2017-2018學年高中生物專題2微生物的培養(yǎng)與應用課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)

1、課題 2 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)、選擇題i 下列關于土壤取樣的敘述，錯誤的是（）A. 土壤取樣時，應選取肥沃、濕潤的土壤B. 先鏟去表層土 3 cm 左右，再取樣C. 取樣用的小鐵鏟和信封在使用前不用滅菌D.應在酒精燈火焰旁稱取土壤解析：在“分解尿素的細菌的分離與計數(shù)”實驗中，必須在含微生物豐富的濕潤、肥沃土壤中取樣，所用小鐵鏟和信封必須滅菌。答案：C2用以尿素為唯一氮源加入酚紅指示劑的培養(yǎng)基，培養(yǎng)尿素分解菌后，指示劑將（）答案：B3.測定土壤中細菌的數(shù)量一般選104 105和106倍的稀釋液進行平板培養(yǎng),量一般選用 102、103和 104倍稀釋液，其原因是（）A.細菌個體小，真菌

2、個體大B. 細菌易稀釋，真菌不易稀釋C. 細菌在土壤中的含量比真菌高D. 隨機的，沒有原因解析：細菌在土壤中的含量多于真菌，因此稀釋涂布時， 細菌的稀釋倍數(shù)要大于真菌的稀釋倍數(shù)，這樣才能使平板上培養(yǎng)出的菌落清晰易辨。答案：C4.下列能分離出分解尿素的細菌的培養(yǎng)基是（）7 IA. KHPO4、NQHPG MgSO7H2Q 葡萄糖、尿素、瓊脂、水B. KHPO4、NQHPO、MgSO7H2O 葡萄糖、瓊脂、水C. KHPC4、NstHPO、MgSO7H2O 尿素、瓊脂、水解析：要想分離尿素分解菌，應把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源，而 無碳源，D 項中牛肉膏、蛋白胨都可作為氮源。答案：A5.用來判斷選

3、擇培養(yǎng)基是否起到04課后鞏固提升賊- -科學設題蓋全面A.C.變藍色變黑色B.變紅色D.變棕色解析：尿素分解菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，會使培養(yǎng)基的堿性增強,酚紅指示劑將變紅。pH 升高，加入而測定真菌的數(shù)D.KHPC4、 NstHPO、MgSO7H2CB 項中無氮源，C 項中2了選擇作用，需要設置的對照是（）A. 未接種的選擇培養(yǎng)基B. 未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基C. 接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基D.接種了的選擇培養(yǎng)基解析：將菌液稀釋相同的倍數(shù)并接種，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目應明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目，因此，應選擇接種菌種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照。對照實驗遵循的原則是單一變量

4、原則。答案：C6.在做分離分解尿素的細菌實驗時，一同學從對應稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基上篩選出大約150 個菌落，而其他同學只篩選出大約50 個菌落。該同學的結果產生的原因可能有（）1土樣不同 培養(yǎng)基被污染 操作失誤 沒有設置對照A.B.C.D.a 1解析：實驗結果不同，最可能的原因是土樣不同，其次是操作失誤或培養(yǎng)基被污染，而與是否設置對照沒有關系。答案：A7. 抗生素可由微生物產生，具有抑菌作用，能在瓊脂培養(yǎng)基中擴散。在篩選產生抗生素的菌種時，先在瓊脂培養(yǎng)基平板上劃線接種一種從土壤中獲得的甲菌，在27C下培養(yǎng) 3 天,形成菌落。然后接種乙、丙、丁三種致病菌（圖 A），繼續(xù)在同樣條件下培養(yǎng) 3

5、天，結果如圖B。分析結果，得出的結論是（）AB1甲菌產生了抗生素2丁菌的生長被丙菌產生的抗生素抑制3乙菌的生長被甲菌產生的抗生素抑制4丙菌產生的抗生素抑制了乙菌的生長A.B.C.D.解析：乙、丙、丁三種致病菌不會產生抗生素，否則靠近乙、丙、丁的甲菌落不能生長。從圖 B 來看，乙菌的生長被抑制，最可能的原因是甲菌產生了抗生素，此種抗生素只能抑制乙菌的生長，而對丙、丁兩種致病菌沒有影響。答案：A3&下列關于微生物分離和培養(yǎng)的敘述，錯誤的是（）A. 可采用干熱滅菌法對微生物培養(yǎng)基進行滅菌B. 測定土壤樣品中的細菌數(shù)目，常用菌落計數(shù)法C. 分離土壤中不同的微生物，要采用不同的稀釋度D. 分離能

6、分解尿素的細菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源解析：培養(yǎng)基滅菌通常用的是高壓蒸汽滅菌法，而干熱滅菌法通常適用于玻璃器皿、金屬用具等耐高溫且不適合其他方法的物品；分離能分解尿素的細菌， 用的選擇培養(yǎng)基里尿素是唯4一的氮源，這樣才能分離出分解尿素的細菌。答案： A9下列有關土壤中微生物的分離與計數(shù)的說法，不正確的是( )A. 因為土壤中各類微生物的數(shù)量不同，所以為獲得不同類型的微生物要按不同的稀釋倍數(shù)進行分離B. 測定土壤中不同微生物的數(shù)量，選用的稀釋范圍不同C.如果得到了 2 個或 2 個以上菌落數(shù)目在 30300 的平板，則說明稀釋操作比較成功，并 能夠進行菌落的計數(shù)D. 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的

7、菌落數(shù)目明顯小于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出 一些細菌菌落解析：樣品的稀釋度直接影響平板上生長的菌落數(shù)目。 實際操作中， 通常選用一定稀釋范圍 的樣品液進行培養(yǎng)， 以保證獲得菌落在 30300 之間適于計數(shù)的平板。 土壤中不同類型的微 生物的數(shù)量不同，因此在測定其數(shù)量時，選用的稀釋范圍也不同。將菌液稀釋相同的倍數(shù)， 在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，從而說明選擇培養(yǎng)基的篩選作用。答案： D10欲從土壤中分離出能分解尿素的細菌，下列實驗操作不正確的是()A. 將土壤用無菌水進行一系列的梯度稀釋B. 同一濃度的土壤稀釋液應至少涂布三個平板C. 可將未接種

8、的培養(yǎng)基在相同條件下培養(yǎng)作為對照D. 用加入剛果紅指示劑的培養(yǎng)基可篩選出分解尿素的細菌解析： 欲從土壤中分離出能分解尿素的細菌，要將土壤用無菌水進行一系列的梯度稀釋， 同一濃度的土壤稀釋液應至少涂布三個平板， 同時要將未接種的培養(yǎng)基在相同條件下培養(yǎng)作為 對照，以檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹底；篩選分解尿素的細菌要用酚紅指示劑。答案： D11 下列能選擇出分解尿素的細菌的培養(yǎng)基是解析：在 A 項的培養(yǎng)基中既有尿素作為唯一氮源，又有其他各種成分，可以選擇出分解尿素的細菌；而 C 項中缺少碳源，B 項中無尿素作氮源，D 項中有牛肉膏可提供氮源的成分。答案： A12 某同學對 101、102、103倍稀釋液計

9、數(shù)的平均菌落數(shù)分別為2 760、295 和 16，則菌落總數(shù)為 (所用稀釋液體積為 0.1 mL)( )A. 2.76X104個/mLB . 2.95X105個/mLC. 4.6X104個/mLD. 3.755X104個/mL解析：菌落計數(shù)法是計算不同稀釋度的平均菌落數(shù)。 首先選擇平均菌落數(shù)在KH2PO4、Na2HPO4、MgSQ7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、蒸餾水KH2PO4、Na2HPO4、MgSO7H2O、葡萄糖、瓊脂、蒸餾水KH2PO4、Na2HPO4、MgSO7H2O、尿素、瓊脂、蒸餾水KH2PO4、Na2HPO4、MgSO7H2O、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、蒸餾水若所有稀釋倍數(shù)的5平板

10、，以該平均菌落數(shù)與體積之比乘以稀釋倍數(shù)即為該樣品的細菌總數(shù)。菌落數(shù)均不在 30300 之間，則應以最接近 300 或 30 的平均菌落數(shù)進行計算。答案：B 二、非選擇題13.下表為培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基配方，請回答有關問題:KHPQNazHPQMgSQ7HbQ葡萄糖尿素蒸餾水1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g定容至1 000 mL(1)該培養(yǎng)基按作用劃分屬于_培 養(yǎng) 基 ， 該 培 養(yǎng) 基 具 有 選 擇 作 用 的 原 因 是_。(2)若要通過統(tǒng)計培養(yǎng)基中菌落數(shù)來估計樣品中的細菌數(shù)，上述培養(yǎng)基中還需要添加的成分是_,接種時應米用 _法，該方法接種培養(yǎng)后的菌落，不可能是圖中的

11、AI?CD某同學用 0.1 mL 稀釋液在稀釋倍數(shù)為106的平板中測得菌落數(shù)的平均值為163，則每毫升樣品中的細菌數(shù)是 _。*(4)從土壤中分離出分解尿素的細菌后，要對其做進一步的鑒定，可在上述培養(yǎng)基中加入_指示劑，培養(yǎng)該菌后，如果指示劑變，可初步鑒定該種細菌能夠分解尿素。 解析：(1)由于尿素是該培養(yǎng)基的唯一氮源，只有能分解尿素的微生物才能在上面生存，因 此該培養(yǎng)基具有選擇作用，屬于選擇培養(yǎng)基。(2)若要通過統(tǒng)計培養(yǎng)基中的菌落數(shù)來估計樣品中的細菌數(shù)，應使用固體培養(yǎng)基， 并采用稀釋涂布平板法進行接種，因此需加入凝固劑如瓊脂；D 為平板劃線法得到的平板。(3)每毫升樣品中的細菌數(shù)=(C+V)XM

12、163 十 0.1X10 T =1.63X10。(4)尿素分解會產生氨，氨能使酚紅指示劑變紅，據(jù)此可以推測培養(yǎng)基中的尿素是否被分解。答案：(1)選擇 該培養(yǎng)基中唯一的氮源是尿素，只有能分解尿素的微生物才能在此培養(yǎng)基上生長繁殖(2)瓊脂 稀釋涂布平板D (3)1.63X109酚紅 紅14.下面是探究如何從土壤中分離出自生固氮菌與計數(shù)的實驗，完成下列問題：實驗原理：農田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多。將用表層土壤制成的稀泥漿，接 種到無氮培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長繁殖。用這種方法， 可以將自生固氮菌與其他細菌分離。材料用具：農田的表層土壤、無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨

13、培養(yǎng)基、盛有9 mL 無菌水的試管、無菌吸管、無菌涂布器、無菌培養(yǎng)皿、盛有90 mL 無菌水的錐形瓶、恒溫箱。(1)方法步驟：1倒平板：分別將無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板，應在_ 操作。2制備土壤稀釋液：取土樣10 g 加入盛有 90 mL 無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。用無菌吸管吸取上清液 1 mL,轉至盛有 9 mL 的無菌水的試管中，依次稀釋到107稀釋度。6373涂布：按照由 1010 稀釋度的順序分別吸取0.1 mL 進行平板涂布，每個稀釋度下，無氮培養(yǎng)基應至少涂布 _ 個平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布 _ 個平板。4_培養(yǎng)：放入恒溫箱內，在 2830C下培養(yǎng) 34 d。細菌的計

14、數(shù)：當菌落數(shù)目穩(wěn)定時， 選取菌落數(shù)在的平板進行計數(shù)。如果測定的平均值為_50,則每克樣品中的菌株數(shù)是_。（稀釋度是 10）（2）預期結果：相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù) _ （填“多于”或“少于”） 無 氮 培 養(yǎng) 基 上 的 數(shù) 目。 原 因 是解析：（1）在酒精燈火焰旁倒平板，可以避免雜菌的污染。為了保證實驗結果準確，一般設 置 35個平板，選擇菌落數(shù)在 30300 的平板進行計數(shù)，并取平均值，則每克樣品中的菌 株數(shù)為（50 十 0.1）XI05= 5X107個。（2）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照，以消除無關變量對 實驗結果的影響，該培養(yǎng)基適合土壤中幾乎所有細菌生存，所以它比無氮

15、培養(yǎng)基上的菌落數(shù) 目多。答案：（1）酒精燈火焰旁3130300 5X107（2）多于 無氮培養(yǎng)基上只有土壤中的自生固氮菌能生存繁殖，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類生存15.在農業(yè)生產中發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑（含氮有機化合物）在土壤中不易降解，長期使 用可污染土壤。為修復被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑的細菌（已知該除草劑在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明傕取托期使用辰日2謹除就削的Y事A.M*土壤譽出帶（1）_ 制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行 _ 處理。（2）要從長期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，從物理性質、用途方面來看，

16、上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點是_ 。（3）_在劃線培養(yǎng)時，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細菌在此培養(yǎng)基上不能生長的主要原因是 _或有氧條件抑制了這些細菌的生長。（4）在固體培養(yǎng)基上形成的菌落中，無透明帶菌落利用的氮源主要是_，有透明帶菌落利用的氮源主要是 _ ，據(jù)此可篩選出目的菌。（5）科研人員用放射線處理該細菌獲得兩個突變株A 和 B,然后對突變株 A 和 B 進行實驗，結果如下表所示：.無透團I村透明帶葡熱岐焙莽雄左血 U 峯2阮及H以府劃線總D.培芥蘋申養(yǎng) 旌履劃純是從I啟劃魄末端畀始7該種的菌種般培 口養(yǎng)基實驗處理及結果A不生長添加營養(yǎng)物質甲，能生長B不生長添加營養(yǎng)物質乙，能生長A+ B能生長不添加營養(yǎng)物質甲、乙就能生長突變株 A 不能在一般培養(yǎng)基上生長的原因是 _。突變株 A 和 B 混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中能生長的最可能原因是解析：（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理。（2）從物理性質來看，題圖培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基；從用途方面來看，該培養(yǎng)基是以含氮除草劑為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。（3）在以該除草劑為唯一氮源的培養(yǎng)基上，不能降解該除草劑的細菌（除具有固氮能力的細菌外）是不能生長的。（4）含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明， 菌落周圍形成透明帶是由