畜牧獸醫(yī)畢業(yè)論文2

1、( 此文檔為 word 格式，下載后您可任意編輯修改！)湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)高等教育自學(xué)考試本科生畢業(yè)論文人工復(fù)制小鼠銅離子中毒的病理變化觀察學(xué)生姓名：陳青山年級(jí)專業(yè)： 2009 級(jí)畜牧獸醫(yī)指導(dǎo)老師： 李德亮教授學(xué)院： 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院湖南 ·長(zhǎng)沙提交日期： 2010 年 3 月1湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)高等教育自學(xué)考試本科生畢業(yè)論文誠(chéng)信聲明本人鄭重聲明： 所呈交的本科畢業(yè)論文 （設(shè)計(jì)）是本人在指導(dǎo)老師的指導(dǎo)下，進(jìn)行研究工作所取得的成果， 成果不存在知識(shí)產(chǎn)權(quán)爭(zhēng)議。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外， 本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。 對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體在文中均作了明確的

2、說(shuō)明并表示了謝意。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）作者簽名：年月日目錄摘 要： .4關(guān)鍵詞： .41前言 .42材料與方法 .62.1試臉材料 . .62.1.1試驗(yàn)動(dòng)物： .62.1.2實(shí)驗(yàn)試劑和儀器： .62.2實(shí)驗(yàn)方法 . .62.2.1動(dòng)物分組： .62.2.2臨床觀察： .62.2.3病理組織學(xué)觀察： .63結(jié)果與分析 .73.1臨床癥狀與大體病理變化 .73.2病理組織學(xué)變化 .74討論 .1025 結(jié)論11參考文獻(xiàn) :11致謝12人工復(fù)制小鼠銅離子中毒的病理變化觀察作者：陳青山指導(dǎo)老師：李德亮（湖南省農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長(zhǎng)沙410128 ）摘要：本

3、研究采用硫酸銅灌胃的方式對(duì)小鼠銅中毒的臨床表現(xiàn)及組織器官的病理變化進(jìn)行觀察。試驗(yàn)根據(jù)灌胃的劑量將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為4 組：對(duì)照組(0 mgkg)、低劑量組 (50mgkg)、中劑量組 (100mgkg)，高劑量組 (200mgkg)，每組 6 只，試驗(yàn)周期為 2周。結(jié)果顯示，高劑量組的死亡率高于中劑量和低劑量組。高劑量組器官的病理形態(tài)學(xué)觀察表現(xiàn)為肝脂肪變性和顆粒變性，肝細(xì)胞呈現(xiàn)蜂窩狀外觀，低劑量組和中劑量組肝細(xì)胞腫大，胞漿內(nèi)充滿紅染的細(xì)微顆粒；低劑量組中腎小管出現(xiàn)顆粒變性，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，使管腔變小或狹窄，間質(zhì)毛細(xì)血管擴(kuò)張，充血。中劑量組腎小管出現(xiàn)明顯顆粒變性，管腔中有許多紅染蛋白質(zhì)物質(zhì)，出

4、現(xiàn)管型。部分腎小管壁細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞。高劑量組腎小管上皮壞死、崩解、脫落于管腔中。結(jié)果表明，銅中毒主要損害肝臟、腎臟等組織器官，最終導(dǎo)致發(fā)病甚至死亡。關(guān)鍵詞：銅中毒；病理變化；小白鼠；1 前言銅元素普遍存在于動(dòng)物、植物和微生物體內(nèi)，是所有低等動(dòng)物和脊椎動(dòng)物必需的微量元素之一。自 1925 年被首次報(bào)道后，銅作為動(dòng)植物營(yíng)養(yǎng)必需微量元素的作用逐漸被人們所認(rèn)識(shí)并不斷被研究 1。研究表明， 在飼料中添加適量的銅，可明顯提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能。銅的這種特殊生物學(xué)作用，在現(xiàn)代畜牧業(yè)中已被廣泛應(yīng)用，并取得了較好的經(jīng)濟(jì)效益。近年來(lái)，由于飼料中銅的過(guò)量添加而導(dǎo)致的動(dòng)物中毒現(xiàn)象常有時(shí)有發(fā)生4。許多銅鹽如硫酸銅、 次醋酸

5、銅、碳酸銅、氯化銅、氧化亞銅、硝酸銅、石油酸銅、三氯酚銅等作為沙蟲(chóng)劑、浸種劑、殺真菌劑、驅(qū)蟲(chóng)劑、滅螺劑或木材防腐劑 2被廣泛的使用也常常給家畜養(yǎng)殖帶來(lái)巨大的潛在危險(xiǎn)，動(dòng)物誤食銅鹽后就會(huì)發(fā)生銅中毒。此外，一些植物含有吡咯類生物堿的有毒植物(如三葉草、千里光、和天蕎萊屬植物) 能夠增強(qiáng)銅與肝臟的3親和力、使銅在肝臟蓄積而不能正常排出；另一些含有肝毒性生物堿的植物會(huì)造成動(dòng)物肝細(xì)胞的損傷，從而使銅在肝臟的代謝出現(xiàn)異常，也能使動(dòng)物體內(nèi)蓄銅過(guò)多而中毒 3。雖然動(dòng)物每日攝入銅的含量沒(méi)有達(dá)到中毒劑量，但是動(dòng)物日糧中鉬的含量非常低或日糧中銅鉬的比值過(guò)高(大于 10)，也能造成銅在動(dòng)物肝臟內(nèi)蓄積，蓄積過(guò)量時(shí)動(dòng)物出

6、現(xiàn)銅中毒癥，有報(bào)道羔羊在補(bǔ)飼向日葵(鉬鋁比值大于 10) 后，出現(xiàn)慢性銅中毒癥狀 18。銅中毒的發(fā)生，往往會(huì)給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，及時(shí)掌握動(dòng)物銅中毒后的臨床表現(xiàn)及其對(duì)機(jī)體組織器官的病理?yè)p害，從而探討發(fā)病機(jī)理將會(huì)對(duì)銅中毒的臨床診斷和基礎(chǔ)研究提供重要的指導(dǎo)意義 17。已有的研究表明，各種動(dòng)物對(duì)銅的毒性作用和銅的敏感性存在有較大的差異 10。綿羊敏感性最高，反芻動(dòng)物次之，高于其它動(dòng)物 6；中毒劑量的報(bào)道也不經(jīng) mgkg，大鼠 1000 mgkg，肉雞 300 mgkg11，鴨 300mgkg9，鵝 100 mgkg2。動(dòng)物銅中毒的研究主要集中于中毒劑量，臨床表現(xiàn)，病理變化，血液生化指標(biāo)以

7、及發(fā)病機(jī)理等方面，在蓄積至一定階段后，會(huì)突然出現(xiàn)嚴(yán)重的溶血，肝腎損傷，并最終死亡 14。動(dòng)物發(fā)生銅中毒時(shí)， 6-磷酸葡萄糖脫氫酶，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性降低，而丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，乳酸脫氫酶等酶活性升高 16。動(dòng)物的銅中毒習(xí)慣上分為急性中毒和慢性中毒。急性銅中毒主要以明顯的胃腸炎為臨床癥狀，表現(xiàn)為惡心、流涎、腹瀉、劇烈腹痛13。慢性銅中毒主要以溶血癥狀為主要臨床癥狀，據(jù)國(guó)內(nèi)報(bào)道，王幼名和王長(zhǎng)青等做了豬中毒的研究，臨床表現(xiàn)如下性中毒時(shí)精神沉郁、食欲廢絕、嘔吐、腹痛、腹瀉，肌肉松弛，排黑色稀糞，胃與十二指腸粘膜見(jiàn)有出血、潰瘍、壞死病變，肝臟腫大呈土黃色 5。徐善良和楊云林等做了

8、山羊的銅中毒研究，具體癥狀如下：銅中毒時(shí)病理剖檢變化以胃腸粘膜糜爛脫落、潰瘍、出血為特征 12。黨曉鵬和齊長(zhǎng)明等做了綿羊的研究，具體癥狀如下：心外膜出血，肝臟腫大膽囊擴(kuò)張，腎臟表面有出血點(diǎn) 15。舒港亮，翟國(guó)東和朱秀琴做了雞的研究，結(jié)果如下：急性銅中毒最后痙攣而死，中毒臨床癥狀:拉稀，縮頭伏地 .食欲廢絕，精神沉郁，腿部肌肉麻痹，呼吸困難，剖檢可見(jiàn)肝臟腫大，呈塊狀土黃色胃粘膜充血，其中十二指腸較嚴(yán)重，膽囊腫大 11。4本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究小鼠銅中毒，了解和觀察銅離子對(duì)小鼠心、肝、脾、肺、腎的影響，從而研究銅中毒對(duì)機(jī)體器官組織的病理?yè)p害，探討發(fā)病機(jī)理，為臨床診斷和基礎(chǔ)研究提供科學(xué)依據(jù)。2 材料與方法2

9、.1 試驗(yàn)材料試驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小白鼠(24 只，體重18g-22g)，購(gòu)買(mǎi)于湖南吉首大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。飼養(yǎng)室溫度23 27，每天光照12 。(6) 脫蠟、染色與封藏：將放有載玻片的染色架放入二甲苯 中浸泡10min 二甲苯 中浸泡 10min (以充分脫蠟 ) 100% 酒精 5min 100% 酒精 5 min95% 酒精 5 min 85% 酒精 5 min80% 酒精 5 min蘇木素染液染色 5min 水洗（將切片架放入事先準(zhǔn)備好的清水中沖洗5 min） 1% 鹽酸酒精分化（這一步驟相當(dāng)關(guān)鍵，它的主要目的是脫去胞漿的著色，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可使胞核的著色脫去。）放進(jìn)去后要迅速取出，時(shí)間一般

10、掌握在4-6 秒鐘 自來(lái)水緩緩沖洗 15-30 min 伊紅染液染色 1-3 分鐘 95% 酒精 3s 100%酒精3s 100% 酒精 3s二甲苯 3s 二甲苯 3s。至此 H.E 染色過(guò)程全部結(jié)束，將染色架上的載玻片取出，用干凈的紗布將二甲苯液體蘸去，并在上面滴上中性樹(shù)膠，將蓋玻片封好，貼上標(biāo)簽作好標(biāo)記后放入切片盒中,觀察各個(gè)臟器的病理變化。3 結(jié)果與分析3.1 臨床癥狀與病理變化高劑量組臨床表現(xiàn)食欲廢絕，精神沉郁，縮頭，全身震顫，臥地不起，排黑褐色糞，脾臟體積縮小，重量減輕，色澤變淡，肝呈黃褐色，質(zhì)脆易碎，膽囊膨大充滿藍(lán)綠色膽汁，死亡病例還可見(jiàn)腎輕度腫大。中等劑量組表現(xiàn)為食欲廢絕，精神沉

11、郁，脾臟體積縮小，重量減輕，色澤變淡，肝呈黃褐色。低劑量組的無(wú)明顯的變化。3.2 病理組織學(xué)變化肝臟：低劑量組和中劑量組肝細(xì)胞腫大，胞漿內(nèi)充滿紅染的細(xì)微顆粒，中央靜脈、肝竇以及間質(zhì)小血管內(nèi)充滿紅細(xì)胞。高劑量組肝臟出現(xiàn)明顯顆粒變性和脂肪變性，肝細(xì)胞腫大，胞漿內(nèi)充滿大量紅染的細(xì)微顆粒或圓形空泡，細(xì)胞呈現(xiàn)蜂窩狀外觀(圖 1)。部分病例可見(jiàn)局灶性壞死， 內(nèi)肝細(xì)胞索排列紊亂， 肝細(xì)5胞胞漿紅染， 細(xì)胞核出現(xiàn)固縮和碎裂 (圖 2)。中央靜脈內(nèi)紅細(xì)胞不清楚， 只見(jiàn)紅染絲網(wǎng)狀物質(zhì)充滿血管。圖 1 肝細(xì)胞呈蜂窩狀圖 2 肝細(xì)胞核固縮和碎裂心臟：在中劑量組和高劑量組可見(jiàn)心肌纖維腫脹，出現(xiàn)許多紅染的細(xì)微顆粒 (圖

12、3)。心肌纖維間毛細(xì)血管內(nèi)充滿紅細(xì)胞。脾臟：在中劑量組和高劑量組可見(jiàn)脾臟白髓區(qū)變小，中央淋巴細(xì)胞和邊緣區(qū)淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，網(wǎng)狀細(xì)胞增生，紅髓血竇擴(kuò)張充血（圖4）。高劑量組部分病例脾臟白髓淋巴細(xì)胞出現(xiàn)壞死。圖 3 肌纖維腫脹和細(xì)微顆粒圖 4 紅髓血竇擴(kuò)張充血肺：在中劑量和高劑量組中小血管和毛細(xì)血管明顯擴(kuò)張，內(nèi)充滿紅細(xì)胞 (圖5)。高劑量組中部分肺泡腔內(nèi)有少量紅染漿液， 部分肺泡擴(kuò)張出現(xiàn)肺泡性肺氣腫(圖 6)。6圖 5 小血管和毛細(xì)血管明顯擴(kuò)張，內(nèi)圖 6 肺泡腔內(nèi)有少量紅染漿液充滿紅細(xì)胞腎臟：低劑量組中腎小管出現(xiàn)顆粒變性，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，使管腔變小或狹窄（圖 7），間質(zhì)毛細(xì)血管擴(kuò)張，充血。中劑

13、量組腎小管出現(xiàn)明顯顆粒變性，管腔中有許多紅染蛋白質(zhì)物質(zhì)，出現(xiàn)管型（圖 8）。部分腎小管壁細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞。高劑量組腎小管上皮壞死、崩解、脫落于管腔中。圖 7 腎小管出現(xiàn)顆粒變性，上皮細(xì)胞圖 8 腎小管出現(xiàn)明顯顆粒變性，管腔腫脹，使管腔變小或狹窄中有許多紅染蛋白質(zhì)物質(zhì)4 討論本實(shí)驗(yàn)采用三組不同濃度的銅對(duì)小白鼠進(jìn)行攻毒，分別為低劑量、中劑量和高劑量，時(shí)間為半個(gè)月。高劑量組小鼠在試驗(yàn)期間有死亡現(xiàn)象，臨床病理癥7狀表現(xiàn)為食欲廢絕，精神沉郁，縮頭，全身震顫，臥地不起，排黑褐色糞，脾臟體積縮小，重量減輕，色澤變淡，肝呈黃褐色，質(zhì)脆易碎，膽囊膨大充滿藍(lán)綠色膽汁，死亡病例還可見(jiàn)腎輕度腫大。中等劑量變現(xiàn)為食欲廢絕

14、，精神沉郁，脾臟體積縮小，重量減輕，色澤變淡，肝呈黃褐色，低劑量眼觀無(wú)明顯變化。本實(shí)驗(yàn)所獲結(jié)果為動(dòng)物銅中毒的系統(tǒng)研究提供了動(dòng)物模型，也可供臨床或發(fā)病現(xiàn)場(chǎng)診斷和治療銅中毒做參考，從小白鼠發(fā)病時(shí)間、病程經(jīng)過(guò)、死亡情況的綜合分析，作者認(rèn)為銅中毒低劑量和中劑量的引起慢性銅中毒。銅中毒高劑量引起小白鼠的急性銅中毒，表明銅的中毒病理表現(xiàn)因動(dòng)物種類和銅中毒劑量各異。病理形態(tài)學(xué)的研究表明，小白鼠銅中毒病變靶器官是肝臟、腎臟、消化道和免疫器官，與銅鹽的刺激和腐蝕作用，銅在體內(nèi)組織分布及蓄積特點(diǎn)和銅排出密切相關(guān)。由于銅鹽具有強(qiáng)烈的刺激和腐蝕作用，銅鹽進(jìn)入消化道便引起劇烈反應(yīng)和造成嚴(yán)重的病理?yè)p害，表現(xiàn)為肌胃角質(zhì)層增

15、厚、龜裂乃至呈絨毛狀，腸黏膜上皮變性壞死，腸絨毛斷裂，這是銅鹽直接作用于胃腸道黏膜的結(jié)果，導(dǎo)致胃腸功能受損，銅被吸收進(jìn)入體內(nèi)后主要在肝臟蓄積，隨著時(shí)間的增長(zhǎng)銅的蓄積量大幅度增加。銅的蓄積一旦超過(guò)肝臟對(duì)其的利用，在釋放入血之前便對(duì)肝細(xì)胞造成直接的損害作用，引起肝細(xì)胞腫大，顆粒變性和脂肪變性，肝細(xì)胞腫大，胞漿內(nèi)充滿大量紅染的細(xì)微顆粒或圓形空泡 ,細(xì)胞呈現(xiàn)蜂窩狀外觀。至于臟臟中蓄積的銅大量釋放入血引起血銅升高時(shí)，肝銅含量仍未降低，且表現(xiàn)出極強(qiáng)的時(shí)間 -劑量效應(yīng)，故肝銅可作為評(píng)價(jià)銅狀態(tài)的一個(gè)敏感指標(biāo)。肝銅蓄積到一定程度時(shí)則大量釋放入血引起血銅升高，同時(shí)。腎銅濃度也隨之升高，造成腎小管上皮細(xì)胞的損傷，導(dǎo)

16、致腎功能受損。5 結(jié)論本研究結(jié)合當(dāng)前銅中毒的研究進(jìn)展，從病原學(xué)、臨床癥狀以及中毒后對(duì)機(jī)體各臟器的結(jié)構(gòu)的影響等多角度詳細(xì)的闡述了人工復(fù)制銅中毒的病理形態(tài)學(xué)，為人工復(fù)制銅中毒的預(yù)防及診斷提供了極其重要的技術(shù)依據(jù)。發(fā)生銅中毒時(shí)，造成了廣泛性實(shí)質(zhì)臟器的損傷和出血，尤其是肝臟、腸道和腎臟的病理性損傷更明顯，肝臟：低劑量組和中劑量組肝細(xì)胞腫大，胞漿內(nèi)充滿紅染的細(xì)微顆粒，中央靜脈、肝竇以及間質(zhì)小血管內(nèi)充滿紅細(xì)胞。高劑量組肝臟出現(xiàn)明顯顆粒變性和脂肪變性，肝細(xì)胞腫大，胞漿內(nèi)充滿大量紅染的細(xì)微顆?；驁A形空泡 ,細(xì)胞呈現(xiàn)蜂窩狀外觀，部分病例可見(jiàn)局灶性壞死，內(nèi)肝細(xì)胞索排列紊亂，肝細(xì)胞胞漿紅染，細(xì)胞核出現(xiàn)固縮和碎裂，中

17、央靜脈內(nèi)紅細(xì)胞不清8楚，只見(jiàn)紅染絲網(wǎng)狀物質(zhì)充滿血管。腎臟：腎臟：低劑量組中腎小管出現(xiàn)顆粒變性，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，使管腔變小或狹窄，間質(zhì)毛細(xì)血管擴(kuò)張，充血。中劑量組腎小管出現(xiàn)明顯顆粒變性，管腔中有許多紅染蛋白質(zhì)物質(zhì)，出現(xiàn)管型。部分腎小管壁細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞。高劑量組腎小管上皮壞死、崩解、脫落于管腔中。因此在銅離子作為飼料的添加劑，要確定好銅的含量。參考文獻(xiàn) :1 王長(zhǎng)青，李靖愛(ài) .宋茜 .育成豬微量元素銅中毒的診治 J.當(dāng)代畜牧， 2003， 4(3):31-33.2 王宗元 .動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)代謝病和中毒病學(xué) J.北京 .中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社 . 1997， 2（ 1） :5-8.3 王幼明，王小龍.高鋼的應(yīng)

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