生物化學(xué)實驗1-糖類的性質(zhì)實驗

1、2021/8/141生物化學(xué)實驗n一、糖類的性質(zhì)實驗 n二、可溶性蛋白質(zhì)含量的測定 n三、粗脂肪的提取和定量測定 n四、維生素C含量測定 n五、氨基酸的分離與鑒定濾紙層析法n六、蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗 2021/8/142課程任務(wù)n對理論知識的鞏固和應(yīng)用，培養(yǎng)理論聯(lián)系實際的意識，培養(yǎng)用基礎(chǔ)知識分析問題、解決問題的能力n復(fù)習鞏固實驗基本技能，學(xué)習新的實驗方法和操作技能，學(xué)習儀器設(shè)備的使用n培養(yǎng)進行科學(xué)實驗應(yīng)具備的基本素質(zhì)：誠實、科學(xué)、嚴謹、探索創(chuàng)新精神、能吃苦耐勞等。2021/8/143紀 律n每批次人員、分組固定，上課準時點名，遲到5min以上者拒絕進入教室n實驗室內(nèi)不得高聲閑談嬉笑，必須保持安靜的

2、實驗環(huán)境。n愛護儀器，不浪費藥品，節(jié)約水電，遵守實驗室的安全措施。n濾紙、火柴棒、碎玻璃等固體廢棄物切勿丟入水池內(nèi)，有毒有害試劑應(yīng)統(tǒng)一回收入廢液桶。n儀器或?qū)嶒炂鞑娜缬袚p壞，應(yīng)自行登記，并立即向指導(dǎo)老師報告。n 保持實驗室的整齊清潔，個人所帶與實驗無關(guān)的東西，不得亂放在實驗桌上。n實驗室內(nèi)一切物品，未經(jīng)實驗室負責老師批準嚴禁帶出室外，借物必須辦理登記手續(xù)。n 每次實驗后各小組清洗干凈實驗器材、打掃本組實驗臺桌、提每次實驗后各小組清洗干凈實驗器材、打掃本組實驗臺桌、提交實驗記錄，老師驗收合格后方可離開實驗室；每次留下一個大交實驗記錄，老師驗收合格后方可離開實驗室；每次留下一個大組負責當天實驗室的

3、地面衛(wèi)生和公用儀器設(shè)備整理復(fù)位，以及一組負責當天實驗室的地面衛(wèi)生和公用儀器設(shè)備整理復(fù)位，以及一些其它服務(wù)性工作。最后離開實驗室時，應(yīng)檢查水、電、門窗等些其它服務(wù)性工作。最后離開實驗室時，應(yīng)檢查水、電、門窗等是否關(guān)好。是否關(guān)好。n實驗課上禁止播放音樂、禁止玩游戲。實驗室禁止飲食和吸煙。2021/8/144實驗要求n每次實驗前必須詳細預(yù)習預(yù)習實驗教材，明了實驗?zāi)康摹⒃矸椒安僮鞑襟E，并在記錄本上擬出簡單的操作步驟、儀器使用方法及實驗操作注意事項。n在實驗過程中，要聽從老師的指導(dǎo)，嚴格按照實驗步驟進行，不能任意更改，不熟悉的儀器設(shè)備，切勿隨意亂動不熟悉的儀器設(shè)備，切勿隨意亂動，應(yīng)先請老師指導(dǎo)后使用

4、n實驗時如有問題發(fā)生，應(yīng)首先用自己學(xué)過的知識，獨立思考加以解決，努力培養(yǎng)獨立分析問題和解決問題的能力，如自己不能解決可與指導(dǎo)老師共同討論研究，提出解決問題的辦法。 n實驗進行時，必須隨時把觀察到的現(xiàn)象和實驗數(shù)據(jù)，如實地記錄在記錄本上，不得記在散頁紙上，要養(yǎng)成良好的做原始記錄的習慣養(yǎng)成良好的做原始記錄的習慣。n環(huán)境和儀器的清潔整齊是搞好實驗的重要條件，實驗臺面試劑藥品架上必須保持整潔，儀器藥品要井然有序，所用的試劑，用完應(yīng)立即蓋嚴放回原處。用完應(yīng)立即蓋嚴放回原處。注意瓶塞切勿張冠李戴。勿使試劑藥品灑在實驗臺面和地上。實驗完畢后，實驗完畢后，需將藥品試劑排列整齊，儀器設(shè)備要恢復(fù)原狀。將實驗臺面打掃

5、干凈，經(jīng)教需將藥品試劑排列整齊，儀器設(shè)備要恢復(fù)原狀。將實驗臺面打掃干凈，經(jīng)教師驗收儀器后，方可離開實驗室。師驗收儀器后，方可離開實驗室。n對實驗的內(nèi)容和安排不合理的地方可提出改進意見對實驗中出現(xiàn)的一切反?，F(xiàn)象應(yīng)進行討論，并大膽提出自己的看法，做到生動活潑，主動地學(xué)習。2021/8/145實驗記錄n實驗課前應(yīng)認真預(yù)習，將實驗名稱、目的和要求、原理、實驗內(nèi)容、操作方法和步驟簡單扼要地寫在記錄本上 n實驗中觀察到的現(xiàn)象，結(jié)果和數(shù)據(jù)應(yīng)及時如實地記在記錄本上。絕對不可以用單片紙做記錄或草稿。原始記錄必須準確、簡練詳盡、清楚。從實驗開始就應(yīng)養(yǎng)成這種良好的習慣。n記錄時應(yīng)做到正確記錄實驗結(jié)果，切勿夾雜主觀因

6、素，并根據(jù)儀器的精確度準確記錄有效數(shù)字。重復(fù)觀測時即使數(shù)據(jù)完全相同也應(yīng)如實記錄下來 n實驗中使用儀器的類型，編號以及試劑的規(guī)格、化學(xué)式、分子量準確的濃度等，都應(yīng)記錄清楚，以便總結(jié)實驗時，進行核對和作為查找失敗原因的參考依據(jù) 2021/8/146實驗報告的格式 實驗結(jié)束后，應(yīng)及時整理和總結(jié)實驗結(jié)果，寫出實驗報告，報告的形式可參照下列方式： n實驗時間 實驗項目名稱 實驗地點 n一、目的和要求： n二、原理：n三、實驗材料及預(yù)處理n四、試劑及配制n五、實驗儀器：n 六、操作步驟：n七、實驗結(jié)果(數(shù)據(jù)記錄及處理)： n八、討論：2021/8/147報告書寫總體說明n在實驗報告中，目的和要求、原理以及

7、操作步驟部分應(yīng)簡單扼要的敘述。但是，對于實驗條件(試劑配制及儀器)和操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)必須寫清楚。n實驗結(jié)果部分實驗結(jié)果部分：應(yīng)根據(jù)實驗的要求將一定實驗條件下獲得的實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)進行整理、歸納，分析和對比，并盡量總結(jié)成各種圖表，如原始數(shù)據(jù)及其處理的表格，標準曲線圖以及比較實驗組與對照實驗結(jié)果的圖表等。另外，還針對實驗結(jié)果進行必要的說明和分析。n討論部分：討論部分：可以包括關(guān)于實驗方法(或操作技術(shù))的一些問題、實驗的正常結(jié)果和異?，F(xiàn)象以及思考題進行探討，對于實驗設(shè)計的認識、體會和建議，對實驗課的改進意見等。2021/8/148考核方式n實驗操作占35%，實驗報告占60%，考勤占5%n操作分主要根據(jù)預(yù)

8、習記錄和實驗過程記錄，結(jié)合課堂表現(xiàn)評分2021/8/149實驗一 糖類的性質(zhì)實驗 實驗?zāi)康模簩嶒災(zāi)康模簄了解某些糖類顏色反應(yīng)的原理n學(xué)習用糖的顏色反應(yīng)鑒別糖類的方法n通過實驗手段了解糖的基本性質(zhì)及還原糖的鑒定方法n為后續(xù)課程中有關(guān)糖類的知識的學(xué)習打下基礎(chǔ)；為后續(xù)設(shè)計行、研究性實驗提供定性檢測的方法與手段2021/8/1410Molish（紫環(huán)）反應(yīng)原理n糖在濃無機酸作用下脫水生成糠醛及糠醛衍生物，后者與-萘酚生成紫紅色物質(zhì)。n該反應(yīng)不是糖類的特異性反應(yīng)（丙酮、甲酸、乳酸、草酸和葡萄糖醛酸 ）n對葡萄糖的檢出極限可達0.001，對蔗糖的檢出極限可達0.0001。2021/8/1411Molish

9、反應(yīng)操作注意事項n添加Molish試劑時切記充分搖勻n加濃硫酸時用移液管沿管壁緩慢加入，切勿搖動n注意觀察各管紫色環(huán)出現(xiàn)時間的先后、環(huán)的寬度、顏色的深淺，并做好記錄。2021/8/1412操作方法操作方法n在試管中加入1 mL 樣品水溶液，滴入4滴10%的-萘酚乙醇溶液，混合均勻后將試管傾斜約45度，沿管壁慢慢加入1 mL濃硫酸(勿搖動)。此時樣品在上層，硫酸在下層、若在兩層交界處出現(xiàn)紫色的環(huán)，表明樣品中含有糖類化合物。2021/8/1413-萘酚反應(yīng)(Molisch Test)2021/8/1414Seliwanoff（謝里瓦諾夫）反應(yīng)（間苯二酚反應(yīng)） n酮糖脫水生成羥甲基糠醛，后者與間苯二

10、酚作用生成紅色物質(zhì)n醛糖在同樣條件下反應(yīng)緩慢，只有在糖濃度較高或煮沸時間較長時才呈微弱的陽性反應(yīng)2021/8/1415Seliwanoff反應(yīng)操作要點n注意試劑添加量：糖溶液0.5ml，塞氏試劑1-2ml混勻，同時同時放入沸水浴n注意觀察各管顏色變化的時間及顏色的變化過程，并做好記錄 塞氏試劑：塞氏試劑： 溶解50mg間苯二酚（resorcinol）于100mL鹽酸（鹽酸：水=1:2v/v）中 2021/8/14162021/8/1417操作方法操作方法n在試管中加入5滴2% (1滴5%)的樣品溶液，再加人10滴(1 mL)間苯二酚鹽酸試劑，在沸水浴中加熱，記錄溶液轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色所需要的時間。若溶

11、液在12分鐘內(nèi)變?yōu)榧t色，說明樣品為酮糖。否則為醛糖。2021/8/1418還原糖的鑒定原理n糖類分子中的還原性基團在堿性條件下將Cu2+還原成Cu+，生成Cu2O沉淀。n沉淀顏色與沉淀顆粒大小有關(guān)，沉淀顆粒大小與反應(yīng)速度有關(guān)：速度慢顆粒大顏色偏紅，速度快顆粒小顏色偏黃。n反應(yīng)速度取決于糖的濃度和還原性的強弱2021/8/1419還原糖鑒定實驗操作要點n實驗前鑒定試劑有效性：試劑與水1：4，加熱煮沸無沉淀方可使用。n先加鑒定試劑后加糖n從沸水?。?-3min）中同時取出后取出后觀察試管中的變化n注意Benedict試劑與Fehling試劑在反應(yīng)時間和沉淀生成量等方面的區(qū)別。 2021/8/142

12、0操作方法操作方法取取FehlingFehling試劑試劑A,BA,B兩種溶液各兩種溶液各1.0mL1.0mL在試管中混勻，在試管中混勻，再加入再加入4 4滴滴1%1%的樣品溶液，在沸水浴中加熱的樣品溶液，在沸水浴中加熱2 23 3分分鐘，若有鐘，若有紅色或黃綠色沉淀紅色或黃綠色沉淀生成，表明樣品為還原生成，表明樣品為還原性糖。性糖。Fehling試劑試劑A,B：試劑A：稱取3.5g五水合硫酸銅溶于100mL蒸餾水中。試劑B：稱取17g五結(jié)晶水酒石酸鉀鈉溶于20mL熱水中，然后加入20mL含5g NaOH 水溶液，稀釋到100mL Benedic試劑：試劑：400mL水中加85g檸檬酸鈉和50g無水碳酸鈉； 50mL加熱的水中加入8.5g無水硫酸銅。制成CuSO4溶液；