重金屬檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、 -重金屬檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號：QC-FF-0007版本號：00第 6 頁 共 6 頁目的：建立重金屬檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程范圍：本規(guī)范適用于重金屬檢查法檢查職責(zé)：質(zhì)量控制部全體人員內(nèi)容：1.簡述重金屬是指在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下能與顯色劑作用顯色的金屬雜質(zhì)。采用硫代乙酰胺試液或硫化鈉試液作顯色劑，以鉛的限量表示。由于實(shí)驗(yàn)條件不同，分為4種檢查方法：第一法適用于供試品不經(jīng)有機(jī)破壞，在酸性溶液中進(jìn)行顯色的重金屬限度檢查；第二法適用于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?jīng)處理后在酸性溶液中進(jìn)行顯色的重金屬限度檢查；第三法用來檢查能溶于堿而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的藥品中的重金屬；第四法

2、用微孔濾膜過濾，使重金屬硫化物沉淀富集成色斑，用于有色溶液或重金屬限度較低的品種。檢查時(shí)，應(yīng)根據(jù)藥典品種項(xiàng)下規(guī)定的方法選用。四種方法顯示的結(jié)果均為微量重金屬的硫化物微粒均勻混懸在溶液中所呈現(xiàn)的顏色；采用濾膜法可獲得“色斑”；如果重金屬離子濃度大，加入顯色劑后放置時(shí)間長，就會(huì)有硫化物聚集下沉。重金屬硫化物生成的最佳PH值是3.0-3.5，選用醋酸鹽緩沖液（PH3.5）2.0ml調(diào)節(jié)PH較好，顯色劑硫代乙酰胺試液用量經(jīng)實(shí)驗(yàn)也以2.0ML為佳，顯色時(shí)間一般為2分鐘。以10-20g的Pb與顯色劑所產(chǎn)生的顏色為最佳目視比色范圍。在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下，與硫代乙酰胺試液在弱酸條件下產(chǎn)生的硫化氫呈色的金屬離子有銀

3、、鉛、汞、銅、鎘、鉍、銻、錫、砷、鋅、鈷與鎳等。由于在藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多，且鉛易積蓄中毒，故以鉛作為重金屬的代表，用硝酸鉛配制標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液。2.儀器與用具2.1納氏比色管50ml應(yīng)選玻璃質(zhì)量好、無色（尤其管底）、配對、刻度標(biāo)線高度一致的納氏比色管。2.2濾器 見中國藥典重金屬檢查法第四法附圖，由具有螺紋絲扣并能密封的上、下兩部分以及墊圈、濾膜和輔助濾板組成。2.2.1濾器上蓋部分A的入口處應(yīng)能與50ML注射器緊密聯(lián)接，濾器下部F的出口處能套上一合適橡皮管。A與F能通過螺紋絲扣密封。2.2.2墊圈應(yīng)內(nèi)徑光滑、大小相同，以使斑點(diǎn)邊緣圓整、清楚、大小一致。在濾器上加上橡皮墊圈，既可使濾膜與

4、濾板緊密結(jié)合，又可避免在旋緊濾器接頭時(shí)扭曲或損壞濾膜。2.2.3濾膜的直徑為10MM，孔徑為3.0m，使用前在水中浸泡24小時(shí)以上，可使色斑均勻。2.2.4 50ml注射器，應(yīng)能與濾器上蓋入口處緊密聯(lián)接。3.試藥和試液3.1標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液 精密稱取在105干燥至恒重的硝酸鉛0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于10g的Pb）。3.2硫代乙酰胺試液、硫化鈉試液、醋酸鹽緩沖液（PH3.5）與抗壞血酸等均按藥的規(guī)定。3.3稀焦糖溶液 取蔗糖或葡萄糖

5、約5g，置磁坩堝中，在玻璃棒不斷攪拌下，加熱至呈棕色糊狀，放冷，用水溶解成約25ml，濾過，貯于滴瓶中備用。臨用時(shí)，根據(jù)供試液色澤深淺，取適當(dāng)量調(diào)節(jié)使用。4.操作方法4.1第一法 4.1.1除另有規(guī)定外，取25ml納氏比色管兩支，甲管中加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量與醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml后,加水或各藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml,乙管中加入按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的方法制成的供試液25ml；若供試液帶顏色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液，使之與乙管一致；再在甲乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較,不得更深。

6、4.1.2如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使顏色一致時(shí)，可取該藥品項(xiàng)下規(guī)定的二倍量的供試品和試液，加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑使成30ml，將溶液分成甲乙二等份，乙管中加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml；甲管中加入硫代乙酰胺試液2ml，搖勻,放置2分鐘，經(jīng)濾膜(孔徑3m)濾過，然后甲管中加入標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑使成25ml；再分別在乙管中加硫代乙酰胺試液2ml，甲管中加水2ml，照上述方法比較，即得。4.1.3供試品如含高鐵鹽影響重金屬檢查時(shí)，可取該藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試溶液，加抗壞血酸0.51.0g，并在對照液中加入相同量的抗壞血酸，再照上述方法檢查。4.1.4

7、配制供試品溶液時(shí)，如使用的鹽酸超過1.0ml（或與鹽酸1.0ml相當(dāng)?shù)南←}酸），氨試液超過2ml,或加入其他試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，對照液中應(yīng)取同樣同量的試劑置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與水15ml,微熱溶解后,移置納氏比色管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，再用水稀釋成25ml。4.2第二法4.2.1除另有規(guī)定外，取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，加硝?.5ml，蒸干,至氧化氮蒸氣除盡后（或取供試品一定量，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51.0ml,使恰濕潤,用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500600熾灼使完全灰化），放冷，加鹽

8、酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml,滴加氨試液至對酚酞指示液顯中性,再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，微熱溶解后,移置納氏比色管中，加水稀釋成25ml；4.2.2另取配制供試品溶液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與水15ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，再用水稀釋成25ml；照上述第一法檢查，即得。4.3第三法除另有規(guī)定外，取供試品適量,加氫氧化鈉試液5ml與水20ml溶解后，置25ml納氏比色管中，加硫化鈉試液5滴，搖勻，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液同樣處理后的顏色比較，不得更深。4.4第四法4.4.1標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備 精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，置

9、小燒杯中，加水或各品種項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成 ，加入醋酸鹽緩沖液（PH3.5）2.0ml與硫代乙酰胺試液1ml，搖勻，放置10分鐘，用50ml注射器轉(zhuǎn)移至過濾器中進(jìn)行壓濾（濾速約為每分鐘1ml），濾畢，取下濾膜，放在濾紙上千燥，即得。4.4.2檢查法 照各品種項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試液10ml，照4.4.1標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備，自“醋酸鹽緩沖液（PH3.5）2.0ml ”起，依法操作，將生成的色斑與標(biāo)準(zhǔn)鉛斑比較，不得更深。4.4.3若供試溶液有顏色或渾濁，應(yīng)用濾膜進(jìn)行預(yù)濾，如濾膜上有污染，應(yīng)換濾膜再濾，直至濾膜不再染色；然后取濾液 ，照 標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備，自“醋酸鹽緩沖液（PH3.5）2.0ml”起，依法

10、操作。所得供試液的鉛斑與標(biāo)準(zhǔn)鉛斑比較，不得更深。5.注意事項(xiàng)5.1標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液應(yīng)在臨用前精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液新鮮稀釋配制，以防止硝酸鉛水解而造成誤差，配制與貯存標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液使用的玻璃容器，均不得含有鉛。5.2硫代乙酰胺試液與重金屬反應(yīng)的最佳PH 值是3.5，故配制醋酸鹽緩沖液（PH3.5）時(shí)，要用PH計(jì)調(diào)節(jié)，硫代乙酰胺試液加入量以2.0時(shí)呈色最深；第四法中的檢測范圍為2-5g的Pb，且因體積小，所以硫代乙酰胺試液的用量為1.0ml。硫代乙酰胺試液顯色劑的最佳顯色時(shí)間為2分鐘，除第四法由于檢測限量低，且為了方便過濾，顯色時(shí)間為10分鐘外，第一、二法均為放置2分鐘。5.3為了便于目視比較，第一、二和三

11、法中的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液用量以 （相當(dāng)于20g的Pb）為宜，小于1.0ml或大于3.0ml，呈色太淺或太深，均不利于目視比較。5.4如需將熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)髦亟饘贆z查時(shí)，則熾灼溫度必須控制在500-600。實(shí)驗(yàn)證明，熾灼溫度在700以上時(shí)，多數(shù)重金屬鹽都有不同程度的損失。5.5在熾灼時(shí)能腐蝕瓷坩堝而帶入較多的重金屬，應(yīng)改用石英坩堝或鉑坩堝操作。熾灼殘?jiān)酉跛崽幚恚仨氄舾?，至氧化氮蒸氣除盡，否則會(huì)使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫，因氧化析出乳硫，影響檢查。蒸干后殘?jiān)欲}酸處理，使重金屬轉(zhuǎn)化為氯化物，在水浴上蒸干以趕除多余的鹽酸，加水溶解，加入酚酞指示液1滴，再逐滴加入氨試液，邊加邊攪拌，直到溶液剛顯

12、淺紅色為止，再加醋酸鹽緩沖液（PH3.5），使供試液的PH調(diào)節(jié)至3.5。5.6供試品中如含有高鐵鹽，在弱酸性溶液中會(huì)使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫進(jìn)一步氧化析出乳硫，影響檢查，可加入抗壞血酸將高鐵離子還原為亞鐵離子而消除干擾。5.7如供試品自身為重金屬的鹽，在檢查這類藥品中的其他重金屬時(shí)，必須先將供試品本身的金屬離子除去，再進(jìn)行檢查。如在枸櫞酸鐵銨中檢查鉛鹽時(shí)，利用在一定濃度的鹽酸中形成 ，用乙醚提取除去，再調(diào)節(jié)供試液至堿性，用氰化鉀試液掩蔽微量的鐵后進(jìn)行檢查；右旋醣酐鐵注射液中重金屬檢查，也是在一定濃度的鹽酸中，用醋酸異丁酯提取除去鐵鹽后進(jìn)行檢查。5.8藥品本身生成的不溶性硫化物，影響重金屬檢

13、查，可加入掩蔽劑以避免干擾。如硫酸鋅和葡萄糖酸銻鈉中鉛鹽檢查，是在堿性溶液中加入氰化鉀試液，或在中性溶液中加入酒石酸，使鋅離子或銻離子生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，再依法檢查。5.9為了消除鹽酸或其他試劑可能夾雜重金屬，故在配制供試品溶液時(shí)，如使用鹽酸超過1.0ml（或與鹽酸1.0ml相當(dāng)?shù)南←}酸）或使用氨試液超過2.0ml，以及用硫酸或硝酸進(jìn)行有機(jī)破壞，或加入其他試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，對照溶液應(yīng)取同樣量試液蒸干后，依法檢查。5.10當(dāng)采用第四法時(shí)，將注射器套于濾器上后，讓注射器內(nèi)管自然下降，產(chǎn)生的壓力比較均勻，而且對于大多數(shù)樣品溶液過濾速度達(dá)到每分鐘左右；對于較粘稠的樣品溶液，可施加一均勻壓力使

14、達(dá)到該速度，以保證色斑上色調(diào)的均勻性。濾過時(shí)如濾器中存在氣泡則會(huì)影響色斑質(zhì)量，故在裝置輔助濾板（尼龍墊網(wǎng)）、濾膜和墊圈時(shí)應(yīng)以水排除氣泡。濾器上端與注射器連接處的尺寸大小應(yīng)以兩者能嚴(yán)密嵌合為宜，以免濾過時(shí)溶液溢漏；必要時(shí)可改用乳膠管連接。6.記錄與計(jì)算6.1記錄 必須記錄所采用的方法，供試品取樣量，標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液取用量，操作過程中使用的特殊試劑，試液名稱和用量或?qū)z查結(jié)果有影響的試劑用量，實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)的現(xiàn)象及實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。6.2計(jì)算6.2.1標(biāo)準(zhǔn)鉛溶濃度計(jì)算1mol的硝酸鉛的質(zhì)量為331.2g，含鉛為207.2g，稱取硝酸鉛0.1598g配制1000ml貯備液，含鉛量為：（207.2×0.1598×1000）÷（331.2×1000）=0.1000mg/ml貯備液依法稀釋10倍后所得標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液為每1ml含10g的Pb。6.6.2重金屬限量計(jì)算 進(jìn)行檢查時(shí)，如取供試品1.0g，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2.0ml制成的對照液比較，計(jì)算重金屬限量。重金屬限量%=標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液體積×標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度/供試品量 ×100%6.2.3標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液取樣量計(jì)算 根據(jù)取供試品量及限量計(jì)算公式：V=(重金屬限量×供試品重/標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度)，7.結(jié)果