臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法

1、臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法第一章 總 則第一條 為規(guī)范臨床基因擴增檢驗實驗室管理， 保證臨床基因擴增檢驗質量， 使臨床診斷和治療更為科學、合理，特制定本辦法。第二條 臨床基因擴增檢驗技術指以臨床診斷治療為目的，以擴增檢測DNA RNA為方法的檢測技術，如聚合酶鏈反應（ PCR、連接酶鏈反應（LCR）、轉錄依賴的放大系統（TAS）自主序列復制系統（3SR）和鏈替彳t擴增（SDA等。第三條 本辦法適用于開展臨床基因擴增檢驗的實驗室。 臨床基因擴增檢驗實驗室設立在二級以上醫(yī)院。第四條臨床基因擴增檢驗實驗室必須使用經國家藥品監(jiān)督管理局批準的臨床檢驗試劑開展臨床基因擴增檢驗項目。第五條衛(wèi)生部臨床

2、檢驗中心（以下簡稱衛(wèi)生部臨檢中心）和省、自治區(qū)、直轄市臨床檢驗中心 （以下簡稱省臨檢中心） 負責對所轄行政區(qū)域內臨床基因擴增檢驗實驗室的質量監(jiān)督管理工作。第二章 實驗室設置和驗收第六條 擬設置臨床基因擴增檢驗實驗室的醫(yī)療機構按照 臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準 （見附件）籌建實驗室；籌建完成后，由法定代表人向衛(wèi)生部臨檢中心提出技術驗收申請。申請時需提交以下材料：（一）醫(yī)療機構執(zhí)業(yè)許可證復印件；（二）可行性研究報告；1 、 擬設臨床基因擴增檢驗實驗室機構的所在地醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、本機構的基本情況、對臨床基因擴增檢驗的需求以及臨床基因擴增實驗室運行的預測分析；2 、擬設臨床基因擴增檢驗實驗室的

3、設置平面圖；3 、擬設臨床基因擴增檢驗實驗室將開展的檢驗項目、實驗設備條件和有關技術人員資料第七條 衛(wèi)生部臨檢中心和省臨檢中心共同組織相關專業(yè)的專家組 （以下簡稱專家組）， 按照臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準對提出申請的臨床基因擴增檢驗實驗室進行技術驗收。驗收完成后，在20 日內將驗收報告寄送至申請機構。第八條 經專家組技術驗收合格的醫(yī)療機構將本辦法第六條規(guī)定的材料及專家組驗收報告送至省級行政部備案。在將符合規(guī)定的全部材料送達省級衛(wèi)生行政部門后 15 日內未收到省級衛(wèi)生行政部門不同意的意見， 方可開展專家組技術驗收合格的臨床基因擴增檢驗項目。第九條 未經專家組驗收合格并報省級衛(wèi)生行政部門備

4、案的醫(yī)療機構不得擅自開展臨床基因擴增檢驗項目。第三章 實驗室監(jiān)督管理第十條 臨床基因檢驗實驗室必須按照 臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范 （另發(fā)）開展臨床基因擴增檢驗工作。第十一條 臨床基因擴增檢驗實驗室技術人員必須進行上崗培訓。經培訓合格者，由培訓單位發(fā)給合格證書， 并將培訓合格人員名單報衛(wèi)生部臨檢中心備案。 獲得培訓合格證書者方可從事臨床基因擴增檢驗工作。培訓單位為衛(wèi)生部臨檢中心，或由省級衛(wèi)生行政部門指定并經衛(wèi)生部臨檢中心認定的機構。培訓時使用規(guī)定的統一教材。第十二條 以科研為目的的基因擴增檢驗項目。 不得向臨床出具檢驗報告， 不得向病人收取任何費用。展室內質量控制，并參加衛(wèi)生部臨檢中心組織

5、的室內質量評價。第十三條 臨床基因擴增檢驗實驗室必須按照 臨床基因擴增實驗室工作規(guī)范 開第十四條衛(wèi)生部臨檢中心按照本方法和臨床基因擴增實驗室工作規(guī)范協調、組織省臨檢中心對臨床基因擴增檢驗實驗室的檢驗質量進行監(jiān)測。監(jiān)測結果報省級衛(wèi)生行政部門，同時抄送被監(jiān)測的臨床基因擴增檢驗實驗室所在醫(yī)療機構。第十五條衛(wèi)生部臨檢中心或省級臨檢中心受省級以上衛(wèi)生行政部門委托可對臨 床基因擴增檢驗實驗室進行現場檢查，現場檢查工作人員在履行職責時應出示證件。在進行現場檢查時，檢查人員有權調閱有關資料，被檢查機構不得拒絕或隱瞞。第十六條 衛(wèi)生部臨檢中心對在室間質量評價中不合格的臨床基因擴增檢驗實驗 室提出警告，對連續(xù)二次

6、或三次中有二次發(fā)現臨床基因擴增檢驗結果不合格的臨床基因擴增 檢驗實驗室，衛(wèi)生部臨檢中心報省級以上衛(wèi)生行政部門由省級以上衛(wèi)生行政部門責令其暫停 有關臨床基因擴增檢驗項目，限期整改。經專家組進行再次技術驗收并合格，并報省級衛(wèi)生行政部門核準后，方可重新開展臨床基因擴增檢驗項目。第十七條對于未經衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組技術驗收合格并報省級衛(wèi)生部門備案，擅自開展臨床基因檢驗項目的醫(yī)療機構，由省級衛(wèi)生行政部門依據 醫(yī)療機構管理條例第四十七條和醫(yī)療機構管理條例實施細則第八十條予以處罰，并予以公告。公告 所需費用由被公告機構支付。第十八條 出現下列情況之一的臨床基因擴增檢驗實驗室， 由省級衛(wèi)生行政部門責 令

7、其停止開展臨床基因擴增檢驗，并對其所在醫(yī)療機構予以公告。公告所需費用由被公告機 構支付：（一）開展超出衛(wèi)生部臨檢中心組織的技術驗收合格并報省級衛(wèi)生行政部門備案 臨床基因擴增檢驗項目的；（2） 使用未經國家藥品監(jiān)督管理局批準的試劑開展臨床基因擴增檢驗的；（3） 在臨床基因擴增檢驗中未開展室內質量控制的；（4） 在臨床基因擴增檢驗中未參加室間質量評價的；（五） 在臨床基因擴增檢驗中弄虛作假的；以科研為目的的基因擴增檢驗項目向病人收取費用的；（七） 使用未經培訓合格的專業(yè)技術人員從事臨床基因擴增檢驗的；第四章 附 則第十九條對采供血機構的基因擴增檢驗實驗室開展基因擴增檢驗項目的管理，參照本辦法執(zhí)行。

8、第二十條衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組對申請開展臨床基因擴增檢驗的實驗室進行技術驗收所需費用按國家有關規(guī)定執(zhí)行。第二十一條本辦法由衛(wèi)生部負責解釋。第二十二條本辦法自發(fā)布之日起施行。附：臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準根據臨床檢驗擴增檢驗實驗室管理暫行辦法，制定本標準一、 臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設置原則（1） 臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設置原則1 、試劑儲存和準備區(qū)2 、標本制備區(qū)3 、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)4 、擴增產物分析區(qū)如使用全自動分析儀，區(qū)域可適當合并。（2） 各工作區(qū)域必須有明確的標記，避免不同工作區(qū)域內的設備、物品混用。進入各工作區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行，即試劑儲存和準備

9、區(qū)標本制備區(qū)擴增反應混合物配制和擴增區(qū)擴增產物分析區(qū)。（四） 不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時，不得將工作服帶出。二、 工作區(qū)域儀器設備配置標準（1） 試劑儲存和準備區(qū)1、2-8C 和-15C 冰箱2 、混勻器3 、微量加樣器（覆蓋1-1000ul ）4 、移動紫外燈（近工作臺面）5 、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）6 、專用工作服和工作鞋7 、專用辦公用品（2） 標本制備區(qū)1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱2 、高速臺式冷凍離心機3 、混允器4 、水浴箱或加熱模塊5 、微量加樣器（覆蓋1-1000ul

10、 ）6 、可移動紫外燈（近工作臺面）7 、超凈工作臺8 、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）9 、專用工作服和工作鞋10 、專用辦公用品如需處理大分子DNA應具有超聲波水浴儀。（3） 擴增反應混合物配制和擴增區(qū)1 、核酸擴增儀2 、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）3 、可移動紫外燈（近工作臺面）4 、 消耗品： 一次性手套、 一次性吸水紙、 耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭 （帶濾心）5 、專用工作服和工作鞋6 、專用辦公用品（ 四）擴增產物分析區(qū)視檢驗方法不同而定?；緝x器設備如下：1 、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul ）2 、 可移動紫外燈（近工

11、作臺面）3 、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）4 、專用工作服和工作鞋5 、專用辦公用品為了對以個特定序列進行PCR做重復檢測，需要三個不同的區(qū)域，每一個區(qū)域的具體技術操作和試劑在下面詳細列出 .1 、樣品準備區(qū)這個區(qū)域專門用作樣品的準備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時應該采取預防措施：1） PCRT物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。2）組織培養(yǎng)物、組織標本和血清樣品都帶進樣品準備間處理，以根據應用的需要提取 DNA RNA3） 用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆 的工具， 也不能用作操作靶序列。4） DNA羊品應該用有專門的防護或正壓活塞式移液

12、管操作，以防止在吸取樣品時 有氣溶膠遺留。5）大體積樣品應該用單獨包裝的無菌一次性移液管吸取。6）管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產生，而且管子不能用力崩開，這樣會產生氣溶膠。7）任何時候都應該穿實驗服和帶手套，手套要經常更換，尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實驗服要專門用于樣品準備間，經常清洗。2、樣品準備和RNA-PCRRNA-PCR勺額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機會。為了避免這一問題，反轉錄一步可以在樣品準備區(qū)進行。在RNA-PC珅應用UN3防止污染的方法也有報道。3、前 PCRK必須有專門用于準備各種反應的區(qū)域， 這個區(qū)域必須保持干凈， 而且沒有來自 克

13、隆 和樣品準備的污染。前PCRK必須要有試劑和準備，特別是專門用于前 PCRM的正壓活塞式 移液管。4、PCR實驗室試劑的操作1）所用的所有溶液都應該沒有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase?）污染。2）所有PCR式劑中使用的水都應該是高質量的一新鮮蒸儲的去離子水，用過濾的，并且是高壓滅菌。3） 在 20到25貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品制備試劑中加入%的疊氮鈉不抑制擴增反應。4）所用試劑都應該以大體積配制，實驗一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進行貯存。5）所有試劑和樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。6）新配制的試劑在用于準備新的

14、標本之前應該加以檢驗。7）樣品準備和前 PCRK所使用的移液管在不使用時都應該小心保存。5、在前PCRK建立PCR昆合物1）可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在 -20 或4 ，在實驗室只涉及到擴增一種或少數幾種特異序列時這樣做很有用。2）如果你的實驗室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應混合物不夠經濟，可以考慮分裝保存夠一天的PC做分。3）作為一個規(guī)則，應該保存一套陰性、弱陽性和強陽性對照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過使用一個已知的弱陽性樣品來驗證你 的樣品緩沖液以證明里面不含擴增抑制物。4）陰性樣品要與每組樣品同時做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCRT物的污染，陰性對照應該包括核酸以外的所有試劑。5）當做陽性對照時，有兩個理由決定了應該使用最少數量的核酸。6）由于必須有對照反應，對照模板的特點應該予以考慮。6、