和噬菌體/病毒氣溶膠挑戰(zhàn)試驗?！緦嵤┲笇?dǎo)】本部分實施指導(dǎo)，均為針對液體過濾器的。下文的實例分析部分會介紹一個氣體除菌過濾器參照執(zhí)行的例子。A. 細(xì)菌截留驗證研究細(xì)菌截留驗證研究的目的是獲得文件證據(jù)，證明在模擬工藝條件下，過濾過程可以持續(xù)去除懸浮于產(chǎn)品或替代流體中的高水平的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌或相關(guān)微生物污染分離物。研究的目的決定是使用膜片還是全尺寸工藝過濾器。如果研究的目的是驗證特定膜材的細(xì)菌截留效能，那么使用小的測試膜片通常被認(rèn)為是可以滿足條件的。被用來確定工藝過濾器物理完整性的檢測方法應(yīng)當(dāng)與細(xì)菌截留測試結(jié)果關(guān)聯(lián)。工藝時間和壓差會影響細(xì)菌截留實驗的結(jié)果。在完整的工藝時間進(jìn)行細(xì)菌挑戰(zhàn)實驗可以對那些與時

11、間有關(guān)的因素進(jìn)行評估，這些因素包括過濾器兼容性，完整性的維持和發(fā)生時間依賴的穿透等。細(xì)菌挑戰(zhàn)實驗驗證過程中的壓差應(yīng)達(dá)到或超過工藝過程的最大壓差和/或最大的工藝流速（在過濾器制造商的設(shè)計規(guī)范內(nèi)）。在驗證過程中同時模擬壓差和流速可能是不可能的。在設(shè)計模型挑戰(zhàn)條件時過濾器的使用者應(yīng)該確認(rèn)哪個參數(shù)與特定工藝的相關(guān)性更高，并形成基本解釋以支持相關(guān)決定。對膜過濾器進(jìn)行產(chǎn)品細(xì)菌截留驗證時需要考慮以下事項：l 應(yīng)對過濾工藝進(jìn)行一次徹底評估，包括溶劑性質(zhì)（例如水基的、酸、堿、有機(jī)的）、過濾時間、工藝壓差、工藝流速、工藝溫度和過濾器設(shè)計規(guī)范。l 產(chǎn)品細(xì)菌截留驗證研究應(yīng)包括多個過濾膜批次（通常三個批次）。有些情況下

12、，產(chǎn)品性質(zhì)被認(rèn)為對過濾膜有攻擊性，過濾器的確切數(shù)目和實驗設(shè)計視工藝而定。l 在用于細(xì)菌截留驗證研究的三個批次中至少應(yīng)有一個批次是進(jìn)行預(yù)研究時或使用前物理完整性測試時的數(shù)值通過但是接近（例如，10之內(nèi)）過濾器生產(chǎn)商提供的合格規(guī)范限值的。l 細(xì)菌截留驗證研究中使用的過濾膜的物理完整性檢測數(shù)值應(yīng)包括在實驗報告中。物理完整性檢測應(yīng)使用已有規(guī)范值的水、產(chǎn)品或其它潤濕流體來進(jìn)行測試，并在進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)前完成。l 如果細(xì)菌挑戰(zhàn)實驗后測試用微生物在任何過濾器的下游被回收到，那么就需要對此進(jìn)行調(diào)查。如果調(diào)查確認(rèn)測試用微生物穿透完整性檢測達(dá)標(biāo)的過濾器，那么就應(yīng)重新考慮此種過濾器在這些工作條件下的適用性。l 具有相

13、同組分而只有濃度不同的同一族產(chǎn)品，可以用挑戰(zhàn)極限濃度的方法進(jìn)行驗證，替代性地接受中間的濃度。如果某一產(chǎn)品被確定為最差情況的代表，對此的解釋和數(shù)據(jù)需要和模型一起提供。l 過濾器的重復(fù)使用對于制藥過程來說通常是不實際的或者不被推薦的。然而，如果除菌級過濾器被重復(fù)使用了，需要說明理由，重復(fù)使用的參數(shù)也需要經(jīng)過驗證。B. 細(xì)菌截留驗證研究風(fēng)險評估不同等級的風(fēng)險與過濾工藝參數(shù)是相聯(lián)系的，有些與過濾前產(chǎn)品中的微生物繁殖有關(guān)，而另外一些與較高的細(xì)菌穿透過濾器的風(fēng)險相關(guān)。見表2。表 14-7 工藝風(fēng)險評估因素較高風(fēng)險因素較低風(fēng)險較高水平、小的生物體微生物污染水平較低水平、大的生物體較高壓差較低較高流速較低促進(jìn)

14、生長的產(chǎn)品殺菌的，或含防腐劑的室溫或更高溫度冷藏較長時間較短C. 挑戰(zhàn)微生物選擇標(biāo)準(zhǔn)缺陷假單胞菌（B.diminuta）ATCC ®19146TM（歷史上為P. diminuta），被選擇作為細(xì)菌挑戰(zhàn)實驗的微生物。如果使用了其它細(xì)菌，這些細(xì)菌必須小至可以挑戰(zhàn)除菌級過濾器的截留能力，并可以模擬在產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)的最小微生物。相應(yīng)地，替代挑戰(zhàn)微生物可被用于驗證研究，只要原有的過濾前微生物污染水平被發(fā)現(xiàn)是更相關(guān)的。如果可能，自有微生物污染水平應(yīng)該被描述、計數(shù)和鑒別，因為這些微生物有穿透除菌級過濾器的潛在可能性。被分離的微生物形態(tài)也要考慮。挑戰(zhàn)微生物的尺寸需要通過穿透0.45微米孔徑的膜來確認(rèn)，這

15、是每個挑戰(zhàn)實驗的陽性對照。在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基條件下生長的缺陷假單胞菌（見下“培養(yǎng)基維護(hù)和挑戰(zhàn)微生物制備”）在高挑戰(zhàn)水平下（通常107）會少量透過0.45微米濾膜。有些情況下，缺陷假單胞菌不一定是代表最差條件的模型。如果選用了不同的挑戰(zhàn)微生物，需要提供文件解釋。D. 培養(yǎng)基維護(hù)和挑戰(zhàn)微生物制備缺陷假單胞菌ATCC®19146TM可以凍干的形式從美國典型培養(yǎng)物中心（ATCC）或者本國的同等機(jī)構(gòu)獲得。在按照ATCC的規(guī)程復(fù)壯微生物后，可以按照微生物操作規(guī)范在適宜的培養(yǎng)基中冷藏或冷凍保存。需要建立用于挑戰(zhàn)研究的工藝分離物的儲存條件。兩種標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)被公認(rèn)適宜用于細(xì)菌挑戰(zhàn)實驗用缺陷假單胞菌的制備和維護(hù)。

16、它們是SLB法和 FCP法（冷凍細(xì)胞漿法）。兩種方法都被發(fā)現(xiàn)可有效生產(chǎn)適宜的缺陷假單胞菌懸液，缺陷假單胞菌的尺寸大約為直徑0.3-0.4微米，長度0.6-1.0微米。替代的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法也可能同樣有效制備缺陷假單胞菌，只要這些方法可以生產(chǎn)出單一的，分散的細(xì)胞，尺寸適宜穿過0.45微米孔徑的膜過濾器。替代培養(yǎng)法需要被驗證。庫存的細(xì)菌挑戰(zhàn)培養(yǎng)物的聚集情況可用光學(xué)顯微鏡檢查。如果觀察到聚集現(xiàn)象，將保存培養(yǎng)物置于超生波清洗槽的冷水中10分鐘是可將團(tuán)聚物分散的一個方法。水浴的氣穴作用可將細(xì)菌細(xì)胞分散，不影響細(xì)胞活性。應(yīng)使用光學(xué)顯微鏡、活性計數(shù)和0.45微米孔徑對照過濾器的下游回收來確認(rèn)分散效果。細(xì)菌挑

17、戰(zhàn)實驗濃度應(yīng)保證在目標(biāo)工藝時間里提供始終如一的挑戰(zhàn)，挑戰(zhàn)的水平達(dá)到基于過濾器表面積至少107 CFU/cm²。當(dāng)計算細(xì)菌挑戰(zhàn)濃度時，應(yīng)綜合考慮諸如流速、時間和壓差等操作參數(shù)。大于等于107/cm²的細(xì)菌挑戰(zhàn)水平就是對除菌級過濾器的要求（歷史上用0.2微米孔徑來標(biāo)稱的過濾器）。這一水平來源于Bowman的觀察和她的建議，即缺陷假單胞菌在大于104106 CFU/ cm² 細(xì)菌挑戰(zhàn)水平時可穿透0.45微米標(biāo)稱的膜，應(yīng)當(dāng)用107 CFU/cm2缺陷假單胞菌來證明0.2微米標(biāo)稱的膜為“除菌級”，以確保有足夠的靈敏度發(fā)現(xiàn)超尺寸孔。細(xì)菌挑戰(zhàn)濃度（CFU/ml）不應(yīng)與細(xì)菌挑戰(zhàn)水

18、平（CFU/cm2）相混淆。缺陷假單胞菌懸液的生存力和滴度應(yīng)使用合適的回收培養(yǎng)基來確認(rèn)，例如大豆酪蛋白消化肉湯或者米勒辛頓瓊脂。當(dāng)進(jìn)行過濾器挑戰(zhàn)時，細(xì)菌挑戰(zhàn)菌懸液的活力滴度應(yīng)當(dāng)在挑戰(zhàn)前和挑戰(zhàn)后立刻被確定。上游細(xì)菌滴度應(yīng)使用被認(rèn)可的微生物學(xué)測試方法確認(rèn)。應(yīng)使用同樣的培養(yǎng)基確認(rèn)任何在下游回收的缺陷假單胞菌。E. 測試程序和方案形成應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)方法確證膜過濾器的微生物截留能力。然而，對于某種產(chǎn)品來說，僅證明缺陷假單胞菌在水溶液中被截留，而不是在特定產(chǎn)品中，不足以驗證此產(chǎn)品的除菌過濾工藝。 為了確定正確的挑戰(zhàn)測試方法，應(yīng)將測試微生物直接接種在承載流體（產(chǎn)品或替代品）中以證明其生存性。微生物應(yīng)以與挑戰(zhàn)實驗

19、中使用的同等方式培養(yǎng)，以保留其生物形態(tài)特征和生理特征。用于生存性研究的測試暴露時間應(yīng)該等于或超過實際工藝過濾時間。當(dāng)測試微生物在產(chǎn)品中的生存性已經(jīng)完成測試，就應(yīng)該形成挑戰(zhàn)方法和方案了。細(xì)菌挑戰(zhàn)實驗的條件應(yīng)模擬實際生產(chǎn)工藝。既然細(xì)菌挑戰(zhàn)實驗通常都在實驗室里進(jìn)行，那么方法的規(guī)模也應(yīng)相應(yīng)調(diào)整。通量應(yīng)調(diào)整到每單位面積的流速，表示為基于濾芯表面積的形式(ml/min)/cm2。如果過濾過程按壓差控制，則挑戰(zhàn)實驗壓差至少等同于最大工藝壓差。如果制訂方案過程中遇到關(guān)于測試方法可接受性的問題，則建議聯(lián)系相關(guān)管理機(jī)構(gòu)以獲取指導(dǎo)。圖1列出了在為特定過濾器和產(chǎn)品/工藝組合選擇合適的驗證策略時需要考慮的關(guān)鍵步驟。（1

20、）非殺菌性的工藝和流體直接在產(chǎn)品中接種測試微生物是測試除菌級過濾器微生物截留能力的首選方法。當(dāng)產(chǎn)品和工藝流體被證明在產(chǎn)品和工藝條件下沒有殺菌效力的時候，這樣是可行的。在這些工藝中，應(yīng)使用足夠濃度的挑戰(zhàn)微生物在產(chǎn)品中接種，而且要在實際工藝條件下，包括時間、壓差、流速和其它關(guān)鍵變量（例如溫度），應(yīng)盡量減少稀釋，以避免不必要的產(chǎn)品改變。（2）抑菌的/殺菌的/非分散的挑戰(zhàn)流體在殺菌性的產(chǎn)品中進(jìn)行細(xì)菌截留測試，使得與驗證相關(guān)的一些問題更難回答，例如：產(chǎn)品對過濾器有什么影響，產(chǎn)品對其中的生物菌落有什么影響。在殺菌性產(chǎn)品中或是在不利于微生物活性的條件（例如，溫度上升）下進(jìn)行的細(xì)菌截留測試不一定能得到正確的結(jié)

21、果。為了評估產(chǎn)品/工藝對過濾器的潛在影響，可以使用產(chǎn)品和實際的工藝條件，包括流速、壓差、溫度和時間，對過濾器進(jìn)行預(yù)處理。這種預(yù)處理可在一個閉路系統(tǒng)中將產(chǎn)品循環(huán)通過測試過濾器或者單路通過測試過濾器，接著對濾芯進(jìn)行細(xì)菌挑戰(zhàn)。（具體方法見下文實例分析部分測試方法修改的例子，這些修改被用于適應(yīng)這種細(xì)菌挑戰(zhàn)測試。）F. 濾出液分析對全部挑戰(zhàn)濾出液的分析對確認(rèn)除菌級過濾器截留細(xì)菌挑戰(zhàn)的能力是必要的?？梢詮陌惭b在測試過濾器下游的合適的分析過濾器或膜片上直接通過，或者先收集濾出液在無菌容器中然后再用分析膜片過濾，兩種方法均可。通常，使用0.45微米或除菌級膜片來收集缺陷假單胞菌菌或其它微生物污染挑戰(zhàn)細(xì)菌。安裝

22、分析過濾器不應(yīng)影響測試過濾器的預(yù)定壓差。對濾出液部分取樣的作法不足以驗證除菌過濾，因為一小部分細(xì)菌可能已經(jīng)穿過過濾器，存在于未取樣和分析的濾出液中。G. 結(jié)果判讀在陽性對照有效的情況下，三支測試過濾器都沒有檢測到挑戰(zhàn)細(xì)菌的透過，則達(dá)到除菌級過濾器的接受標(biāo)準(zhǔn)。如果有一支被發(fā)現(xiàn)細(xì)菌穿過，但沒有確認(rèn)是什么原因引起的，那么在調(diào)查和風(fēng)險評估后，可重新測試（例如，從失敗膜所屬批次中選三支過濾器）。如果可以找到導(dǎo)致測試失敗的確定原因，那么疑問批次的過濾器應(yīng)被重新檢測。H. 連續(xù)過濾兩個或多個過濾器在一起使用，以達(dá)到：l 確保濾出液是無菌的。l 至少一個過濾器通過完整性測試。l 到達(dá)最后一級過濾器的細(xì)菌濃度小

23、于10 CFU/100ml。這樣的組合中，最后的最接近濾出液的過濾器，稱為首要過濾器，另外一個或多個，為冗余過濾器，是對除菌過濾工藝的再次保障。當(dāng)懷疑發(fā)生細(xì)菌穿過除菌級過濾器的情況時，可以使用串聯(lián)在一起的兩個或多個過濾器濾器，實際為兩個或者多個過濾器是作為一個除菌過濾單元在使用。在這樣的工藝條件下，所有過濾器均要達(dá)到完整性測試接受標(biāo)準(zhǔn)。這種情況下的兩個或多個過濾器的總稱為組合過濾器。圖 14-20 除菌過濾工藝驗證策略決策樹I. 再驗證經(jīng)過驗證被用于特定除菌過濾工藝的除菌過濾器，在工藝條件發(fā)生改變或者過濾器制造方面發(fā)生改變是，需要進(jìn)行再驗證。包括但不限于下列情況，需要考慮進(jìn)行再驗證：l 單位面

24、積的流速高于已驗證的參數(shù)l 過濾壓差超過被驗證參數(shù)l 暴露時間超過被驗證的時間l 過濾面積不變的情況下提高過濾量l 過濾溫度改變l 產(chǎn)品配方改變，包括濃度、pH或電導(dǎo)率l 過濾器的滅菌程序改變l 改變過濾器的制造商，或者過濾器的生產(chǎn)者改變了過濾膜的配方以及過濾器的其它結(jié)構(gòu)性材料【實例分析】A. 修改的方法 如前述，如果在工藝條件下挑戰(zhàn)微生物不能存活或者生存力受到影響，在用產(chǎn)品預(yù)處理過濾器后，采用修改的方法進(jìn)行測試。下面給出一些方法修改的例子，實際應(yīng)用時，可采用一種或幾種進(jìn)行組合測試。應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，如果有良好的科學(xué)解釋，其它方式的方法修改也可能是適合的。（1）減少暴露時間有些情況下，挑戰(zhàn)微生物不一

25、定在整個工藝時間下都能在產(chǎn)品中存活。在挑戰(zhàn)實驗預(yù)處理階段接近尾聲的時候直接用足夠濃度（見前文實施指導(dǎo)“D. 培養(yǎng)基維護(hù)和挑戰(zhàn)微生物制備”）的挑戰(zhàn)微生物接種產(chǎn)品。有一點是很重要的，將一個0.45微米陽性對照過濾器與測試過濾器平行運行，以確證微生物的尺寸和存活。另一個辦法是將挑戰(zhàn)微生物在靜態(tài)狀態(tài)下置于挑戰(zhàn)流體中。將挑戰(zhàn)微生物以工藝溫度暴露在產(chǎn)品中，并在模擬工藝條件下用產(chǎn)品循環(huán)對過濾器進(jìn)行預(yù)處理后，就可在最差條件（壓差和流速）下挑戰(zhàn)過濾器了。挑戰(zhàn)時間應(yīng)被縮減，以確保在實際暴露、挑戰(zhàn)和回收期間挑戰(zhàn)微生物存活。0.45微米陽性對照過濾器與測試過濾器平行運行，以確認(rèn)微生物的存活。（2）修改測試方法的參數(shù)在

26、挑戰(zhàn)有殺菌能力的產(chǎn)品時，測試方法參數(shù)修改是有用的，因為這種方法可以只改變一個工藝變量，例如溫度。使用這種方式以維持產(chǎn)品和細(xì)菌的相互反應(yīng)。這種方法不能解決所有可能的工藝/產(chǎn)品/挑戰(zhàn)微生物的交互反應(yīng)，但是可以實現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)挑戰(zhàn)微生物的運用。在實際工藝條件下使用產(chǎn)品對過濾器進(jìn)行預(yù)處理后，工藝中的殺菌部分如溫度被修改了，細(xì)菌挑戰(zhàn)可以進(jìn)行了。應(yīng)使用足夠濃度的細(xì)菌挑戰(zhàn)微生物直接接種產(chǎn)品。（見前文實施指導(dǎo)“D. 培養(yǎng)基維護(hù)和挑戰(zhàn)微生物制備”）（3）修改測試產(chǎn)品配方另一種修改的方法在用產(chǎn)品預(yù)處理濾芯后，將產(chǎn)品的殺菌成分移除。這也許很容易，調(diào)節(jié)pH值至產(chǎn)品非殺菌的范圍，去除或者稀釋殺菌成分或使用替代流體。經(jīng)修改的配方

27、應(yīng)在實際產(chǎn)品工藝條件下使用足夠濃度的挑戰(zhàn)微生物直接接種（見前文實施指導(dǎo)“D.培養(yǎng)基維護(hù)和挑戰(zhàn)微生物制備”）殺菌成分應(yīng)被去除到不干擾挑戰(zhàn)微生物的水平。（4）使用有耐受性的自身微生物污染分離物盡管可能在正常工藝條件下，某種產(chǎn)品對缺陷假單胞菌有殺滅能力，但其它微生物可能在相同條件下可以生存。另外一種對殺菌性產(chǎn)品進(jìn)行細(xì)菌挑戰(zhàn)的方法是使用“自身污染微生物”。自身污染微生物由分離自制造環(huán)境或產(chǎn)品制劑的細(xì)菌組成，被證實可在實際生產(chǎn)工藝條件下在產(chǎn)品制劑中存活。自有的細(xì)菌在產(chǎn)品中應(yīng)繁殖或保持均衡，以確保他們的生物形態(tài)和生理學(xué)特性在工藝分離物中有代表性。應(yīng)使用最小的或最壞情況下的自身微生物。關(guān)于挑戰(zhàn)微生物制備與使

28、用的更多討論請見前文實施指導(dǎo) “D.培養(yǎng)基維護(hù)和挑戰(zhàn)微生物制備”。如果較小的微生物確認(rèn)在產(chǎn)品中存在，那么這些微生物或某一合適的模式微生物可被用來挑戰(zhàn)測試過濾器。例如使用在惡劣條件下生長的皮氏羅爾斯頓氏菌（Ralstonia pickettii）。通常，這些挑戰(zhàn)是在缺陷假單胞菌挑戰(zhàn)之外進(jìn)行的。B. 氣體過濾器的液體微生物挑戰(zhàn)試驗挑戰(zhàn)微生物和挑戰(zhàn)水平，與液體除菌級過濾器相同。但是，針對氣體過濾器進(jìn)行液體細(xì)菌挑戰(zhàn)實驗，需要注意以下幾點：l 挑戰(zhàn)前完整性檢測?？梢允褂玫姆椒òㄆ鹋蔹c、擴(kuò)散/前進(jìn)流（壓力保持/衰減）和水侵入。方法參見14.6.2完整性檢測。l 因為氣體過濾器的疏水特性，在進(jìn)行水基的微生

29、物挑戰(zhàn)前，需要用低表面張力的液體進(jìn)行引導(dǎo)潤濕（例如，25體積比的叔丁醇水溶液或者60異丙醇水溶液）。l 挑戰(zhàn)之前，去除醇溶液，以防止影響挑戰(zhàn)試驗。l 挑戰(zhàn)實驗，同液體過濾器。參照前文實施指導(dǎo)。l 挑戰(zhàn)后完整性檢測。 確證過濾器沒有在挑戰(zhàn)過程中損壞。此時，與挑戰(zhàn)前不同，不再可以選用水侵入方法，或者直接用水進(jìn)行其它檢測。因為仍然存活或者不再存活的污染微生物都對過濾器的疏水性有影響，另外，任何仍然潤濕的過濾器材質(zhì)都可能影響實驗結(jié)果?？梢赃x擇挑戰(zhàn)前完整性實驗所使用的溶液，進(jìn)行起泡點或者擴(kuò)散/前進(jìn)流測試。l 濾出液分析，同液體過濾器。參照前文實施指導(dǎo)。l 結(jié)果判讀。對除菌級的氣體過濾器，尚沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)

30、。但是，現(xiàn)在市場上獲得的除菌級氣體過濾器，有的已經(jīng)可以達(dá)到液體除菌級過濾器的標(biāo)準(zhǔn)。即大于107/cm2有效過濾面積的挑戰(zhàn)微生物截留（通常為B. diminuta）。14.6.2完整性檢測【法規(guī)要求】藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范2010修訂版：附錄1 無菌藥品第四十三條進(jìn)入無菌生產(chǎn)區(qū)的生產(chǎn)用氣體（不包括可燃性氣體）均應(yīng)經(jīng)過除菌過濾。用于無菌生產(chǎn)的公用介質(zhì)（如壓縮空氣、氮氣）的除菌過濾器和呼吸過濾器的完整性應(yīng)定期檢查。第九十三條 除菌過濾器使用后，必須采用適當(dāng)?shù)姆椒⒓磳ζ渫暾赃M(jìn)行檢查并記錄。常用的方法有起泡點試驗、擴(kuò)散流試驗或壓力保持試驗。過濾工藝應(yīng)經(jīng)過驗證，驗證中應(yīng)確定過濾一定量藥液所需時間及過濾器

31、二側(cè)的壓力；任何明顯偏離正常時間或壓力的情況應(yīng)有記錄并進(jìn)行調(diào)查，調(diào)查結(jié)果應(yīng)歸入批記錄。編者理解：細(xì)菌截留測試是一種破壞性試驗，會對過濾器和生產(chǎn)環(huán)境造成污染，不能用來確證用于生產(chǎn)的過濾器的性能。法規(guī)要求在這里指出了日常生產(chǎn)中用來確證過濾器性能的常規(guī)方法和注意事項?！颈尘敖榻B】細(xì)菌截留測試是一種破壞性試驗，不能用來證明將用于生產(chǎn)的過濾器的完整性。非破壞性物理性完整性測試的主要目的，是在不破壞過濾器的前提下確定是否存在可能危及過濾器截留能力的缺陷。除此之外，完整性測試在相關(guān)工藝條件下建立測試過濾器與已被驗證的細(xì)菌挑戰(zhàn)過的過濾器的同一性。該同一性的建立，是通過完整性試驗結(jié)果與細(xì)菌截留測試相關(guān)聯(lián)來達(dá)成的

32、。過濾器制造商通過對一系列具有不同完整性測試值的過濾器進(jìn)行細(xì)菌挑戰(zhàn)實驗，直至觀察到某些過濾器發(fā)生細(xì)菌透過，據(jù)此來為該類型的過濾器設(shè)定物理完整性檢測的限值。在完整性測試中，要在一定的壓力范圍內(nèi)評估潤濕的濾膜的氣體流動特性。在整個過濾器的濾膜被充分潤濕后，在膜的上游側(cè)引入低壓氣體，毛細(xì)管作用力會阻止水從小孔中被排出。當(dāng)在過濾器上游加壓時，氣體會溶解入潤濕液體，擴(kuò)散穿過潤濕的膜，在膜的下游，即大氣壓下，被釋放。當(dāng)施加于上游側(cè)的壓力升高時，擴(kuò)散也加劇。測量透過膜的氣體量，就得到了此種膜過濾器的膜特性曲線。顯示在圖1421中的是在潤濕膜下游測量到的空氣流，為對類似孔隙率和孔徑分布但是不同面積的膜進(jìn)行的比

33、較。這些曲線的三個特征部分將作為膜過濾器完整性測試的基礎(chǔ)：l 壓力軸低端的線性部分表示擴(kuò)散氣流通過膜上有液體保持的孔。l 隨壓力升高，出現(xiàn)一個特征的彎曲并隨后出現(xiàn)另外一段線性部分。這個彎曲表示從擴(kuò)散流到大量氣流或粘性流的轉(zhuǎn)變。l 當(dāng)超過最大的那些孔的起泡點時發(fā)生大量氣流。在此點之上，氣流大部分由通過開放孔的自由氣流形成；小部分由通過仍然被潤濕的膜孔的擴(kuò)散流形成。圖 14-21 膜特征曲線【技術(shù)要求】物理完整性測試只有當(dāng)其與特定過濾器的截留特性相關(guān)時才有意義。驗證過濾器的截留能力需要用細(xì)菌挑戰(zhàn)實驗來檢測微生物的透過。因為這些測試不能在擬用于生產(chǎn)的過濾器上進(jìn)行，所以在實驗室中將其與非破壞性的物理完

34、整性檢測關(guān)聯(lián)。通過在標(biāo)準(zhǔn)測試條件下挑戰(zhàn)某種濾膜逐步“接近合格限值”的樣品并分析細(xì)菌透過結(jié)果，可以評估其截留能力。通常觀察到的截留模式將用來界定物理完整性測試值，即以某個完整性測試限為限值，對合格范圍內(nèi)過濾器將不會觀察到細(xì)菌穿過。通過這個測試建立的完整性測試值就聯(lián)系到了濾出液的無菌性。通常用于確認(rèn)除菌級過濾器完整性的非破壞性實驗包括：起泡點，擴(kuò)散/前進(jìn)流和壓力保持/衰減（一種擴(kuò)散/前進(jìn)流的變化形式）。這些檢測方法對親水和疏水膜過濾器均適用，并可以手動進(jìn)行或使用自動完整性測試儀。每一種完整性測試方法都有其優(yōu)點和局限。起泡點實驗與膜中存在的那些最大孔的有效直徑有關(guān)，這些孔，與膜的厚度和孔的迂曲度一起

35、直接影響膜的截留特性。起泡點的分辨力隨膜面積的增大而降低，因為低于起泡點的擴(kuò)散流氣流趨向于使其不明顯。然而擴(kuò)散與孔徑?jīng)]有顯示出直接的關(guān)系，擴(kuò)散/前進(jìn)流測試提供了一個量化的測試方法，其中最大流量限制值是由過濾器制造商在一個低于最小起泡點值的指定測試壓力下建立的。小面積膜過濾器的擴(kuò)散流較小，限制了擴(kuò)散/前進(jìn)流測試的應(yīng)用。但通常，由于擴(kuò)散流檢測為定量檢測方法，對較大過濾膜面積仍然適用，使用范圍更廣。對于多個點的測試使得氣流曲線的繪制從低壓下的擴(kuò)散延伸到升壓后的起泡點區(qū)。這些測試在表征孔徑分布方面結(jié)合了起泡點和單點擴(kuò)散/前進(jìn)流完整性測試的優(yōu)點。對于氣體除菌級過濾器，除可以采用低表面張力溶液潤濕后的起泡

36、點和擴(kuò)散/前進(jìn)流檢測外，還可以通過水侵入實驗來進(jìn)行完整性檢測。水侵入，是在一定壓力下，測量干燥疏水性濾膜對水潤濕的抵抗力。水侵入方法的優(yōu)點是不需要引入醇等低張溶液和過濾膜始終保持干燥。某些應(yīng)用中，也可以采用氣溶膠方法對氣體除菌過濾器進(jìn)行完整性檢測。【實施指導(dǎo)】A. 驗證測試驗證研究建立了完整性測試結(jié)果與細(xì)菌截留之間的聯(lián)系，并作為建立成品過濾器用前和用后完整性測試適合參數(shù)的基礎(chǔ)。液體過濾器的多點擴(kuò)散/前進(jìn)流測量在這方面是有作用的，因為它們揭示了擴(kuò)散/前進(jìn)流曲線的斜率、起泡點和其它任何可能由于不同的潤濕流體的影響（例如水、產(chǎn)品 、替代液）而引起的偏移。在建立產(chǎn)品潤濕完整性測試參數(shù)時經(jīng)常用到這種方法

37、。一旦為這種過濾器類型建立了這種關(guān)系，單一成品過濾器的可靠的單點完整性測試就成為可能。B. 濾過流體無菌性保證在使用前和使用后對除菌級成品過濾器進(jìn)行完整性測試是無菌保證的一個至關(guān)重要的因素。然而，完整性測試本身并不足以確保濾過流體的無菌性。其它因素也應(yīng)滿足：l 過濾器的生產(chǎn)商具備質(zhì)量控制和質(zhì)量保證系統(tǒng)以確保過濾膜和成品過濾器的質(zhì)量和一致性。l 過濾器使用者應(yīng)進(jìn)行驗證研究以確證產(chǎn)品、工藝條件和除菌級過濾器達(dá)到細(xì)菌挑戰(zhàn)測試的要求。l 過濾器使用者應(yīng)確保產(chǎn)品/過程控制（如，操作參數(shù)，微生物污染水平控制）到位。一旦滿足這些要素，完整性測試的局限性就會被降至最低，只要是適合的，任何上述完整性測試方法都可

38、以被采用。確保所有要素被滿足，而且是持續(xù)滿足是過濾器使用者的責(zé)任。C. 產(chǎn)品潤濕完整性測試對于液體除菌過濾器，有些情況下，產(chǎn)品是最合適的潤濕流體。使用產(chǎn)品潤濕的完整性測試結(jié)果應(yīng)與在同一種膜上使用濾芯制造商推薦的參考潤濕流體得到的測試數(shù)據(jù)相對比，來確定使用產(chǎn)品潤濕的規(guī)范。這個規(guī)范然后非直接地關(guān)聯(lián)到濾膜的細(xì)菌截留能力。產(chǎn)品潤濕完整性數(shù)值和參考流體潤濕完整性數(shù)值之間的不同是由兩者在測試氣體的溶解性、擴(kuò)散常數(shù)和表面張力上的不同引起的。按比例縮小的研究只是驗證的第一部分；第二部分驗證由獲取另外的正在進(jìn)行的產(chǎn)品特征數(shù)據(jù)組成。這一部分可能包括定期測量產(chǎn)品表面張力，并將其與現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)相比較，或是定期測量起泡點比

39、。在有些應(yīng)用中，應(yīng)避免工藝流體與潤濕流體的混合，因為產(chǎn)品的殘留物或是兩種液體的相互反應(yīng)可能會阻礙濾膜完全和穩(wěn)定的潤濕。產(chǎn)品潤濕的完整性檢測方法和計算公式見下文實例分析部分的討論。D. 自動完整性測試儀器有些手動完整性測試方法需要下游操作，可能危害系統(tǒng)的無菌性。自動完整性測試儀器從濾芯的上游非無菌側(cè)進(jìn)行完整性測試，回避了下游污染的風(fēng)險。使用這些儀器可保證在完整性測試過程中無菌性不受影響，相對手動測試可能有幾點優(yōu)勢，包括：l 通過壓力傳感器和流量計的使用使靈敏度提高l 最小化操作者可變性l 結(jié)果的一致性l 自動記錄結(jié)果l 軟件安全性l 確保系統(tǒng)無菌性（僅上游連接）自動完整性測試儀，其硬件和軟件，都

40、需要經(jīng)過驗證，見下文“F. 完整性測試裝置的驗證”的描述。E. 大型、多芯濾殼中過濾器的完整性測試擴(kuò)散/前進(jìn)流或起泡點測試可用來測試大型或小的過濾器組合件。然而發(fā)生在較大的組合件（如，30英寸過濾器或多芯的）上的累積擴(kuò)散流增加的數(shù)量會降低這些完整性測試的實際可應(yīng)用性。有多種完整性測試方法（例如，工程測試系統(tǒng)或擴(kuò)散檢測）可用來驗證特定工藝。一種方法是得到一個組合件特異的值來測試多個濾芯，該值低于線性累加的極限值。需要進(jìn)行風(fēng)險評估證明此方法有效。如果組合件的擴(kuò)散氣流超過正確的限值，這些過濾器可被分開測試確證其完整性。以下是起泡點和擴(kuò)散/前進(jìn)流測試需要考慮的要點：l 在對多芯組件測試最小泡點時，總擴(kuò)

41、散流可能會掩飾了其中某支處于臨界的不完整性的濾芯組件的泡點拐點。觀察到的/測量到的此組件的起泡點也許會高于具有最低起泡點濾芯的起泡點，這可能會導(dǎo)致錯誤的通過判定，不能發(fā)現(xiàn)不完整的過濾器。l 多芯組件的在指定的測試壓力下，總氣體流量也可能掩蓋了其中某一支不完整過濾芯的偏高的氣體流量?？倲U(kuò)散流量仍可能低于以組件中濾芯數(shù)目乘以單支濾芯的最大擴(kuò)散流得到的該組件的最大擴(kuò)散流限值（線性疊加極限值）。這可能導(dǎo)致錯誤的通過判定，不能發(fā)現(xiàn)不完整的過濾器。F. 完整性測試裝置的確認(rèn)完整性測試裝置的確認(rèn)與確認(rèn)其它工藝測試設(shè)備類似。完整性測試裝置的確認(rèn)從該裝置的研發(fā)開始，通常由其制造商進(jìn)行。設(shè)計確認(rèn)和裝置研發(fā)文件由制

42、造商準(zhǔn)備。這些文件可能包括在過濾器使用者驗證文件包中。運行確認(rèn)應(yīng)該包括裝置的主要功能；然而，運行確認(rèn)不一定能涵蓋功能和設(shè)置的所有可能的組合。因此風(fēng)險評估應(yīng)該包括主要功能，例如：l 作為裝置主要功能的試驗程序l 錯誤條件的探查及出錯信息l 數(shù)據(jù)處理，正確的數(shù)據(jù)輸入和輸出以及避免錯誤的選項l 測試方法本身的驗證（準(zhǔn)確度和限度）典型的驗證工作可能包括：l 軟件評估-測試參數(shù)、測試方法、儀器編程和測試l 儀器靈敏度評估l 儀器啟動l 儀器校準(zhǔn)l 進(jìn)行測試l 完整性測試性能評定（起泡點、擴(kuò)散/前進(jìn)流、壓力保持）l 其它功能的測試（體積測定、錯誤模式、無效輸入拒絕）l 測試打印輸出評估l 計算機(jī)軟件評估l

43、 密碼保護(hù)l 外圍功能評定日期/時鐘/記憶存儲/清潔G. 什么時候需要對除菌級過濾器進(jìn)行完整性測試只要過濾器被用于除菌，完整性測試就應(yīng)進(jìn)行（見圖1422）。在線測試還是離線測試過濾器由實際工藝需要決定。過濾前還是過濾后進(jìn)行完整性測試的目的不同。圖 14-22 完整性測試可選項濾前完整性測試模擬細(xì)菌截留研究的測試狀況，得到的測試值與那些于研究中得到的完整性數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)。濾前完整性測試可在過濾器滅菌前進(jìn)行，在滅菌后進(jìn)行更好。滅菌前的測試會確認(rèn)正確精度的完整過濾器已經(jīng)被正確安裝在濾殼中了。滅菌后完整性測試提供與滅菌前測試相同的信息，而且更能說明濾芯是否在滅菌過程中被損壞。當(dāng)進(jìn)行滅菌后完整性測試時，需要

44、采取措施確保系統(tǒng)的下游保持無菌。濾后完整性測試可以發(fā)現(xiàn)過濾器在過濾過程中已發(fā)生的滲漏或穿孔。濾芯完整性測試值受兩方面變化影響，一方面是在過濾過程中由于大量顆粒被捕捉而導(dǎo)致的孔隙率變化，另一方面是由于大孔被堵塞后的明顯的起泡點變化。這些改變會在工藝過程中出現(xiàn)嚴(yán)重堵塞和流量衰減時發(fā)生。完整性測試值也可能受到過濾器潤濕特性變化的影響。如果發(fā)生大量孔被堵塞或大孔被阻塞的情況時，了解濾前完整性測試值是十分重要的，以確定這種現(xiàn)象可能產(chǎn)生的影響，如果有任何影響的話。顯著的通量衰減或為了維持流量造成的壓力上升都能證明這些變化。因為濾芯孔隙率的顯著變化，或者大孔的堵塞可能會對使用后完整性檢測產(chǎn)生“正向”影響，而

45、掩飾膜的缺陷。并且，如果該缺陷在過濾前就存在，可能會導(dǎo)致濾出液非無菌?？紫堵式档秃痛罂锥氯嫩E象會分別被擴(kuò)散流的降低和起泡點的上升所證實。過濾前后進(jìn)行完整性檢測需要注意的事項，見下文實例分析部分的討論。H. 連續(xù)過濾如果某種過濾器對特定產(chǎn)品的除菌性能已經(jīng)被驗證過，那么這個單獨的除菌過濾器必須令人滿意地通過使用后完整性測試。在那些工藝中，如果組合過濾器是工藝要求并且它們對特定產(chǎn)品的除菌性能已經(jīng)被驗證過，那么這個過濾器列被看作為一個除菌單元并且其中所有除菌級過濾器均必須令人滿意地通過使用后完整性測試。確定系列中任何過濾器的使用前滅菌后完整性可能會有困難，因為可能會危及第一個過濾器的無菌下游側(cè)。過濾

46、器制造商已經(jīng)開發(fā)出不同的方法以處理這個情況，能提供相應(yīng)建議。在過濾器列中增加一個除菌級過濾器以再次確保不會因第一位的除菌級過濾器可能失效而導(dǎo)致產(chǎn)品損失，除非首要過濾器不能通過測試，否則增加的過濾器不需要進(jìn)行過濾后完整性測試。如果發(fā)生首要過濾器不能通過測試的情況，第二個過濾器或冗余的過濾器必須令人滿意地通過使用后完整性測試。（注：過濾器列中的首要過濾器應(yīng)該是系列中的最后一個。）出于工藝要求，需要對組合在一起的過濾器進(jìn)行完整性測試（如：兩個過濾器被連接在一起進(jìn)行滅菌）的，每一個過濾器均需要單獨進(jìn)行測試。需要特別注意維持兩個過濾器間通路的無菌性。包括對通過第一個過濾器的氣體進(jìn)行除菌過濾后再導(dǎo)氣到第二

47、個過濾器進(jìn)行完整性檢測。為了測試第二個過濾器，需要在第一個和第二個過濾器間裝一個閥門。關(guān)上閥門可將第一個過濾器與第二個過濾器隔開。將完整性測試主機(jī)接到第二個濾殼的完整性測試口上（將測試第一個濾殼時打開的排氣閥關(guān)閉），按常規(guī)方法測試第二個過濾器。如果使用這種方法，所有步驟都應(yīng)當(dāng)為無菌操作，用于測試的氣體應(yīng)被過濾除菌以避免污染兩個濾芯間的連接段。在滅菌過程中所有閥門應(yīng)完全打開以允許蒸汽氣穿過。I. 風(fēng)險評估注意事項與再驗證經(jīng)過驗證被用于特定除菌過濾工藝的除菌過濾器，在產(chǎn)品、工藝條件發(fā)生改變或者過濾器制造方面發(fā)生改變時，需要對過濾器的完整性進(jìn)行風(fēng)險評估，必要時應(yīng)進(jìn)行再驗證。風(fēng)險評估考慮要點包括但不限

48、于：l 同一產(chǎn)品或者同一產(chǎn)品家族的產(chǎn)品，表面張力數(shù)值可能發(fā)生的變化（如，活性成分的濃度為一個范圍而不是固定數(shù)值的情況，表面活性劑濃度變化，有機(jī)溶劑含量改變等）。l 工藝過程中，是否經(jīng)常對照完整性檢測數(shù)值與工藝下游的無菌檢測結(jié)果，如果發(fā)現(xiàn)有無菌檢測的陽性結(jié)果，應(yīng)當(dāng)重新評估工藝驗證的有效性。l 過濾壓差超過被驗證參數(shù)l 過濾面積不變的情況下提高過濾量l 單位面積的流速超過驗證參數(shù)l 產(chǎn)品配方改變，包括濃度、pH或電導(dǎo)率l 過濾器的滅菌程序改變l 改變過濾器的制造商，或者過濾器的生產(chǎn)者改變了過濾膜的配方【實例分析】A. 液體過濾器產(chǎn)品潤濕完整性測試方案目的：在指定的溫度下，測定經(jīng)特定產(chǎn)品潤濕的過濾器

49、的前進(jìn)流、壓力保持或起泡點限值。方法：通過產(chǎn)品潤濕的試驗數(shù)據(jù)和參比溶液潤濕的相應(yīng)參數(shù)來計算產(chǎn)品潤濕過濾器的完整性檢測參數(shù)，包括前進(jìn)流限值、檢測壓力以及最小起泡點。步驟：l 通過前進(jìn)流圖譜，測定參比溶液和產(chǎn)品潤濕的過濾器的氣體擴(kuò)散特性。前進(jìn)流圖譜由在逐步增加的壓力下測定完全潤濕濾膜的一系列氣流速度組成。計算出各圖譜中從擴(kuò)散氣流向大量氣流轉(zhuǎn)變的壓力值（稱為“KL壓力”）。 l 產(chǎn)品潤濕過濾器的KL壓力與參比溶液潤濕過濾器的KL壓力之比值，為“測試壓力因子”。產(chǎn)品潤濕完整性的檢測壓力，由參比溶液潤濕過濾器的檢測壓力與“測試壓力因子”的乘積獲得。（在產(chǎn)品含有表面活性劑成分的情況下，測試壓力可能需要通過

50、產(chǎn)品與參比溶液表面張力的比值來獲得。）l 通過類似于計算前進(jìn)流檢測壓力的方法用參比值來計算試驗溶液潤濕過濾器的最小起泡點。l 通過前進(jìn)流圖譜計算得到的產(chǎn)品與參比溶液擴(kuò)散流的比值，即“前進(jìn)流因子”。產(chǎn)品潤濕前進(jìn)流的限值是由參比溶液潤濕過濾器的前進(jìn)流限值與測試壓力因子以及前進(jìn)流因子三者的乘積獲得。 結(jié)論：參比溶液潤濕的完整性測試值已經(jīng)與參比溶液為載體流體的過濾器的微生物截留能力結(jié)果進(jìn)行了關(guān)聯(lián)。所以通過上述實驗過程得到的產(chǎn)品潤濕完整性檢測參數(shù)，與參比溶液的細(xì)菌截留測試結(jié)果進(jìn)行了間接關(guān)聯(lián)。在工藝驗證即實際產(chǎn)品和工藝條件下的微生物截留試驗的基礎(chǔ)上，過濾器使用者可以使用本實驗結(jié)果作為實際生產(chǎn)中日常單點完整

51、性檢測的參數(shù)。B. 完整性檢測注意事項（1）使用前完整性測試注意事項在使用后進(jìn)行完整性測試外，可進(jìn)行使用前完整性測試，在滅菌前或滅菌后，如圖1422所描述。當(dāng)濾芯裝在它的工藝濾殼中（在線）時對其進(jìn)行測試是第一選擇。然而，也有因工藝要求而需要離線測試的情況。滅菌前完整性測試可證明濾芯已被正確安裝了，使用前是完整的。也許需要進(jìn)行風(fēng)險評估以確認(rèn)它的效用。如果在滅菌后進(jìn)行完整性測試，需要特別留意不要危及無菌性。測試前，應(yīng)使用流體沖洗過濾器以將其潤濕。穿過過濾器的潤濕流體應(yīng)在無菌條件下被收集。在濾芯上游側(cè)加壓和測量，被測試的濾芯作為無菌的屏障。對于系列過濾器按照方式而言，第一個過濾器應(yīng)在第一步被潤濕（潤

52、濕流體在透過第一個過濾器后被收集）和測試。如果這個濾芯沒有通過測試，就不得不測試第二個過濾器。這將變得更加復(fù)雜，因為兩個過濾器之間的空間需要保持無菌（測試氣體必須是無菌的）。如果通過第一個過濾器測試第二個過濾器，第一個過濾器需要允許自由氣流通過以避免影響測試（需要超過起泡點以將水從大孔中排出去）。完整性測試是基于過膜壓差的；因此，下游應(yīng)通向大氣。如果不能，下游側(cè)空間應(yīng)足夠大以避免壓力上升，或者下游側(cè)的壓力應(yīng)受控制，如果壓力顯著上升就導(dǎo)致測試中途失敗。（2）過濾后完整性測試注意事項濾后完整性測試應(yīng)在過濾后立即進(jìn)行。液體產(chǎn)品的殘留物不應(yīng)在膜表面干置，如果可能，應(yīng)將其去除（使用適當(dāng)?shù)牧黧w進(jìn)行使用后沖

53、洗）。如果做不到這一點，過濾器應(yīng)當(dāng)在諸如冷藏的條件下儲存，以避免微生物生長。如果過濾器在完整性測試前冷藏過，應(yīng)讓其回復(fù)到室溫狀態(tài)，然后應(yīng)盡快進(jìn)行測試。過濾器不應(yīng)被丟棄直到完成完整性測試，直到測試結(jié)果被評估。儲存條件和期限應(yīng)被驗證以確保不會對過濾器的完整性有負(fù)面影響。C. 氣體過濾器的水侵入測試水侵入實驗背后的原理為：在低壓下，疏水性過濾膜會阻止水的通過。在低于水突破（水被壓通過）壓力下，少量但是可以測量的水的流量會發(fā)生，類似于過濾膜被潤濕后的擴(kuò)散流。在實際操作中，水侵入檢測是在低于水突破壓力下進(jìn)行的。因為水的流量低和需要在下游進(jìn)行檢測，手動的操作方法是非常不實際的。通常用自動檢測裝置，通過監(jiān)測

54、實驗用氣體流量而間接換算為通過的水的流量而進(jìn)行，在完成檢測后，試驗用水被從濾殼中導(dǎo)出。如果需要，過濾裝置也可以被通氣吹干。D. 液體過濾器完整性檢測失敗分析/故障查找如果一個除菌過濾器通不過完整性測試，有可能是損壞了，但還有其他可能導(dǎo)致失敗的原因，這包括組裝的不正確（密封不嚴(yán)）和潤濕不完全。過濾器失敗調(diào)查和再次測試步驟應(yīng)被記錄下來。為了區(qū)分過濾器損壞和可能的測試問題，或是人為因素，應(yīng)采取以下核實步驟：l 選擇了合適的完整性測試方法l 使用了正確的測試參數(shù)l 使用了正確的潤濕流體和潤濕程序l 測試系統(tǒng)無泄漏l 過濾組件的溫度在測試過程中保持穩(wěn)定并處于規(guī)范內(nèi)（例如：絕熱效應(yīng)*絕熱效應(yīng)，是指測試氣體

55、當(dāng)其進(jìn)入濾殼時快速擴(kuò)張，可能導(dǎo)致冷卻效應(yīng)，造成濾殼內(nèi)氣體的壓縮。這個絕熱效應(yīng)可能因為擴(kuò)散/前進(jìn)流在擴(kuò)張期內(nèi)持續(xù)下降，超過測試時間，導(dǎo)致假性完整性測試失敗。為了克服這個問題，可能需要為這樣的系統(tǒng)延長穩(wěn)定時間和檢測時間。）l 設(shè)備已被正確校準(zhǔn)l 測試裝置已被正確組裝并運行正常l 安裝了正確的濾芯為了證明糾正措施是有作用的，應(yīng)采取以下重復(fù)測試步驟。l 根據(jù)規(guī)范要求重新潤濕濾芯，并重復(fù)測試（見圖1423第一步）如果濾芯完整性測試再次失敗，可使用以下步驟：l 應(yīng)用更強(qiáng)力的潤濕條件，增加沖洗的體積/時間，增加壓差和/或應(yīng)用背壓（見圖1423第二步）如果濾芯完整性測試再次失敗，可使用以下步驟：l 使用低表面

56、張力的參考流體中進(jìn)行完整性測試，以確定濾芯可潤濕性變化與濾芯完整性無關(guān)（見圖1423第三步）l 如果使用參考流體過濾器不能通過測試，則過濾器不能通過測試。如果過濾器在上述失敗分析中任何一點通過完整性測試的話，那么該濾芯可被視為完整的，能夠生產(chǎn)無菌的流出液。圖1423提供了一個決策樹的例子，可用于評估完整性測試失敗。（1）對潤濕不充分導(dǎo)致的失敗的分析過濾器完整性測試失敗通常是由于濾芯的潤濕不充分引起的。潤濕不充分可能是由過濾器沖洗不充分，沒有浸濕所有的孔，或是過濾器吸附了疏水性的污染物，或是其它配方組分改變了濾膜的表面潤濕特性。潤濕特性的改變可能會影響完整性測試表現(xiàn)。例如：管道材料可能會進(jìn)入產(chǎn)品

57、流中，被濾膜吸附，影響了膜的潤濕性質(zhì)，從而導(dǎo)致完整性測試失敗。為了獲得合適的完整性測試結(jié)果，過濾器的多孔結(jié)構(gòu)應(yīng)被完全潤濕，因為完整性測試方法的物理本質(zhì)依靠的是氣體流穿過潤濕液體層。濾膜的潤濕會受以下因素影響：l 膜聚合物：有些聚合物比其它種類容易潤濕，依賴于膜材的臨界表面張力。l 孔的大?。嚎自叫≡诫y潤濕。l 潤濕流體：某些潤濕流體可能與聚合物矩陣有相斥的相互作用。l 產(chǎn)品殘留或污染物：產(chǎn)品殘留物或污染物會改變膜聚合物的親水性，排斥潤濕流體或降低表面引力。l 壓力條件：應(yīng)該遵循制造商的壓力推薦值以使膜完全潤濕。l 溫度條件：溫度影響潤濕流體的表面張力。（2）除了上述這些，還可能有與工藝或應(yīng)用相關(guān)、而制造商的使用描述沒有涉及的因素影響完整性測試。上述“D. 完整性檢測失敗分析/故障查找”部分描述的疑難解答和圖1423