蛋白質(zhì)的分離和純化

1、 蛋白質(zhì)的分離和純化蛋白質(zhì)的分離和純化一、蛋白質(zhì)的分離一、蛋白質(zhì)的分離根據(jù)蛋白質(zhì)根據(jù)蛋白質(zhì)各種特性各種特性的差異，如的差異，如分子的形狀和分子的形狀和大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)和對(duì)其他分子的親和力和對(duì)其他分子的親和力等等，可以用來(lái)分離等等，可以用來(lái)分離不同種不同種類(lèi)類(lèi)的蛋白質(zhì)。的蛋白質(zhì)。Q:Q:下列蛋白質(zhì)如何提??？下列蛋白質(zhì)如何提??？酸性蛋白質(zhì)；酸性蛋白質(zhì)； 水溶性蛋白質(zhì)；水溶性蛋白質(zhì)； 脂溶性蛋白質(zhì)；脂溶性蛋白質(zhì)； 偏堿性溶液偏堿性溶液 透析液（中性緩沖液）透析液（中性緩沖液） 有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑原理原理 1.1.根據(jù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

2、，選擇不同的破碎細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，選擇不同的破碎細(xì)胞的方法（的方法（如研磨法、超聲波法、酶解法等如研磨法、超聲波法、酶解法等），使各種），使各種蛋白質(zhì)釋放出來(lái)。蛋白質(zhì)釋放出來(lái)。一、蛋白質(zhì)的分離一、蛋白質(zhì)的分離1.1.抽提方法：抽提方法：（1 1）酸性蛋白質(zhì)：）酸性蛋白質(zhì)： （2 2）水溶性蛋白質(zhì)：）水溶性蛋白質(zhì)： （3 3）脂溶性蛋白質(zhì)：）脂溶性蛋白質(zhì)：偏堿性溶液偏堿性溶液 透析液（中性緩沖液）透析液（中性緩沖液） 有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑二、常用的分離方法二、常用的分離方法1.離心沉降法離心沉降法2.薄膜透析法薄膜透析法3.凝膠色譜法凝膠色譜法4.電泳法電泳法 1.1.離心沉降法離心沉降法 原

3、理：通過(guò)控制原理：通過(guò)控制離心離心速率速率，使得，使得分子大小、分子大小、密度不同密度不同的物質(zhì)發(fā)生的物質(zhì)發(fā)生分層沉降，從而分層沉降，從而分離分離出不同種類(lèi)蛋白質(zhì)出不同種類(lèi)蛋白質(zhì)。離心時(shí)相對(duì)分子質(zhì)量離心時(shí)相對(duì)分子質(zhì)量大大的的物質(zhì)先沉淀。物質(zhì)先沉淀。2.2.薄膜透析法薄膜透析法 （1 1）原理：）原理：利用蛋白質(zhì)分子不能透過(guò)半透利用蛋白質(zhì)分子不能透過(guò)半透膜的特性，可膜的特性，可將蛋白質(zhì)與其他小分子化合將蛋白質(zhì)與其他小分子化合物分離開(kāi)。物分離開(kāi)。 （2 2）方法：）方法：將待分離的蛋白質(zhì)溶液裝入用將待分離的蛋白質(zhì)溶液裝入用半透膜半透膜制成的透析袋內(nèi)，再將透析袋放入制成的透析袋內(nèi)，再將透析袋放入透析

4、液中便可進(jìn)行透析。透析液中便可進(jìn)行透析。 半透膜半透膜能使小分子自由進(jìn)出，而大分子保能使小分子自由進(jìn)出，而大分子保留在袋內(nèi)。留在袋內(nèi)。 小分子雜質(zhì)（無(wú)機(jī)鹽、單糖、二糖小分子雜質(zhì)（無(wú)機(jī)鹽、單糖、二糖及氨基酸等）從透析袋中出來(lái)，而蛋及氨基酸等）從透析袋中出來(lái)，而蛋白質(zhì)留在袋內(nèi)。白質(zhì)留在袋內(nèi)。（1 1）透析法）透析法3.3.凝膠色譜法凝膠色譜法(1)(1)凝膠：凝膠：由多糖類(lèi)化合物（如葡聚糖、瓊脂糖）構(gòu)成的由多糖類(lèi)化合物（如葡聚糖、瓊脂糖）構(gòu)成的多孔球體，內(nèi)含許多貫穿的通道多孔球體，內(nèi)含許多貫穿的通道(2)原理：原理：大分子通過(guò)多孔凝膠顆粒的大分子通過(guò)多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快；小分子穿過(guò)多

5、間隙，路程短，流動(dòng)快；小分子穿過(guò)多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢?？啄z顆粒內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢。(3)(3)作用：作用：使樣品中使樣品中分子大小不同分子大小不同的蛋白的蛋白質(zhì)按順序分離出來(lái)質(zhì)按順序分離出來(lái)下圖中最早洗脫下來(lái)的是什么？為什么？下圖中最早洗脫下來(lái)的是什么？為什么？分子量分子量大大小小直徑大小直徑大小大于凝膠顆?？沾笥谀z顆粒空隙直徑，被阻擋隙直徑，被阻擋在顆粒的外面在顆粒的外面小于凝膠顆?？招∮谀z顆粒空隙直徑，可以進(jìn)隙直徑，可以進(jìn)入顆粒內(nèi)部入顆粒內(nèi)部運(yùn)動(dòng)方式運(yùn)動(dòng)方式垂直向下移動(dòng)垂直向下移動(dòng)垂直向下移動(dòng)，垂直向下移動(dòng)，無(wú)規(guī)則擴(kuò)散進(jìn)入無(wú)規(guī)則擴(kuò)散進(jìn)入顆粒內(nèi)部顆粒內(nèi)部運(yùn)動(dòng)速度運(yùn)動(dòng)速度較

6、快較快較慢較慢運(yùn)動(dòng)路徑運(yùn)動(dòng)路徑較短較短較長(zhǎng)較長(zhǎng)洗脫次序洗脫次序先從凝膠柱洗脫先從凝膠柱洗脫出來(lái)出來(lái)后從凝膠柱洗脫后從凝膠柱洗脫出來(lái)出來(lái) 用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)，分子量用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)，分子量大的蛋白質(zhì)大的蛋白質(zhì) A A路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢 B B路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較快路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較快 C C路程較短，移動(dòng)速度較慢路程較短，移動(dòng)速度較慢 D D路程較短，移動(dòng)速度較快路程較短，移動(dòng)速度較快D 相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的進(jìn)行過(guò)程可表示為圖中哪一個(gè)的進(jìn)行過(guò)程可表示為圖中哪一個(gè)B 4. 4.電泳電泳 (1) (1)概念：概念

7、：帶電粒子在電場(chǎng)作用下發(fā)生遷移的過(guò)帶電粒子在電場(chǎng)作用下發(fā)生遷移的過(guò)程。程。 方向：向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)方向：向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。 (2) (2)泳動(dòng)速度和方向：泳動(dòng)速度和方向： 速度：速度：帶電分子的遷移速度跟各種帶電分子的遷移速度跟各種分子帶電性質(zhì)分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的的差異以及分子本身的大小大小, ,形狀形狀有關(guān)。有關(guān)。 一般來(lái)說(shuō)，帶電顆粒所帶凈電荷越多，一般來(lái)說(shuō)，帶電顆粒所帶凈電荷越多，直徑越小，越接近于球形，則在電場(chǎng)中的泳直徑越小，越接近于球形，則在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度越快；反之，則越慢。動(dòng)速度越快；反之，則越慢。 電泳分離時(shí)，電荷量相差越大的物質(zhì)相距越遠(yuǎn)。

8、電泳分離時(shí)，電荷量相差越大的物質(zhì)相距越遠(yuǎn)。醋酸纖維醋酸纖維薄膜電泳薄膜電泳瓊脂糖瓊脂糖凝膠電泳凝膠電泳SDSSDS聚丙稀酰胺聚丙稀酰胺凝膠電泳：測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量。凝膠電泳：測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量。 SDSSDS能使蛋白質(zhì)完全變性，能使蛋白質(zhì)完全變性，SDSSDS所帶電荷大大超過(guò)了蛋所帶電荷大大超過(guò)了蛋白質(zhì)原有電荷。白質(zhì)原有電荷。 遷移率取決于分子大小遷移率取決于分子大小。(3)(3)類(lèi)型（載體）類(lèi)型（載體）: :使用使用SDS-SDS-聚丙烯酰胺電泳過(guò)程中，不同蛋聚丙烯酰胺電泳過(guò)程中，不同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于A A 電荷的多少電荷的多少 B B 分子的大

9、小分子的大小C C 肽鏈的多少肽鏈的多少 D D 分子形狀的差異分子形狀的差異 下列有關(guān)蛋白質(zhì)提取和分離的說(shuō)法，錯(cuò)誤下列有關(guān)蛋白質(zhì)提取和分離的說(shuō)法，錯(cuò)誤的是的是 ( ) A.透析法分離蛋白質(zhì)的原理是利用蛋白質(zhì)透析法分離蛋白質(zhì)的原理是利用蛋白質(zhì)不能通過(guò)半透膜的特性不能通過(guò)半透膜的特性 B.采用透析法使蛋白質(zhì)與其他小分子化合采用透析法使蛋白質(zhì)與其他小分子化合物分離開(kāi)來(lái)物分離開(kāi)來(lái) C.離心沉降法通過(guò)控制離心速率使分子大離心沉降法通過(guò)控制離心速率使分子大小、密度不同的蛋白質(zhì)分離小、密度不同的蛋白質(zhì)分離 D.蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中可以向與其自身所帶電蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中可以向與其自身所帶電荷相同的電極方向移動(dòng)荷相同的

10、電極方向移動(dòng)D三、血紅蛋白的提取和分離三、血紅蛋白的提取和分離 1. 1.樣品處理樣品處理 2.2.粗分離粗分離 3.3.純化純化 4.4.純度鑒定純度鑒定1.1.樣品處理樣品處理（1 1）洗滌紅細(xì)胞（低速短時(shí)離心，生理鹽水）洗滌紅細(xì)胞（低速短時(shí)離心，生理鹽水） 目的：去除雜蛋白。目的：去除雜蛋白。 血樣先血樣先低速短時(shí)離心低速短時(shí)離心分離紅細(xì)胞，然后吸出上分離紅細(xì)胞，然后吸出上層透明層透明的黃色血漿，將下層暗紅色的紅細(xì)胞液的黃色血漿，將下層暗紅色的紅細(xì)胞液體倒入燒杯，再加入體倒入燒杯，再加入五倍體積的生理鹽水五倍體積的生理鹽水，緩緩慢攪拌慢攪拌10min10min，低速短時(shí)間離心，如此重復(fù)洗

11、滌，低速短時(shí)間離心，如此重復(fù)洗滌三次，直至上清液中沒(méi)有黃色，表明紅細(xì)胞已三次，直至上清液中沒(méi)有黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。洗滌干凈。低速離心：防止白細(xì)胞沉淀。低速離心：防止白細(xì)胞沉淀。緩慢攪拌：防止紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。緩慢攪拌：防止紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。檸檬酸鈉：防止血液凝固。檸檬酸鈉：防止血液凝固。（2）血紅蛋白的釋放）血紅蛋白的釋放 在在蒸餾水和甲苯蒸餾水和甲苯作用下，紅細(xì)胞破裂釋放作用下，紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。出血紅蛋白。 注：加入蒸餾水后紅細(xì)胞液體積與原血液注：加入蒸餾水后紅細(xì)胞液體積與原血液體積要相同。體積要相同。甲苯：溶解細(xì)胞膜，有利于血紅蛋白的釋放甲苯：溶解細(xì)胞膜，

12、有利于血紅蛋白的釋放和分離和分離。蒸餾水作用：使紅細(xì)胞吸水脹破蒸餾水作用：使紅細(xì)胞吸水脹破1、洗滌紅細(xì)胞的目的是、洗滌紅細(xì)胞的目的是 A.去除血清去除血清 B.去除雜蛋白去除雜蛋白 C.除去血小板除去血小板 D.除去水除去水B2、選用紅細(xì)胞作為分離蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)材料，、選用紅細(xì)胞作為分離蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)材料，有何好處有何好處 （ ） A.血紅蛋白是有色蛋白血紅蛋白是有色蛋白 B.紅細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核紅細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核 C.紅細(xì)胞蛋白質(zhì)含量高紅細(xì)胞蛋白質(zhì)含量高 D.紅細(xì)胞紅細(xì)胞DNA含含量高量高A3、為了提取血紅蛋白，從學(xué)校附近的屠宰場(chǎng)、為了提取血紅蛋白，從學(xué)校附近的屠宰場(chǎng)取新鮮的豬血，對(duì)豬血處理的正確操作是取

13、新鮮的豬血，對(duì)豬血處理的正確操作是 ( )A.要在采血容器中預(yù)先加入抗凝血?jiǎng)幟仕嵋诓裳萜髦蓄A(yù)先加入抗凝血?jiǎng)幟仕徕c鈉 B.重復(fù)洗滌直到上清液呈紅色為止重復(fù)洗滌直到上清液呈紅色為止C.將離心后的血細(xì)胞加入清水緩慢攪拌將離心后的血細(xì)胞加入清水緩慢攪拌 D.取血回來(lái)后，馬上進(jìn)行高速長(zhǎng)時(shí)間離心取血回來(lái)后，馬上進(jìn)行高速長(zhǎng)時(shí)間離心A （3）分離血紅蛋白溶液）分離血紅蛋白溶液 將攪拌好的混合溶液將攪拌好的混合溶液中速長(zhǎng)時(shí)離中速長(zhǎng)時(shí)離心心后，試管中的溶液分為后，試管中的溶液分為4層。層。 第一層為無(wú)色透明的第一層為無(wú)色透明的甲苯層甲苯層， 第二層為第二層為脂溶性物質(zhì)的沉淀層脂溶性物質(zhì)的沉淀層， 第三層是

14、第三層是血紅蛋白的水溶液血紅蛋白的水溶液， 第四層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀第四層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。物。將試管中的液體用濾紙過(guò)濾，除去之溶性將試管中的液體用濾紙過(guò)濾，除去之溶性沉淀層，于沉淀層，于分液漏斗分液漏斗中靜置片刻后，分出中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。下層的紅色透明液體。分離血紅蛋白溶液分離血紅蛋白溶液有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑 （無(wú)色透明的甲苯層）（無(wú)色透明的甲苯層）脂類(lèi)物質(zhì)脂類(lèi)物質(zhì) （白色白色脂溶性物質(zhì)沉淀層）脂溶性物質(zhì)沉淀層）血紅蛋白溶液血紅蛋白溶液 （紅色透明液體）（紅色透明液體）紅細(xì)胞破碎物沉（暗紅色沉淀物）紅細(xì)胞破碎物沉（暗紅色沉淀物） 取取1mL1mL的血紅蛋白溶液裝入

15、的血紅蛋白溶液裝入透析袋透析袋中，將透析袋中，將透析袋放入盛有放入盛有300mL300mL的物的物質(zhì)的量的濃度為質(zhì)的量的濃度為20mmol/L20mmol/L的的磷酸磷酸緩沖液緩沖液（PH=7PH=7）中中，透析，透析12h12h。透析可以。透析可以去除樣品中去除樣品中分子量較小分子量較小的雜質(zhì)的雜質(zhì)，或用于更換樣品的或用于更換樣品的緩沖液緩沖液?！咀ⅰ烤彌_液作用：抵制外界酸、堿對(duì)溶液【注】緩沖液作用：抵制外界酸、堿對(duì)溶液pHpH的影響而保持的影響而保持pHpH穩(wěn)定。穩(wěn)定。 使用使用PH=7PH=7的磷酸緩沖液，有利于維持血的磷酸緩沖液，有利于維持血紅蛋白的正常特性。紅蛋白的正常特性。2.粗分

16、離粗分離-薄膜透析法薄膜透析法1 1、下列操作正確的是（、下列操作正確的是（ ） A. A. 分離紅細(xì)胞時(shí)采用低速長(zhǎng)時(shí)間離心分離紅細(xì)胞時(shí)采用低速長(zhǎng)時(shí)間離心 B. B. 紅細(xì)胞釋放出血紅蛋白只需要加入蒸餾紅細(xì)胞釋放出血紅蛋白只需要加入蒸餾水就可水就可 C. C. 分離血紅蛋白溶液是低速短時(shí)間離心分離血紅蛋白溶液是低速短時(shí)間離心 D. D. 透析時(shí)要用透析時(shí)要用20mmol/l20mmol/l的磷酸緩沖液，透的磷酸緩沖液，透析析12h12hD2 2、在蛋白質(zhì)的提取和分離中，關(guān)于對(duì)樣品處理、在蛋白質(zhì)的提取和分離中，關(guān)于對(duì)樣品處理過(guò)程中，分析無(wú)誤的是過(guò)程中，分析無(wú)誤的是 （ ）A A 洗滌紅細(xì)胞的目的

17、是去除血漿中的葡萄糖、無(wú)洗滌紅細(xì)胞的目的是去除血漿中的葡萄糖、無(wú)機(jī)鹽機(jī)鹽B B 洗滌時(shí)離心速度過(guò)小，時(shí)間過(guò)短，白細(xì)胞等會(huì)洗滌時(shí)離心速度過(guò)小，時(shí)間過(guò)短，白細(xì)胞等會(huì)沉淀，達(dá)不到分離的效果沉淀，達(dá)不到分離的效果C C 洗滌過(guò)程選用洗滌過(guò)程選用0.1%0.1%的生理鹽水的生理鹽水D D 透析的目的是去除樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的透析的目的是去除樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)雜質(zhì)D 3.3.純化純化-凝膠色譜法凝膠色譜法 去除相對(duì)分子量大的雜質(zhì)蛋白去除相對(duì)分子量大的雜質(zhì)蛋白凝膠的前處理凝膠的前處理配置凝膠懸浮液：配置凝膠懸浮液：計(jì)算并稱(chēng)取一計(jì)算并稱(chēng)取一定量的定量的凝膠浸泡于蒸餾水或洗脫液中充分溶脹凝膠浸泡于

18、蒸餾水或洗脫液中充分溶脹后，配后，配成凝膠懸浮液。成凝膠懸浮液。凝膠色譜柱的裝填方法凝膠色譜柱的裝填方法A A、固定：將色譜柱裝、固定：將色譜柱裝置固定在支架上。置固定在支架上。B B、裝填：、裝填：將凝膠懸浮液一次性的將凝膠懸浮液一次性的裝填入色譜柱內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠填裝填入色譜柱內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠填裝均勻。裝均勻。注意：注意：1 1、凝膠裝填時(shí)盡量緊密，以降低凝膠顆粒之、凝膠裝填時(shí)盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。間的空隙。 2 2、裝填凝膠柱時(shí)不得有氣泡存在：因?yàn)?、裝填凝膠柱時(shí)不得有氣泡存在：因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的

19、洗脫次序，降低分離效降低分離效果。果。裝填完畢后，立裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在即用緩沖液洗脫瓶，在50cm50cm高的操作壓下，用高的操作壓下，用300ml300ml的磷的磷酸緩沖液（酸緩沖液（pHpH為為7.07.0）充分洗）充分洗滌平衡滌平衡1212小時(shí)。小時(shí)。1 1、液面不要低于凝膠液面不要低于凝膠表面，否則可能有氣泡混入表面，否則可能有氣泡混入，影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)與最影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)與最終生物大分子物質(zhì)的分離效終生物大分子物質(zhì)的分離效果。果。2 2、不能發(fā)生洗脫液流干不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象露出凝膠顆粒的現(xiàn)象。樣品加入與洗脫樣品加入與洗脫 調(diào)節(jié)緩沖液面：調(diào)節(jié)

20、緩沖液面：打開(kāi)下端出口，使柱內(nèi)緩沖液緩慢下降打開(kāi)下端出口，使柱內(nèi)緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口。到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口。 滴加透析樣品：滴加透析樣品：吸管吸吸管吸1ml1ml樣品加到色譜柱的頂樣品加到色譜柱的頂端，滴加樣品時(shí)，吸管管口端，滴加樣品時(shí)，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動(dòng)加樣貼著管壁環(huán)繞移動(dòng)加樣，同時(shí)注意同時(shí)注意不要破壞凝膠面。不要破壞凝膠面。 樣品滲入凝膠床：樣品滲入凝膠床：加樣后打開(kāi)下端出口，使樣品滲入凝加樣后打開(kāi)下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口。膠床內(nèi)，等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口。 洗脫：洗脫：小心加入小心加入pH=7.0 pH=7

21、.0 的的20mmol/l20mmol/l的磷酸緩沖液到適當(dāng)?shù)牧姿峋彌_液到適當(dāng)高度，連接緩沖液洗脫瓶，打開(kāi)下端出口進(jìn)行洗脫。高度，連接緩沖液洗脫瓶，打開(kāi)下端出口進(jìn)行洗脫。 收集：收集：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出液，每流出液，每5ml5ml收集一試管，連續(xù)收集。收集一試管，連續(xù)收集。（在分離過(guò)程中，如（在分離過(guò)程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動(dòng)，說(shuō)明色譜柱制作成功）果紅色區(qū)帶均勻一致的移動(dòng)，說(shuō)明色譜柱制作成功） 1 1、在裝填凝膠柱時(shí)，不能有氣泡存在的原因、在裝填凝膠柱時(shí)，不能有氣泡存在的原因 ( ) ( ) A A、氣泡會(huì)攪亂洗脫液中

22、蛋白質(zhì)的洗脫次、氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次 序，降低分離效果序，降低分離效果 B B、氣泡阻礙蛋白質(zhì)的運(yùn)動(dòng)、氣泡阻礙蛋白質(zhì)的運(yùn)動(dòng) C C、氣泡與蛋白質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)、氣泡與蛋白質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng) D D、氣泡在裝填凝膠的時(shí)候，使凝膠不緊密、氣泡在裝填凝膠的時(shí)候，使凝膠不緊密A2 2、樣品的加入和洗脫的操作不正確的是、樣品的加入和洗脫的操作不正確的是 A A 加樣前，打開(kāi)色譜柱下端的流出口，使柱加樣前，打開(kāi)色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到凝膠面的下面內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到凝膠面的下面 B B加樣后，打開(kāi)下端出口，使樣品滲入凝膠加樣后，打開(kāi)下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)床內(nèi)

23、 C C等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口 D D用吸管小心的將用吸管小心的將1ml1ml透析后的樣品加到色譜透析后的樣品加到色譜柱的頂端，不要破壞凝膠面柱的頂端，不要破壞凝膠面A4.4.純度鑒定純度鑒定-SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝膠聚丙烯酰胺凝膠電泳電泳蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：（1）樣品處理：）樣品處理：包括洗滌紅細(xì)胞；血紅蛋包括洗滌紅細(xì)胞；血紅蛋白釋放；分離血紅蛋白溶液。白釋放；分離血紅蛋白溶液。（2）粗分離：）粗分離：薄膜透析法除去分子較小的薄膜透析法除去分子較小的雜質(zhì)。雜質(zhì)。（3）純化：）純化：通過(guò)凝膠色譜

24、法將分子量較大通過(guò)凝膠色譜法將分子量較大的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。（4）純度鑒定：）純度鑒定：通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定。鑒定。（以血紅蛋白的分離純化為例（以血紅蛋白的分離純化為例）三、蛋白質(zhì)提取分離的程序三、蛋白質(zhì)提取分離的程序1、下列關(guān)于、下列關(guān)于DNA和血紅蛋白的提取與分離和血紅蛋白的提取與分離屬于的敘述中，錯(cuò)誤的是屬于的敘述中，錯(cuò)誤的是 ( )A.可用蒸餾水漲破細(xì)胞的方法從豬紅細(xì)胞中可用蒸餾水漲破細(xì)胞的方法從豬紅細(xì)胞中提取到提取到DNA和蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)B.用不同濃度的用不同濃度的NaCl溶液反復(fù)溶解于析出溶液反復(fù)溶解于析出DNA可去除部分雜質(zhì)可去除部分雜

25、質(zhì)C.透析法分離蛋白質(zhì)的依據(jù)是利用蛋白質(zhì)不透析法分離蛋白質(zhì)的依據(jù)是利用蛋白質(zhì)不能通過(guò)半透膜的特性能通過(guò)半透膜的特性D.進(jìn)一步分離與純化血紅蛋白可用凝膠色譜進(jìn)一步分離與純化血紅蛋白可用凝膠色譜法、離心法、電泳法等法、離心法、電泳法等A2、下列關(guān)于血紅蛋白提取和分離實(shí)驗(yàn)中樣品、下列關(guān)于血紅蛋白提取和分離實(shí)驗(yàn)中樣品處理步驟的描述，正確的是處理步驟的描述，正確的是 ( )A.紅細(xì)胞的洗滌：加入蒸餾水，緩慢攪拌，紅細(xì)胞的洗滌：加入蒸餾水，緩慢攪拌，低速短時(shí)間離心低速短時(shí)間離心B.血紅蛋白的釋放：加入生理鹽水和甲苯，血紅蛋白的釋放：加入生理鹽水和甲苯，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢柚糜诖帕嚢杵魃铣浞謹(jǐn)嚢鐲.分離血紅蛋白：將攪拌好的混合液離心、分離血紅蛋白：將攪拌好的混合液離心、過(guò)濾后，用分液漏斗分離過(guò)濾后，用分液漏斗分離D.透析：將血紅蛋白溶液裝入透析袋，然后透析：將血紅蛋白溶液裝入透析袋，然后置于置于pH為為4.0的磷酸緩沖液中透析的磷酸緩沖液中透析12hC3、以下關(guān)于血紅蛋白提取和分離的過(guò)程及原、以下關(guān)于血紅蛋白提取和分離的過(guò)程及原理敘述正確的是理敘述正確的是 ( )A.紅細(xì)胞洗滌過(guò)程中要加入紅細(xì)胞洗滌過(guò)程中要加入5倍體積的蒸餾水，倍體積的蒸餾水，重復(fù)洗滌三次重復(fù)洗滌三次B.將血紅蛋白溶液放在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為將血紅蛋白溶液放在質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O.9的的NaCl溶液透析溶液透析12小時(shí)小時(shí)C.凝