植物組織中可溶性糖含量的測定

1、植物組織中可溶性糖含量的測定碳素營養(yǎng)中，作為營養(yǎng)物質(zhì)主要是指可溶性糖和淀粉。它們在營養(yǎng)中的作用主要有：合成纖維素組成細胞壁；轉(zhuǎn)化并組成其他有機物如核苷酸、核酸等；分解產(chǎn)物是其他許多有機物合成的原料，如糖在呼吸過程中形成的有機酸，可作為NH 3 的受體而轉(zhuǎn)化為氨基酸；糖類作為呼吸基質(zhì)，為作物的各種合成過程和各種生命活動提供了所需的能量。由于碳水化合物具有這些重要的作用，所以是營養(yǎng)中最基本的物質(zhì)，也是需要量最多的一類。蒽酮法測定可溶性糖一、原理糖在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用

2、于糖的定 量測定。該法的特點是幾乎可以測定所有的碳水化合物，不但可以測定戊糖與己糖含量，而且可以測所有寡糖類和多糖類，其中包括淀粉、纖維素等（因為反應(yīng)液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發(fā)生反應(yīng)），所以用蒽酮法測出的碳水化合物含量，實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒有必要細致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量，省去許多麻煩，因此，有特殊的應(yīng)用價值。但在測定水溶性碳水化合物時，則應(yīng)注意切勿將樣品的未溶解殘渣加入反應(yīng)液中，不然會因為細胞壁中的纖維素、半纖維素等與蒽酮試劑發(fā)生反應(yīng)而增加了測定誤差。此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘

3、露糖較淺，五碳糖顯色更淺，故測定糖的混合物時，常因不同糖類的比例不同造成誤差，但測定單一糖類時，則可避免此種誤差。糖類與蒽酮反應(yīng)生成的有色物質(zhì)在可見光區(qū)的吸收峰為620 nm ，故在此波長下進行比色。二、實驗材料、試劑與儀器設(shè)備（一）實驗材料任何植物鮮樣或干樣。（二）試劑1 . 80 乙醇。2 .葡萄糖標準溶液（100 ag/mL ）:準確稱取100 mg分析純無水葡萄糖，溶于蒸儲水并 定容至100 mL ,使用時再稀釋 10倍（100 11 g/mL ）。3 蒽酮試劑：稱取1.0 g 蒽酮，溶于80% 濃硫酸（將98% 濃硫酸稀釋，把濃硫酸緩緩加入到蒸播水中）1000 mL中，冷卻至室溫，貯

4、于具塞棕色瓶內(nèi)，冰箱保存，可使用23周。（三） 儀器設(shè)備分光光度計，分析天平，離心管，離心機，恒溫水浴，試管，三角瓶，移液管（5 、 1 、 0.5mL ），剪刀，瓷盤，玻棒，水浴鍋，電爐，漏斗，濾紙。三、實驗步驟1 .樣品中可溶性糖的提取 稱取剪碎混勻的新鮮樣品 0.51.0 g （或干樣粉末 5100 mg ），放入大試管中，加入15 mL 蒸餾水，在沸水浴中煮沸20 min ，取出冷卻，過濾入100mL 容量瓶中，用蒸餾水沖洗殘渣數(shù)次，定容至刻度。2 .標準曲線制作取6支大試管，從05分別編號，按表 24-1加入各試劑。表 24-1 蒽酮法測可溶性糖制作標準曲線的試劑量試劑管號01234

5、5100 11 g/mL葡萄糖溶液（mL ）00.20.40.60.81.0蒸播水（mL ）1.00.80.60.40.20席、酮試劑（mL ）5.05.05.05.05.05.0葡萄糖量（心g ）020406080100將各管快速搖動混勻后，在沸水浴中煮10 min ,取出冷卻，在620 nm波長下，用空白調(diào)零測定光密度，以光密度為縱坐標，含葡萄糖量（ ag ）為橫坐標繪制標準曲線。3 .樣品測定 取待測樣品提取液 1.0 mL 加慈酮試劑5 mL ,同以上操作顯色測定光密度。 重復(fù)3次。四、結(jié)果計算溶性糖含量（）=從標準曲線查得糖的量（pg） x提取液體積（ml） x稀釋 倍數(shù)/測定用樣品

6、液的體積（ml） x樣品重量（g） X106 X100式中：C從標準曲線查得葡萄糖量，ag。V T 樣品提取液總體積，mL oV 1顯色時取樣品液量，mL。W樣品重（g ）。n苯酚法測定可溶性糖一、原理植物體內(nèi)的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的單糖和寡聚糖。苯酚法測定可溶性糖的原理是：糖在濃硫酸作用下，脫水生成的糠醛或羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10100mg范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且在 485 nm 波長下有最大吸收峰，故可 用比色法在此波長下測定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法簡單，靈敏 度高，實驗時基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定1

7、60 min 以上。二、實驗材料、試劑與儀器設(shè)備（一）實驗材料新鮮的植物葉片。（二）試劑1. 90 %苯酚溶液：稱取 90 g 苯酚（AR ）,加蒸儲水溶解并定容至100 mL ,在室溫下可保存數(shù)月。2. 9 %苯酚溶液：取 3 mL 90 %苯酚溶液，加蒸儲水至30 mL ，現(xiàn)配現(xiàn)用。3. 濃硫酸（比重 1.84 ）。4. 1 %蔗糖標準液：將分析純蔗糖在80 C下烘至恒重，精確稱取1.000 g ,加少量水溶解，移入100 mL容量瓶中，加入 0.5 mL 濃硫酸，用蒸儲水定容至刻度。5. 100 ag/L蔗糖標準液：精確吸取 1 %蔗糖標準液l mL 加入100 mL容量瓶中，加蒸播 水

8、定容。（三）儀器設(shè)備分光光度計，電爐，鋁鍋， 20 mL刻度試管，刻度吸管 5 mL 1 支、l mL 2 支，記號筆， 吸水紙適量。三、實驗步驟1 .標準曲線的制作取20 mL刻度試管11支，從010分別編號，按表 24-2加入 溶液和水，然后按順序向試管內(nèi)加入 1mL 9 %苯酚溶液，搖勻，再從管液正面以520 s時 間加入5 mL濃硫酸，搖勻。比色液總體積為 8 mL ,在室溫下放置 30 min ,顯色。然后以空白為參比，在 485 nm 波長下比色測定，以糖含量為橫坐標，光密度為縱坐標，繪制標準曲 線，求出標準直線方程。表24-2苯酚法測可溶性糖繪制標準曲線的試劑量試劑管號01、23

9、、45、67、89、10100ag/L蔗糖標準液（mL ）00.20.40.60.81.0蒸播水（mL ）2.01.81.61.41.21.0蔗糖量（心g ）0204060801002 .可溶性糖的提取 取新鮮植物葉片，擦凈表面污物，剪碎混勻，稱取0.10.3 g, 共3份，分別放入3支刻度試管中，加入 510 mL蒸播水，塑料薄膜封口，于沸水中提取 30 min （提取2次），提取液過濾入 25 mL容量瓶中，反復(fù)沖洗試管及殘渣，定容至刻度。3 .測定吸取0.5 mL樣品液于試管中（重復(fù) 2次），加蒸儲水1.5 mL ,同制作標準曲線 的步驟，按順序分別加入苯酚、濃硫酸溶液，顯色并測定光密度。由標準線性方程求出糖的量，