TM-072重金屬檢查

1、檢驗(yàn)方法文件編號(hào): TM-072版本號(hào): 01重金屬檢查法頁(yè)碼: 8 /8生效日期:重金屬檢查法起草人審核人審核人批準(zhǔn)人部門QCQAQC質(zhì)量管理部姓名饒濤黃祥彪汪大才鄧志軍簽名日期分發(fā)部門：質(zhì)量管理部QC1. 目的制訂重金屬檢查的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，規(guī)范重金屬檢查的操作。2. 范圍需進(jìn)行重金屬檢查的物料。3. 職責(zé)QC 4. 操作內(nèi)容4.1 簡(jiǎn)述4.1.1 重金屬是指在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下能與顯色劑作用顯色的金屬鹽類雜質(zhì)。中國(guó)藥典2010年版采用硫代乙酰胺試液或硫化鈉試液作顯色劑，以鉛的限量表示。4.1.2 由于實(shí)驗(yàn)條件不同，分為四種檢查方法：第一法適用于供試品不經(jīng)有機(jī)破壞，在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢

2、查；第二法適用于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，?jīng)處理后在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查；第三法用來(lái)檢查能溶于堿而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的藥品中的重金屬；第四法用微孔濾膜過(guò)濾，使重金屬硫化物沉淀富集成色斑，用于有色溶液或重金屬限量低的品種。4.1.3 四種方法顯示的結(jié)果均為重金屬硫化物微粒均勻混懸在溶液中所呈現(xiàn)的顏色，采用濾膜法可獲得“色斑”；如果重金屬離子濃度大，加入顯色劑后放置時(shí)間長(zhǎng)，就會(huì)有硫化物聚集下沉。4.1.4 重金屬硫化物生成的最佳pH值是3.03.5，選用醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml調(diào)節(jié)pH較好，顯色劑硫代乙酰胺試液用量經(jīng)實(shí)驗(yàn)也以2ml為佳，顯色時(shí)間一

3、般為2分鐘。以1020µgPb與顯色劑所產(chǎn)生的顏色為最佳目視比色范圍。在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下，與硫代乙酰胺試液在弱酸條件下產(chǎn)生的硫化氫呈色的金屬離子有銀、鉛、汞、銅、鎘、鉍、銻、錫、砷、鋅、鈷與鎳等。4.1.5 由于在藥品生產(chǎn)過(guò)程中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多，且鉛易積蓄中毒，故以鉛作為重金屬的代表，用硝酸鉛配制標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液。4.2 儀器與用具4.2.1 納氏比色管 應(yīng)注意選擇各管之間的平行性，玻璃色澤一致，內(nèi)徑、刻度標(biāo)線高度一致。比色管洗滌時(shí)避免劃傷內(nèi)壁。4.2.2 過(guò)濾器、墊圈、濾膜（直徑為10mm，孔徑為3.0µm，使用前在水中浸泡24小時(shí)以上，可使色斑均勻）、50ml注射器（應(yīng)能與濾器

4、上蓋入口處緊密聯(lián)接）。4.3 試藥和試液4.3.1 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液 精密稱取在105干燥至恒重的硝酸鉛0.1598g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml相當(dāng)于10µg的Pb)。4.3.2 硫代乙酰胺試液、硫化鈉試液、醋酸鹽緩沖液（pH3.5）與抗壞血酸等均按藥典規(guī)定配制。4.3.3 稀焦糖溶液 取蔗糖或葡萄糖約5g，置瓷坩堝中，在玻璃棒不斷攪拌下，加熱至呈棕色糊狀，放冷，用水溶解成約25ml，濾過(guò)，貯于滴瓶中備用。臨用時(shí)，根據(jù)供試液色澤深淺，取適當(dāng)

5、量調(diào)節(jié)使用。4.4 操作方法4.4.1 第一法4.4.1.1 取25ml納氏比色管兩支，編號(hào)為甲、乙。4.4.1.2 甲管中加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量與醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml。4.4.1.3 乙管中加入該藥品項(xiàng)下規(guī)定的方法制成的供試液25ml。4.4.1.4 如供試液帶顏色，可在甲管中滴加少量稀焦糖溶液或其它無(wú)干擾的有色溶液，使其色澤與乙管一致。4.4.1.5 在甲、乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液2ml，放置2分鐘，同置白色襯板上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。4.4.1.6 如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使顏色一致時(shí)，可取該藥品

6、項(xiàng)下規(guī)定的2倍量的供試品和試液，加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑使成30ml，將溶液分成甲乙2等分，乙管中加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml；甲管中加入硫代乙酰胺試液2ml，搖勻，放置2分鐘，經(jīng)濾膜（孔徑3µm）濾過(guò)，然后甲管中加入標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑使成25ml，再在乙管中加硫代乙酰胺試液2ml，甲管中加水2ml，照上述方法比較，即得。4.4.1.7 供試品如含高鐵鹽影響重金屬檢查時(shí)，可取該藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試液，加抗壞血酸0.51.0g，并在對(duì)照液中加入相同量的抗壞血酸，再照上述方法檢查。4.4.1.8 配制供試品溶液時(shí)，如使用的鹽酸超過(guò)1.0ml（

7、或與鹽酸1.0ml相當(dāng)?shù)南←}酸），氨試液超過(guò)2ml，或加入其他試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，對(duì)照液中應(yīng)取同樣同量的試劑置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與水15ml溶解后，移置甲管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，再加水稀釋成25ml。4.4.2 第二法4.4.2.1 除另有規(guī)定外，取在500600灼燒的熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，加硝?.5ml蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，加鹽酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨試液至對(duì)酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，微熱溶解后，移至乙管中，加水稀釋成25ml。4.4.2.2 如不取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，則可取供試品一

8、定量，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51.0ml，使恰濕潤(rùn)，用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500600熾灼使完全灰化，放冷，加鹽酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨試液至對(duì)酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，微熱溶解后，移至乙管中，加水稀釋成25ml。4.4.2.3 取配制供試溶液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與水15ml，微熱溶解后，移至甲管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，加水稀釋成25ml。4.4.2.4 在甲、乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液2ml，放置2分鐘，同置白色襯板上，自上向下透視，乙

9、管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。4.4.3 第三法4.4.3.1 取25ml納氏比色管兩支，編號(hào)為甲、乙。4.4.3.2 除另有規(guī)定外，取供試品適量，加氫氧化鈉試液5ml與水20ml溶解后，置乙比色管中。4.4.3.3 取一定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液，加氫氧化鈉試液5ml與水20ml溶解后，置甲比色管中。4.4.3.4 于甲、乙兩管中各加硫化鈉試液5滴，搖勻。4.4.3.5 甲、乙管同置白色襯板上，自上向下透視，乙管中所顯的顏色與甲管比較，不得更深。4.4.4 第四法4.4.4.1 標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備 精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，置小燒杯中，加水或該藥項(xiàng)下的溶劑稀釋成10ml，加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5

10、）2ml與硫代乙酰胺試液1.0ml，搖勻，放置10分鐘，用50ml注射器轉(zhuǎn)移至過(guò)濾器中進(jìn)行壓濾（濾速約為每分鐘1ml），濾畢，取下濾膜，放在濾紙上干燥，即得。4.4.4.2 檢查法 照該藥品項(xiàng)下規(guī)定制成的供試液10ml，加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與硫代乙酰胺試液1.0ml，搖勻，放置10分鐘，用50ml注射器轉(zhuǎn)移至過(guò)濾器中進(jìn)行壓濾（濾速約為每分鐘1ml），濾畢，取下濾膜，放在濾紙上干燥，將生成的色斑與標(biāo)準(zhǔn)鉛斑比較，不得更深。4.4.4.3 若溶液有顏色或渾濁，應(yīng)對(duì)換輔助濾板與濾膜的位置，進(jìn)行預(yù)濾，如濾膜上有污染，應(yīng)換濾膜再濾，直至濾膜不再染色；反轉(zhuǎn)輔助濾板與濾膜的位置，然后取濾液10

11、ml，加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與硫代乙酰胺試液1.0ml，搖勻，放置10分鐘，用50ml注射器轉(zhuǎn)移至過(guò)濾器中進(jìn)行壓濾（濾速約為每分鐘1ml），濾畢，取下濾膜，放在濾紙上干燥，所得供試液鉛斑與標(biāo)準(zhǔn)鉛斑比較，不得更深。4.5 注意事項(xiàng)4.5.1 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液應(yīng)在臨用前精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液新鮮稀釋配制，以防止硝酸鉛水解而造成誤差，配制標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液使用的玻璃儀器，均不得含有鉛。4.5.2 硫代乙酰胺試液與重金屬反應(yīng)的最佳pH值是3.5，故配制醋酸鹽緩沖液（pH3.5）時(shí)，要用pH計(jì)調(diào)節(jié)，硫代乙酰胺試液加入量以2ml時(shí)呈色最深；第四法中檢測(cè)限度為25µg的Pb，且體積小，所以用量為1.

12、0ml。硫代乙酰胺試液顯色劑的最佳顯色時(shí)間為2分鐘，除第四法由于檢測(cè)限量低，且為了方便過(guò)濾，顯色時(shí)間為10分鐘外，第一、二法均為放置2min。4.5.3 為了便于目視比較，第一、二和三法中的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液用量以2ml（相當(dāng)于20µg的Pb）為宜，小于1ml或大于3ml，呈色太淺或太深均不利于目視比較。4.5.4 如需將熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)髦亟饘贆z查時(shí)，則熾灼溫度必須控制在500600。實(shí)驗(yàn)證明，熾灼溫度在700以上時(shí)，多數(shù)重金屬鹽都有不同程度的損失；以鉛為例，在700經(jīng)6小時(shí)熾灼，損失達(dá)68%。某些供試品在熾灼時(shí)能腐蝕瓷坩堝而帶入較多的重金屬，應(yīng)改用石英坩堝或鉑坩堝操作。4.5.5

13、熾灼殘?jiān)酉跛崽幚?，必須蒸干，將亞硝酸除盡，否則亞硝酸會(huì)使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫，因氧化析出乳硫，影響檢查。蒸干后殘?jiān)欲}酸處理，使重金屬轉(zhuǎn)化為氯化物，在水浴上蒸干趕除多余鹽酸，加水溶解，加入酚酞指示液1滴，再逐滴加入氨試液，邊加邊攪拌，直到溶液剛顯淺紅色為止，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5），使供試液的pH調(diào)節(jié)至3.5。4.5.6 供試品中如含高鐵鹽，在弱酸性溶液中會(huì)使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫進(jìn)一步氧化析出乳硫，影響檢查，可加入抗壞血酸將高鐵離子還原為亞鐵離子而消除干擾。4.5.7 如供試品自身為重金屬的鹽，在檢查這些藥品中的其他重金屬時(shí)，必須先將供試品本身的金屬離子除去，再進(jìn)行檢查。如

14、枸櫞酸鐵銨中檢查鉛鹽時(shí)，利用Fe³+在一定濃度的鹽酸中形成HFeCl62，用乙醚提取除去，再調(diào)節(jié)供試液至堿性，用氰化鉀試液掩蔽微量的鐵后進(jìn)行檢查；右旋醣酐鐵注射液中重金屬檢查，也是在一定濃度的鹽酸中，用醋酸異丁酯提取除去鐵鹽后進(jìn)行檢查。4.5.8 藥品本身生成的不溶性硫化物，影響重金屬檢查，可加入掩蔽劑以避免干擾。如硫酸鋅和葡萄糖酸銻鈉中鉛鹽檢查，是在堿性溶液中加入氰化鉀試液，或在中性溶液中加入酒石酸，使鋅離子或銻離子生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，再依法檢查。4.5.9 為了消除鹽酸或其他試劑可能夾雜重金屬，故在配制供試品溶液時(shí)，如使用鹽酸超過(guò)1.0ml（或與鹽酸1.0ml相當(dāng)?shù)南←}酸）或使用氨

15、試液超過(guò)2ml，以及用硫酸 或硝酸進(jìn)行有機(jī)破壞，或加入其他試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，對(duì)照溶液應(yīng)取同樣量試液蒸干后，依法檢查。4.5.10 當(dāng)采用第四法時(shí)，將注射器套于濾器上后，讓注射器內(nèi)管自然下降，產(chǎn)生的壓力比較均勻，而且對(duì)于大多數(shù)樣品溶液過(guò)濾速度達(dá)到每1分鐘1ml左右；對(duì)于較粘稠的樣品溶液，可施加一均勻壓力使達(dá)到該速度，以保證色斑上色調(diào)的均勻性。濾過(guò)時(shí)如濾器中存在氣泡則會(huì)影響色斑質(zhì)量，故在裝置輔助濾板、濾膜和墊圈時(shí)應(yīng)以水排除氣泡。濾器上端與注射器聯(lián)接處的尺寸大小應(yīng)以兩者能嚴(yán)密，嵌合為宜，以免濾過(guò)時(shí)溶液溢漏；必要時(shí)可改用乳膠管聯(lián)接。4.6 記錄與計(jì)算4.6.1 記錄 必須記錄所采用的方法，

16、樣品取樣量，標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液取用量，操作過(guò)程中使用的特殊試劑，試劑名稱和用量或?qū)z查結(jié)果有影響的試劑用量，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的現(xiàn)象及實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。4.6.2 計(jì)算4.6.2.1 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度計(jì)算1 mol的硝酸鉛Pb(NO3)2的質(zhì)量為331.2g，含鉛（Pb）207.2g；稱取硝酸鉛0.1598g配成1000ml貯備液，含Pb量為：207.2×0.1598×1000=0.1mg/ml331.2×1000 貯備液依法稀釋十倍后所得標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的濃度為每1ml含10µg的Pb。4.6.2.2 重金屬限量計(jì)算 進(jìn)行檢查時(shí)，如取供試品1.0g，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2.0ml制成的對(duì)照液比較，計(jì)算重金屬限量。重金屬限量%=標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液體積（ml）×標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度（g/ml）×100%供試品量（g）=2.0×0.000010×100%1.0=0.0020%=百萬(wàn)分之二十=20ppm4.6.2.3 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液取樣量計(jì)算根據(jù)取供試品量及限量計(jì)算，如取供試品2.0g，依法檢查，規(guī)定含重金