霉菌毒素檢測方法綜述

1、霉菌毒素檢測方法綜述由于產(chǎn)生毒素的霉菌無處不在，以及我們對大多數(shù)有利于霉菌生長和霉菌毒素產(chǎn)生的條件控制不力， 造成食品和飼料的霉菌毒素污染問題越來越成為現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中不可忽視的重大難題。在各種農(nóng)產(chǎn)品上生長著的各種各樣的霉菌，這些霉菌都能產(chǎn)生霉菌毒素，霉菌毒素是有毒的化合物，有些甚至是致癌的。霉菌毒素有很多種(CAST,2003),包括黃曲霉毒素，主要是黃曲霉毒素B1和M1(Aflatoxins , FBI、FM1)；赭(棕)曲霉毒素 A (OchratoxinA , OA ；雜色(柄)曲霉毒素( Terigmatocystin )；展青霉素(Patulin,PTL )；玉米赤霉烯酮(Zeara

2、lenone,ZEN(F 2) ) ; 串珠鐮刀菌素(Moniliformin,MF )，三硝基丙酸以及屬于單端孢霉烯族化合物(Trichothecenes )的 T 2 毒素(T 2toxin,T 2)；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素)(Deoxynivalenol,DON )；二乙酰鐮草鐮刀菌烯醇(Diacetoxyscirpenol , DAS等。聯(lián)合國糧農(nóng)組織在近期的報道中指出，全世界至少99 個國家，占世界人口的87，針對糧食和飼料的霉菌毒素污染問題都有相關(guān)的規(guī)定。在未來的幾年里，與不斷變化的全球氣候有關(guān)的氣象突發(fā)事件的增多將進一步向我們提出挑戰(zhàn)。霉菌毒素污染給食品企業(yè)、糧油加工企業(yè)、

3、畜禽養(yǎng)殖場以及飼料的加工企業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。目前霉菌毒素檢測常用的方法如下幾種：一、 薄層層析法：TLC 法是針對不同的樣品，用適宜的提取溶劑將霉菌毒素從樣品中提取出來，經(jīng)柱層析凈化，再在薄層板上層析展開、分離，利用霉菌毒素的熒光性，根據(jù)熒光斑點的強弱與標準比較測定其最低含量。 TLC 法樣品前處理繁瑣，且提取和凈化效果不夠理想，提取液中雜質(zhì)較多，在展開時影響斑點的熒光強度。二、色譜法：色譜法，包括薄層色譜、氣相色譜、液相色譜等，一直是最重要的霉菌毒素的化學分析方法。現(xiàn)在比較普遍的霉菌毒素的分析方法還是液相色譜法，包括液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。該法快速而準確，但需要昂貴的儀器設(shè)備，僅限于專

4、業(yè)檢測機構(gòu)獲得科研和調(diào)查分析、監(jiān)測使用，未能在企業(yè)及基層廣泛推廣使用，而且其結(jié)果的滯后效應(yīng)大大降低了對生產(chǎn)實際的指導效果。三、免疫化學檢測法：(膠體金免疫層析法，酶聯(lián)免疫吸附法)免疫學檢測方法是基于抗體與抗原或半抗原之間的選擇性反應(yīng)而建立起來的一種生物化學分析法。通常具有高的選擇性和很低的檢出限，廣泛用于各種抗原、半抗或抗體的測定，一般可分為熒光免疫法、發(fā)光免疫法、免疫法及電化學免疫法等非放射免疫法和放射免疫法，其中在飼料霉菌毒素檢測中應(yīng)用較廣的主要是酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和膠體金免疫層析法。免疫學檢測方法由于其快速、靈敏、準確、可定量、操作簡便、無需貴重儀器設(shè)備，且對樣品純度要求不高等

5、特性，特別適用于飼料廠、糧油/食品加工廠、養(yǎng)殖場等企業(yè)進行原料或成品的檢測以及工商質(zhì)監(jiān)部門現(xiàn)場檢測。該類方法有以下特點：1) 靈敏度高2) 干擾?。嚎贵w抗原的免疫反應(yīng)特異性很強，結(jié)構(gòu)類似物、熒光物質(zhì)、有色物質(zhì)對檢測的干擾很小。3) 操作簡便快捷：由于特異性強，簡化了樣品的預(yù)處理和提取純化過程，同時操作步驟也非常簡便， 測定時間也短。4) 安全性高，污染少，成本低廉：不需要昂貴的測定儀器，所用試劑也相對較少，特別是因為靈敏度高，毒素標準品的濃度可以很低，減少了對檢測人員和環(huán)境的潛在危害和污染。幾種檢測霉菌毒素方法特點對比表常用方法薄層層析法色譜法膠體金免疫層析法酶聯(lián)免疫吸附法檢測操作繁瑣繁瑣簡單

6、簡單是否定量目測半定量士旦 At里定性士旦 At里敏感性差高高高提取效率低高高高儀器設(shè)備設(shè)備簡單設(shè)備昂貴簡單設(shè)備簡單設(shè)備樣本前處理 1繁瑣繁瑣簡單簡單幾種霉菌毒素快速檢測方法對比方法名 稱優(yōu)點局限性適用單位膠體金快捷型- 直接法1、簡便快速，5分鐘出結(jié)果2、樣品處理時間非常短3、攜帶方便，適用基層4、可以單個樣品逐一檢測， 不需要做曲線5、無需復雜設(shè)備和專業(yè)知 識，操作人員5分鐘即可學 會，即學即用6、室溫保存，保存期長1、定性檢測，只判斷超不超 標，不給具體數(shù)據(jù)2、檢測樣品范圍較窄，不能 測含油較多的樣品3、用于提取的溶劑為甲醇， 有一定的毒性4、檢測高靈敏度時穩(wěn)定性弱 于膠體金精準型a.飼

7、料生產(chǎn)加工企業(yè)b.糧食谷物粗加工企業(yè)c.工商質(zhì)監(jiān)部門用于快速篩查d.畜禽養(yǎng)殖戶自查膠體金 精準型- 萃取復 溶法1、與HPLC法對照，準確 性非常好，有權(quán)威檢測中心 驗證報告2、檢測樣品范圍非常廣，凡 是可能污染霉菌毒素的樣品（包括油類），均可用于檢 測3、整個操作過程所使用的試 劑均無毒無害4、樣本中毒素提取回收率高 且穩(wěn)定5、樣品本身顏色對檢測結(jié)果 影響小6、可以通過調(diào)整稀釋倍數(shù)準 確地檢測多個濃度梯度，可 實現(xiàn)半定量檢測7、操作較簡單，一般操作人 員半小時即可學會，即學即 用8、室溫保存，保存期長1、定性檢測，只判斷超不超標，不給具體數(shù)據(jù)2、操作時間比快捷型長3、操作步驟多于快捷型4、一

8、張試紙只能測一份樣品a.糧油制品生產(chǎn)加工企業(yè) b.食品加工貿(mào)易企業(yè) c.香料調(diào)味品生產(chǎn)加工企 業(yè)d.食用油生產(chǎn)企業(yè)e.國家/省市縣級糧油監(jiān)督 檢測中心（站）f.商質(zhì)監(jiān)部門用市場 快速篩查g.飼料生產(chǎn)加工企業(yè)h.其他需檢測霉菌毒素的 行業(yè)酶聯(lián)免 疫試劑 盒 Elisa1、準確定量，有權(quán)威機構(gòu)驗 證報告2、批量樣品，一次檢測3、采用直接競爭法，步驟簡 單4、靈敏度高于膠體金法，檢 測范圍廣5、檢測值基本不受樣品底色 干擾1、操作較復雜，需要專業(yè)人 員操作2、保存溫度有限制，保存期 一年3、不適合基層現(xiàn)場檢測4、檢測樣品范圍較窄，對于 含油較多的樣品，需另行設(shè)計 樣本處理方法a.食品相關(guān)分析實驗室b.糧油監(jiān)測檢測中心c.有條件的糧油飼料生產(chǎn) 加工企業(yè)希望能對關(guān)注霉菌毒素以上兩表對比了各種方法的優(yōu)缺點以及各種單位最實用的檢測方法分析,的企業(yè)和單位有所幫助，但是同行業(yè)也可以從經(jīng)濟成本和樣品不同要求出發(fā)也有可以找到最適合自己 企業(yè)適用的檢測方法。下表中針對食品和飼料行業(yè)中不同的原料推薦了相應(yīng)的初篩方法：食品行業(yè)黃曲霉毒素初篩方法飼料行業(yè)黃曲霉毒素初篩方法品名推薦檢測方法品名推薦檢測方法膠體金快捷型一直接檢測法膠體金精 準型-萃 取復溶法酶聯(lián)免疫 試劑盒Elisa膠體金快 捷型一直 接檢測法膠體金精 準型-萃 取復溶法酶聯(lián)免疫 試劑盒Elisa玉米及其制品玉米花生及其制品大豆、豆粕