《DNA的粗提取與鑒定》課件

1、實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理1. DNA1. DNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度，是隨著溶液中的溶解度，是隨著NaClNaCl的濃的濃度的變化而改變的。當(dāng)度的變化而改變的。當(dāng)NaClNaCl的物質(zhì)的量濃度為的物質(zhì)的量濃度為0.14 mol0.14 molL L時(shí)時(shí),DNA,DNA的溶解度的溶解度最低最低。利用這一利用這一原理，可以使溶解在原理，可以使溶解在NaClNaCl溶液中的溶液中的DNADNA析出。析出。2.DNA2.DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少

2、的一步提取出含雜質(zhì)較少的DNADNA。3.DNA3.DNA遇二苯胺（沸水?。?huì)染成藍(lán)色遇二苯胺（沸水?。?huì)染成藍(lán)色，因此，因此，二苯胺可以作為鑒定二苯胺可以作為鑒定DNADNA的試劑。的試劑。3 3、合適的材料：、合適的材料：2 2、植物細(xì)胞、植物細(xì)胞植物細(xì)胞需要先植物細(xì)胞需要先用一定的洗滌劑和用一定的洗滌劑和食鹽溶解細(xì)胞膜食鹽溶解細(xì)胞膜 實(shí) 例 ： 提 取 花 菜實(shí) 例 ： 提 取 花 菜DNADNA時(shí)，在切碎的花時(shí)，在切碎的花菜中加入一定的洗滌菜中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過(guò)濾的攪拌和研磨，過(guò)濾后收集研磨液后收集研磨液討論：如果研磨不充分，會(huì)對(duì)討論：如

3、果研磨不充分，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？具體做法。具體做法。10mL雞血雞血20mL蒸餾水蒸餾水同同方向攪拌方向攪拌3層尼龍布過(guò)濾層尼龍布過(guò)濾濾液濾液為 什 么 反 復(fù)為 什 么 反 復(fù)地 溶 解 與 析地 溶 解 與 析出出DNADNA，能夠，能夠去除雜質(zhì)去除雜質(zhì)方案一、在濾液中加入方案一、在濾液中加入NaClNaCl，使，使NaClNaCl溶液濃度溶液濃度為為2mol/L2mol/L，過(guò)濾除去，過(guò)濾除去不溶的雜質(zhì)不溶的雜質(zhì)，再加入蒸餾，再加入蒸餾水，調(diào)節(jié)水，調(diào)節(jié)NaClNaCl溶液濃度為溶液濃度為0.14mol/L0.14mol/L，析出，析出DNADNA，過(guò)濾除

4、去，過(guò)濾除去溶液中的雜質(zhì)溶液中的雜質(zhì)，在用，在用2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶解溶液溶解DNADNA。 方案二、直接在濾液中加入嫩肉粉，反應(yīng)方案二、直接在濾液中加入嫩肉粉，反應(yīng)10101515分鐘。分鐘。方案三、將濾液放在方案三、將濾液放在606075750 0C C的恒溫水浴箱中保溫的恒溫水浴箱中保溫10101515分鐘。分鐘。為了純化提取的為了純化提取的DNADNA需要將濾液作進(jìn)一步處理需要將濾液作進(jìn)一步處理討論：此步驟獲得的濾液中可能含有討論：此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？哪些細(xì)胞成分？具體做法具體做法: :方案一：方案一：30mL濾液濾液35gNaCl同方

5、向攪拌，同方向攪拌，DNA溶解溶解加入蒸餾水加入蒸餾水DNA析出析出過(guò)濾得到過(guò)過(guò)濾得到過(guò)濾物濾物放到放到2mol/LNaCl溶液中溶解溶液中溶解DNA-NaCl溶解液溶解液方案二：方案二：30mL濾液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）濾液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）靜置靜置1015分鐘分鐘DNA濾液濾液方案三：方案三：30濾液濾液6075處理處理過(guò)濾獲得過(guò)濾獲得DNA濾液濾液1、以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每、以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100ml血液中需要加入血液中需要加入3g檸檬酸鈉，防止檸檬酸鈉，防止血液凝固。血液凝固。2、加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔、加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不和，否則容易

6、產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟的操作。加入酒精和利于后續(xù)步驟的操作。加入酒精和玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免加劇加劇DNA分子的斷裂，導(dǎo)致分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分分子不能形成絮狀沉淀。子不能形成絮狀沉淀。3、二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會(huì)、二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會(huì)影響鑒定的效果。影響鑒定的效果。制備雞血細(xì)胞液制備雞血細(xì)胞液加檸檬酸鈉，靜置或離心加檸檬酸鈉，靜置或離心破碎細(xì)胞，釋放破碎細(xì)胞，釋放DNA 加蒸餾水，同一方向快速通方向攪拌加蒸餾水，同一方向快速通方向攪拌過(guò)濾，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等。過(guò)濾，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等。溶解核內(nèi)溶解核內(nèi)DNA 加入加入NaCl至至

7、2mol/L，同一方向緩慢攪拌，同一方向緩慢攪拌DNA析出析出加蒸餾水至加蒸餾水至0.14mol/L，過(guò)濾，在溶解到，過(guò)濾，在溶解到2mol/L溶液中溶液中除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)。除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)。DNA初步純化初步純化與等體積與等體積95冷卻酒精混合，析出白色絲冷卻酒精混合，析出白色絲狀物狀物除去核蛋白、除去核蛋白、RNA、多糖等。、多糖等。DNA鑒定鑒定 二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色歸納歸納檸檬離下一水濾，二鈉三水四濾黏，檸檬離下一水濾，二鈉三水四濾黏，五鈉六濾七酒析，八胺沸浴鑒為藍(lán)。五鈉六濾七酒析，八胺沸浴鑒為藍(lán)。檸檬檸檬酸鈉酸鈉離心離心沉沉淀淀物物吸水吸水漲破漲破過(guò)濾得過(guò)濾得到濾渣到濾渣2mol/l2mol/l的的NaclNacl加水加水稀釋稀釋過(guò)濾得