巴氏小體實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、高熹 168615140001 2016年10月17日人體性染色質(zhì)體的觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握人體性染色質(zhì)的檢測(cè)方法； 2、觀察人體性染色質(zhì)的形態(tài)特征及存在部位；為進(jìn)一步研究人體染色體的畸變與疾病提供參考條件；3、了解雌性哺乳動(dòng)物X染色體失活假說和劑量補(bǔ)償效應(yīng)的機(jī)制。二、背景知識(shí)二十世紀(jì)六十年代，M.L.Barr等研究發(fā)現(xiàn)雌貓神經(jīng)細(xì)胞核膜內(nèi)凝縮的深染小體性染色質(zhì)體(sex-chromatin body)或巴氏小體(Barr body)，而雄性個(gè)體細(xì)胞中則沒有。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)：所有哺乳類雌體細(xì)胞中都可以見到這一結(jié)構(gòu)。此后研究發(fā)現(xiàn)這種與性別有關(guān)的兩型現(xiàn)象在有袋類、食肉類和靈長(zhǎng)類等動(dòng)物的多數(shù)

2、組織細(xì)胞中存在，而在嚙齒類中在少數(shù)組織中可以觀察到。三、實(shí)驗(yàn)原理在雌性個(gè)體的細(xì)胞中的2條染色體，在間期，有一條呈松散狀態(tài)，參加細(xì)胞生理活動(dòng)；另一條保持異固縮狀態(tài)，我們稱之為Barr小體。由于Barr小體是處于失活狀態(tài)，所以一般位于細(xì)胞核內(nèi)邊緣。形狀多樣（微凸形、三角形、卵形、短棒形等）。一般，在正常女性細(xì)胞中可能出現(xiàn)一個(gè)Barr小體，正常男性細(xì)胞中不可能出現(xiàn)Barr小體；（正常女性口腔粘膜細(xì)胞中約3050%有一個(gè)Barr小體。在不同實(shí)驗(yàn)室中計(jì)數(shù)的差別較大，而在男性中則僅只偶爾可見不典型者這是環(huán)境引起代謝的暫時(shí)現(xiàn)象，約2%以下）。對(duì)于性染色體畸變的個(gè)體。 Barr小體數(shù) = 細(xì)胞內(nèi)X染色體數(shù)1。

3、Barr小體特征及位置：它是處于失活狀態(tài)的X染色體，一般位于細(xì)胞核膜內(nèi)側(cè)邊緣的一個(gè)深染區(qū)（較細(xì)胞核要?。?，形狀多樣。劑量補(bǔ)償效應(yīng)：是指XY型性別決定的生物，由X染色體上的基因決定的性狀在兩性的表現(xiàn)幾乎相同。即X染色體上的基因的表達(dá)產(chǎn)物在雌、雄細(xì)胞中是等量的。 哺乳動(dòng)物 X染色體隨機(jī)失活或父源X染色體失活有袋動(dòng)物 父源X染色體失活黑腹果蠅 雄性個(gè)體X染色體基因表達(dá)水平加倍秀麗線蟲 雌性個(gè)體兩條X染色體基因表達(dá)水平減半補(bǔ)償?shù)膶?shí)現(xiàn)途徑： X染色體轉(zhuǎn)錄速率的差異性，雄性細(xì)胞中的X染色體轉(zhuǎn)錄速率雌性細(xì)胞中2條X染色體的轉(zhuǎn)錄速率；雌性細(xì)胞中有一條染色體失活。四、實(shí)驗(yàn)器材、材料和試劑1、器材：生物顯微鏡、鑷

4、子、漱口杯、牙簽、載玻片、蓋玻片、染色缸、解剖針。2、實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)者的口腔黏膜或帶有毛囊的頭發(fā)。3、試劑：50%，70%，95%乙醇、二甲苯、5mol/LHCL、1%硫堇水溶液、蒸餾水、封固劑、乙醚、醋酸地衣紅燃料或45%乙酸。五、實(shí)驗(yàn)步驟1、取材1）口腔黏膜材料載玻片用去污劑徹底清洗，蒸餾水徹底沖洗后再經(jīng)過70%乙醇沖洗，在火焰上烘干保存?zhèn)溆?。以防操作過程中上皮細(xì)胞脫落。取材前，自來(lái)水漱口三次，去除口腔中的細(xì)菌和已經(jīng)退化的黏膜上皮細(xì)胞。防止口腔中的細(xì)菌被硫堇溶液染色與細(xì)胞發(fā)生混淆。取材時(shí)，張開嘴，用牙簽輕輕刮面頰內(nèi)壁，將掛下來(lái)的細(xì)胞在絕對(duì)結(jié)晶的載玻片上涂成一個(gè)占較大面積的薄層，空氣中干燥3

5、0min后進(jìn)行染色。2）毛囊材料取發(fā)根細(xì)胞：拔取一根帶有毛囊的頭發(fā)，置于載玻片上，滴加固定液于毛囊上，固定1min左右，空氣干燥。2、染色1）口腔黏膜材料將涂片依次放入95%、70%、50%乙醇和蒸餾水的染色缸中，每種濃度的溶液浸泡2min。涂片自蒸餾水中取出后，放入5mol/LHCL染色缸中，大約5s。將酸解的涂片放入蒸餾水的染色缸中10-15s去算，最好重復(fù)一至兩次，PH會(huì)影響染色效果。在1%的硫堇水溶液染色缸處理10-15min。染色后經(jīng)蒸餾水洗后一次在下列酒精溶液中脫水：50%乙醇30s，70%乙醇30s，95%乙醇30s，無(wú)水乙醇30s。在二甲苯中透明1min，然后取出多余的二甲苯。

6、2）發(fā)根細(xì)胞去下毛囊，棄發(fā)干，加一滴醋酸地衣紅染液后蓋上蓋玻片，然后文火微熱，靜置5min后蓋一濾紙壓片?；蛘咴诓牧仙系我坏?5%乙酸或5mol/LHCL解離5min后吸掉多余乙酸。用潔凈的解剖針針頭將毛囊的組織分散均勻，待晾干后將載玻片放入硫堇溶液中染色20min。取出載玻片移入75%乙醇中作用30s。取出載玻片晾干待鏡檢。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析1、鏡檢制片時(shí)，先用低倍鏡找到細(xì)胞，再用高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)性染色質(zhì)體。應(yīng)該注意核質(zhì)是網(wǎng)狀或細(xì)顆粒狀分布；核膜清晰、核無(wú)缺損；染色適度；周圍無(wú)雜菌。2、性染色質(zhì)體位于核膜的內(nèi)驗(yàn)，應(yīng)為深藍(lán)色，直徑大于1um。在口腔黏膜上皮細(xì)胞中很難辨認(rèn)非邊緣X染色質(zhì)體。3、性

7、染色質(zhì)體偶爾也在雄性細(xì)胞中觀察到，概率很小。七、注意事項(xiàng)1、刮口腔上皮細(xì)胞前要漱口。2、涂片略干再加改良苯酚口紅。3、染色時(shí)間不要太長(zhǎng)，否則核質(zhì)著色深，X染色質(zhì)體不易區(qū)分。4、毛囊細(xì)胞要充分解離，壓片前可先用解剖針敲片，使細(xì)胞解離。八、思考題1、掌握概念：巴氏小體、性染色質(zhì)、X小體、劑量補(bǔ)償效應(yīng)。巴氏小體：在哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核中，除一條X染色體外，其余的X染色體常濃縮成染色較深的染色質(zhì)體，此即為巴氏小體。又稱X小體，通常位于間期核膜邊緣。性染色質(zhì)：性染色質(zhì)指高等哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核內(nèi)的一種可被堿性染料染成深色的小體，性染色質(zhì)檢查可初篩性染色體病及鑒別性別，對(duì)兩性畸形可輔助診斷。X小體：緊貼細(xì)胞核膜內(nèi)

8、面的團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)，直徑約1um，染色程度較其他染色質(zhì)深。劑量補(bǔ)償效應(yīng)：使細(xì)胞核中具有兩份或兩份以上基因的個(gè)體和只有一份基因的個(gè)體出現(xiàn)相同表型的遺傳效應(yīng)。一個(gè)細(xì)胞核中某一基因的數(shù)目稱為基因劑量。在以性染色體決定性別的動(dòng)物中，常染色體上的基因劑量并無(wú)差別，因?yàn)榇菩蹆尚詣?dòng)物的常染色體的形態(tài)和數(shù)目都相同。但是對(duì)于性染色體來(lái)講，包括人類在內(nèi)的哺乳動(dòng)物雌性個(gè)體的每一體細(xì)胞中有兩條X染色體，所以在X染色體上的基因劑量有兩份，而雄性個(gè)體只有一條 X染色體，基因劑量只有一份。2、查閱文獻(xiàn)指出巴氏小體研究的新進(jìn)展。羊水脫落細(xì)胞巴氏小體探究文獻(xiàn)記載口腔黏膜細(xì)胞中， 巴氏小體百分率男性5%，18%女性42%。本試驗(yàn)結(jié)果中男胎巴氏小體3%有22 例， 8%女胎36%有15例，女胎巴氏小體明顯低于文獻(xiàn)，從表中可以看出男女巴氏小體百分率仍呈現(xiàn)出明顯分界線，說明羊水脫落細(xì)胞巴氏小體與胎兒性別密切相關(guān)3，準(zhǔn)確率達(dá)92.5%，只是與口腔黏膜細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)不一樣。尤其兩者中間出現(xiàn)的3%巴氏小體8%過渡值，其間男胎女胎均有，此區(qū)間不可以作為判斷的依據(jù)。出現(xiàn)以上差異，有可能與實(shí)驗(yàn)對(duì)象及材料不同有關(guān)，其次鏡檢者的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)，對(duì)可數(shù)細(xì)胞的認(rèn)定不一樣，也可出現(xiàn)差異，口腔間期細(xì)胞較多，羊水脫落細(xì)胞退化程度較高，間