黑米中花青素的提取

1、黑米中花青素的粗提取摘要：本課題以黑米為原料，采用水提法和酸化乙醇提取法對(duì)黑米中的花青素進(jìn)行粗提取。采用單因素試驗(yàn)考察了料液比、提取時(shí)間、提取溫度、pH值及提取液濃度對(duì)花青素提取量的影響。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)正交試驗(yàn)考察花青素的最佳提取工藝。關(guān)鍵詞：黑米；花青素前言化學(xué)合成的食用色素具有色澤鮮艷、穩(wěn)定性好、成本低廉、制備簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)， 在食品工業(yè)中得到廣泛應(yīng)用。隨著人們回歸自然的意識(shí)日益增強(qiáng)， 促使人類(lèi)重新 認(rèn)識(shí)到天然色素作為食品添加劑具有不可代替的價(jià)值。 天然色素直接取自于自然 界中的動(dòng)植物和微生物，因而用于食品、化妝品及至藥品更為安全可靠。 我國(guó)食 品行業(yè)對(duì)合成色素與天然色素都有使用 口1。但現(xiàn)

2、代醫(yī)學(xué)研究表明：合成色素作 為食品著色劑可造成人體傷害。因此，許多發(fā)達(dá)國(guó)家禁止在食品中使用合成色素， 天然色素來(lái)源于自然，具有安全性，有的還有一定的營(yíng)養(yǎng)和藥理作用開(kāi)發(fā)天然色素取代人工合成色素作為食品著色劑是必然的發(fā)展趨勢(shì)。黑米是特種稻米，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有一定的保健作用，被認(rèn)為是滋補(bǔ)佳品，有 “開(kāi)胃益中，健脾暖肝，明目活血，滑澀補(bǔ)精”等作用，歷來(lái)深受東亞地區(qū)人民 的喜愛(ài)。研究證實(shí)，黑米所表現(xiàn)出來(lái)生理保健作用主要不是來(lái)自黑米中的膳食纖 維、維生素和礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)素，而是與黑米皮中富含的花色甘色素有關(guān)。花色甘是自然界廣泛分布的一種植物多酚，在大部分植物花瓣和果實(shí)種皮當(dāng)中都不 同程度的存在。黑米成熟過(guò)程中

3、，會(huì)在種皮內(nèi)積聚大量花色音色素， 從而使其糙 米呈現(xiàn)出棕紅色、紫紅色、紫黑色乃至黑色等顏色。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，花色甘 類(lèi)物質(zhì)除了賦予植物豐富的色彩外，還具有抗氧化、抗炎、降血脂以及抑制月中瘤 生成等生理功能，同時(shí)花色甘作為一種較為安全的天然色素， 在食品工業(yè)也顯示 出了廣闊的應(yīng)用前景，因而研究和開(kāi)發(fā)利用黑米色素有良好的發(fā)展前景?；ㄇ嗨胤肿又幸虼嬖诟叨确肿庸餐篌w系， 易溶于水、甲醇、乙醇等極性溶劑 中，因此通常以含有少量鹽酸或甲酸的乙醇為溶劑提取花青素。其提取方法主要 有溶劑提取法、超聲提取法、微波提取法、超臨界流體萃取法等。溶劑提取法中水提法成本低，但提取率差，資源浪費(fèi)嚴(yán)重；超臨界流體萃取法對(duì)

4、設(shè)備要求較高， 成本高；超聲提取法的生產(chǎn)能力不高，不適合大規(guī)模生產(chǎn)本實(shí)驗(yàn)采用水提法和酸化乙醇提取法對(duì)黑米中花青素的提取工藝進(jìn)行研究，旨在確定黑米中花青素的最佳提取工藝，為黑米資源的充分利用奠定理論基礎(chǔ)。1材料1.1 供試材料黑米購(gòu)自石河子市金馬糧油店1.2 主要儀器設(shè)備紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、電子天平、恒溫水浴鍋、離心機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、冷 凍干燥機(jī)、粉碎機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、真空泵、布氏漏斗、抽濾瓶、容量瓶、三角瓶、 燒杯、試管、量筒、玻璃棒、移液管、濾紙等。1.3 主要試劑75%乙醇、無(wú)水乙醇、磷酸氫二鈉、鹽酸、檸檬酸2方法2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作(1)配制濃度為0.31mg/ml的花青素標(biāo)準(zhǔn)液準(zhǔn)確稱(chēng)取1

5、.24mg花青素標(biāo)樣，溶于4ml無(wú)水乙醇，搖勻，制得應(yīng)用液。(2)分別精密移取上述標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml至10.00ml容量瓶中，用75%乙醇溶液準(zhǔn)確定容，得到濃度分別為0、3.10、6.20、 12.40、18.60、24.80、31.00仙g/mfi標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 。以75%乙醇溶液為空白對(duì) 照，在530nm波長(zhǎng)下測(cè)定上述標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度，繪制吸光度-濃度標(biāo)準(zhǔn) 曲線(圖1),并計(jì)算出回歸方程。2.2 水提法提取黑米花青素操作要點(diǎn)(1)原料選擇及處理。先將黑米中的雜質(zhì)去除，再用高效粉碎機(jī)粉碎，然后過(guò)60目篩，得黑米粉末。(2)提取。分別

6、將黑米粉攪拌均勻，在不同的提取溫度、時(shí)間、料液比、pH下進(jìn)行提取。(3)抽濾。用布氏漏斗、抽濾瓶和真空泵將反應(yīng)好的料液抽濾。(4)蒸發(fā)濃縮。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液蒸發(fā)濃縮后備用。(5)干燥。先將濃縮后的濾液置于平皿中先凍成冰，再置于冷凍干燥機(jī)內(nèi)干燥得花青素的粗提取物。2.2.1單因素試驗(yàn)2.2.1.1 料液比對(duì)花青素提取率的影響精確稱(chēng)取5份3.0g的黑米粉，放入錐形瓶中，按料液比(W/V)1 : 4、1: 6、1: 8、1: 10、1: 12的比例分別加入純凈水，常溫提取120min。抽濾后將濾液定容 至250ml,并在波長(zhǎng)為530nm處測(cè)其吸光度值。2.2.1.2 提取溫度對(duì)花青素提取率的影響精

7、確稱(chēng)取5份3.0g的黑米粉，放入錐形瓶中，按料液比(W/V)1 : 10加入純凈 水，然后將錐形瓶分別放入30、40、50、60及70c的水浴鍋中，保溫提取120min, 抽濾后將濾液定容至250ml,并在波長(zhǎng)530nm處測(cè)其吸光度值。2.2.1.3 提取時(shí)間對(duì)花青素提取率的影響精確稱(chēng)取5份3.0g的黑米粉，放入錐形瓶中，按料液比(W/V)1 : 10加入純凈 水，然后將錐形瓶放入50 c的水浴鍋中，分別提取80、100、120、140及160min, 抽濾后將濾液定容至250ml,并在波長(zhǎng)530nm處測(cè)其吸光度值。2.2.1.4 pH對(duì)花青素提取率的影響精確稱(chēng)取5份5.0g的黑米粉，放入錐形

8、瓶中，按料液比(W/V)1 : 10加入pH 分別為2.8、3.2、3.6、4.0、4.4的磷酸氫二鈉一檸檬酸緩沖液，將錐形瓶放入50 C 水浴鍋中，保溫提取120min,抽濾后將濾液定容至250ml,并在波長(zhǎng)530nm處 測(cè)其吸光度值。2.2.2正交試驗(yàn)表1水提法提取黑米花青素的正交試驗(yàn)因素與水平ES水平料液比(A)溫度(B)pH(C)時(shí)間(D)11:8402.810021:10503.212031:12603.6140從黑米中提取花色昔屬于固液浸提過(guò)程，由于該過(guò)程受到溶劑、溫度、時(shí)間、 物料比等多種因素的影響，優(yōu)化其最佳的因素與水平是提高黑米花色甘提取率的基礎(chǔ)。因此在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，考

9、察料液比、提取溫度、 pH和提取時(shí)間對(duì) 黑米中花青素提取率的影響。進(jìn)行正交試驗(yàn) L9（34）（表1）,以提取液的吸光度值 為評(píng)價(jià)指標(biāo)，確定水提法提取黑米花青素的最佳提取工藝 ：9：02.3 酸化乙醇提取法提取黑米花青素由于黑米花青素屬水溶性色素，在中性或弱堿性溶液中不易被提取且不太穩(wěn) 定。酸性溶劑可在破壞植物細(xì)胞膜的同時(shí)溶解花青素，故采用酸化乙醇浸提法提 取黑米花青素。先將黑米中白雜質(zhì)去除，再用高效粉碎機(jī)粉碎，然后過(guò)60目篩，得黑米粉末。 分別將黑米粉攪拌均勻，在不同的提取溫度、提取時(shí)間、料液比、提取液濃度下 進(jìn)行提取，離心（5000r/min）15min ,取上清液1ml,先定容至10ml后

10、在530nm測(cè) 定吸光值。2.3.1 單因素試驗(yàn)2.3.1.1 提取液濃度對(duì)花青素提取量的影響分別稱(chēng)取黑米粉五份，每份1.00g,分別添加55%、65%、75%、85%、95% 的乙醇溶液10ml在30c水浴中提取30min,提取1次，將提取液離心，取上層 清液1ml,定容至10ml后在530nm測(cè)吸光值。2.3.1.2 提取時(shí)間對(duì)花青素提取量的影響分別稱(chēng)取黑米粉五份，每份1.00g,用10ml75%乙醇溶液在30c水浴中提取 20、30、40、60、80min,提取1次，將提取液離心，取上清液1ml,定容至10ml 后在530nm測(cè)吸光值。2.3.1.3 提取溫度對(duì)花青素提取量的影響分別稱(chēng)取

11、黑米粉五份，每份1.00g,用10ml75%乙醇溶液在20、30、40、50、 60c的水浴中提取30min,提取1次，將提取液離心，取上清液1ml后定容至 10ml在530nm處測(cè)吸光值。2.3.1.4 提取液的料液比對(duì)花青素提取量的影響分別稱(chēng)取黑米粉五份，每份1.00g,按料液比1: 4、1: 6、1: 8、1: 10、1: 12的料液比加入75%乙酉!在30c水浴中提取30min,提取1次，將提取液離心， 取上清液1ml定容至10ml在530nm處測(cè)吸光值。2.3.2 正交試驗(yàn)在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，考察料液比、提取溫度、提取液濃度、提取時(shí)間對(duì) 黑米中花青素提取率的影響。進(jìn)行 L9 （34

12、）正交試驗(yàn)（表2）,以提取液的吸光度 值為評(píng)價(jià)指標(biāo)，確定酸法提取黑米花青素的最佳提取工藝口 °。表2酸化乙醇法提取黑米花青素的正交試驗(yàn)因素與水平因素水平 乙醇濃度（A） 溫度（B）時(shí)間（C）料液比（D）16520301:627530201:838540401:103結(jié)果與分析3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定計(jì)算得線性回歸方程為 A=0.0007+0.0318C（A為530nm處吸光度，C為原花青素 質(zhì)量濃度，單位pg/mJ,相關(guān)系數(shù)R=0.9985）,見(jiàn)圖1。花白 囊樣品濃度 "/ml圖1花青素標(biāo)準(zhǔn)曲線3.2 水提法一單因素與正交試驗(yàn)結(jié)果3.2.1 料液比料液比（g/ml）實(shí)際上是固

13、體物料與溶劑用量的比值。一般來(lái)說(shuō)，料液比越 小，花青素的提取率越大。從圖2可看出，隨著料液比的降低，花青素的含量總 趨勢(shì)是增加的。當(dāng)料液比達(dá)到1: 10時(shí)，吸光值最大，說(shuō)明花青素的濃度達(dá)到最 大。當(dāng)繼續(xù)降低固液比時(shí)，提取量反而下降，分析原因可能是，當(dāng)固液比降低到 一定程度時(shí)，原料內(nèi)部與溶劑之間溶質(zhì)已經(jīng)達(dá)到平衡， 反而使雜質(zhì)溶解增加，相 應(yīng)減少花色昔的提取量?；ㄇ嗨氐臐舛茸冃。炊焕诨ㄇ嗨氐奶崛?。故初步確定料液比為1: 10時(shí)的提取效果最好。圖2水提法料液比對(duì)花青素提取率的影響3.2.2 提取溫度從圖3可以看出，隨著提取溫度的升高，花青素得率呈先上升后下降的趨勢(shì)。 隨著溫度升高溶，劑分子運(yùn)動(dòng)

14、速度加快，從而使其滲透、擴(kuò)散、溶解速度加快。 另一方面，高溫也使細(xì)胞膜流動(dòng)性增強(qiáng)，有利于花青素從細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移到提取溶劑 中。但是，溫度過(guò)高，黑米色素中的花色甘物質(zhì)耐熱性較差極易氧化口1,從而使花青素濃度下降?；ㄇ嗨赜行С煞值慕Y(jié)構(gòu)被破壞的程度越大，其色素的結(jié)構(gòu)發(fā) 生變化易褪色，從而對(duì)黑米色素的色價(jià)及穩(wěn)定性有一定影響，活性成分損失就越 多。并且高溫下固體原料本身會(huì)起化學(xué)變化， 使雜質(zhì)過(guò)多。高溫提取也會(huì)增加能 源消耗，故在高溫下提取不利于色素的純度和質(zhì)量。因此選擇50c時(shí)為最適宜的浸提溫度。故初步確定提取溫度為 50c時(shí)的提取效果最好。0.350.300.250.200.150.100.050.00圖

15、3水提法提取溫度對(duì)花青素提取率的影響3.2.3 提取時(shí)間從圖4可看出，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，花青素的得率先逐漸增加，當(dāng)提取時(shí) 間達(dá)120min時(shí)，花青素的溶解度達(dá)到最大，提取率最高。后隨著提取時(shí)間的進(jìn) 一步延長(zhǎng)，花青素變得不穩(wěn)定，顏色發(fā)生變化，使得吸光度先略有上升，然后逐 漸減小。故初步確定提取時(shí)間為120min時(shí)的提取效果最好。圖4水提法提取時(shí)間對(duì)花青素提取率的影響3.2.4 pH花青素在水溶液中以黃鹽陽(yáng)離子、釀型堿、假堿、查耳酮形式存在，這四種 形式隨水溶液的pH變化而發(fā)生可逆改變，同時(shí)，溶液的顏色也隨結(jié)構(gòu)改變而改 變。當(dāng)溶液的pH<2時(shí)，花青素以黃鹽陽(yáng)離子形式存在，溶液顯紅色。當(dāng) p

16、H逐 漸升高時(shí)，花青素失去C環(huán)氧上的陽(yáng)離子變成藍(lán)色釀型堿。釀型堿在酸性溶液 中與黃鹽陽(yáng)離子之間可逆轉(zhuǎn)化。隨著溶液 pH進(jìn)一步升高，釀型堿轉(zhuǎn)變?yōu)榧賶A， 此時(shí)花青素的溶液呈無(wú)色，假堿與查耳酮也可逆轉(zhuǎn)化 U2o文獻(xiàn)報(bào)道，酸化水溶液對(duì)黑米中的花色甘類(lèi)物質(zhì)也具有相當(dāng)好的萃取能力， 增加重結(jié)晶程序可以提高色素的純度13。從圖5可以看出，隨著提取液pH的增 大，花青素的得率先略有上升，而后逐漸減小，花青素得率反而有所下降，可能 是過(guò)高濃度的酸引起花青素糖甘鍵斷裂所致。 其主要是因?yàn)樗峥梢种品宇?lèi)物質(zhì)與 金屬離子的沉淀反應(yīng)，同時(shí)抑制酚羥基的自竭力，增強(qiáng)了溶劑破壞結(jié)合鍵的能力， 破壞酚類(lèi)物質(zhì)與蛋白質(zhì)、多糖、及自身

17、之間的氫鍵和疏水鍵作用， 從而提高原花 青素的溶出量。但過(guò)度酸化，會(huì)造成原花青素溶解性能減小，提取率反而下降。故初步確定提取液的最佳pH為3.2。0.60.1-0 11112.83.23.644.4PH圖5水提法pH對(duì)花青素提取率的影響3.2.5 正交試驗(yàn)結(jié)果表3水提法提取工藝的正交試驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)號(hào)吸光值A(chǔ)BCD111110.1953212220.3368313330.0869421230.2212522310.1811633120.223731320.1653832130.278933210.218K10.20630.19390.23210.1749K20.20840.26530.25630.

18、2417K30.2180.17350.14440.1953R0.01170.09180.11190.0668從表3可看出，4個(gè)因素對(duì)黑米花青素的提取率的影響大小依次為C> B>D>A,即pH >提取溫度提取時(shí)間料液比，其中pH對(duì)提取率的影響顯著； 4因素的最優(yōu)組合為A3B2c2D2,即當(dāng)料液比為1: 12,提取溫度50C, pH為3.2, 提取時(shí)間為120min時(shí)，花青素提取效果最好。經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)，該條件下的提取液 吸光值與料液比為1: 8,而其他條件一致下的提取液的吸光值相差不大。因此， 從節(jié)省成本的角度考慮，試驗(yàn)最終確定黑米花青素的最佳提取工藝為料液比1:8,提取溫度

19、50C, pH3.2,提取時(shí)間120min。正交試驗(yàn)花青素吸光值在0.086A0.3368之間，其中提取率最高的是2號(hào)實(shí) 驗(yàn)，其吸光值為0.3368。在A3B2c2D2工藝條件下進(jìn)行花青素提取實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，黑米花青素的吸光值為0.3640,可見(jiàn)，黑米花青素提取率有略微提高。與2號(hào)正 交試驗(yàn)（A1B2C2D2）相比，吸光值提高主要原因是料液比曾大，從而增大了花 青素的溶解量，致使細(xì)胞內(nèi)花青素迅速并完全釋放出來(lái)。因此，取A3B2c2D2為提取黑米花青素最佳工藝條件。3.3 酸化乙醇法一單因素與正交試驗(yàn)結(jié)果3.3.1 提取劑的濃度從圖6可知，隨乙醇濃度的升高，花青素的提取量也逐漸增加，但當(dāng)乙醇濃 度達(dá)

20、75%后，隨乙醇濃度的升高花青素的提取量逐漸減少，這可能是因?yàn)橐掖俭w積分?jǐn)?shù)繼續(xù)增加時(shí)，一些醇溶性雜質(zhì)、親脂性強(qiáng)的成分溶出量增加，這些成分與 花青素競(jìng)爭(zhēng)與乙醇-水分子結(jié)合，從而導(dǎo)致原花青素的提取效果下降。其次因?yàn)?水起著穿透植物細(xì)胞的作用，沒(méi)有水存在就無(wú)法將有效成分溶出，但另一方面， 自由水的大量存在必然會(huì)使水溶性雜質(zhì)增多 14故應(yīng)選擇75%的乙醇溶液作為 花青素的提取劑。乙醇濃度圖6酸法提取提取液濃度對(duì)花青素提取量的影響3.3.2 提取時(shí)間從圖7可知，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，提取率不斷提高，30min提取率最高，然后提取率平穩(wěn)下降。當(dāng)20- 30mim時(shí)，浸提時(shí)間越長(zhǎng)，黑米花青素的吸光值 越大，此

21、時(shí)，黑米粉細(xì)胞內(nèi)外有效成分濃度達(dá)到平衡，提取效果最好。隨著時(shí)間 的進(jìn)一步延長(zhǎng)，濃度反而逐步下降。分析原因可知，這是因?yàn)槿艹龅幕ㄇ嗨夭环€(wěn) 定，浸提時(shí)間太長(zhǎng)而使體系溫度過(guò)高從而造成了色素的破壞，部分被氧化分解破壞掉了，并增加了生產(chǎn)成本。但是，短時(shí)提取無(wú)法使原花青素很快從果皮肉細(xì)胞 中溶出，故選擇30mim為最佳浸提時(shí)間。203060800.4 0.3950.390.3850.380.3750.370.3650.360.35540時(shí)間(min)酸法提取時(shí)間對(duì)花青素提取量的影響3.3.3 提取溫度從圖8可以看出，30C提取率最高，隨著溫度的升高，提取率有所下降。30C 提取效果最佳。在一定階段內(nèi)，隨著

22、溫度的升高提取效果也在不斷變優(yōu)異， 這是 因?yàn)闇囟壬?，使植物組織軟化、膨脹，從而增加可溶性物質(zhì)的溶解度和擴(kuò)散速 度，利于有效成分浸出。但如果繼續(xù)升溫，提取效果反而降低。因?yàn)殡m然升溫有 利于色素的溶出，但花青素的穩(wěn)定性較差，溫度升高，花青素會(huì)發(fā)生氧化、聚合, 導(dǎo)致提取率下降，使熱不穩(wěn)定成分或揮發(fā)性成分分解、 變質(zhì)或揮發(fā)，特別是接近 乙醇的沸點(diǎn)(78.5C)時(shí)，乙醇易揮發(fā)。溫度低時(shí)，花青素與蛋白質(zhì)、纖維等分離 較慢，也會(huì)導(dǎo)致提取率下降。故選擇 30c為最佳浸提溫度。圖8酸法提取溫度對(duì)花青素提取量的影響3.3.4 提取料液比從圖9可知，隨著料液比的增大，吸光度在提高。這表明，提取溶劑量大時(shí)， 細(xì)胞

23、膜在短時(shí)間內(nèi)急劇膨脹破裂，花青素被迅速萃取進(jìn)入溶劑。而料液比較小時(shí)， 一方面無(wú)法使原料達(dá)到有效浸泡；另一方面溶劑中的花青素也極易達(dá)到飽和， 從而抑制其進(jìn)一步溶出。當(dāng)料液比為1:10時(shí)，提取液中花青素吸光值達(dá)到最大，花青素幾乎被最大限度提取出來(lái)了。但料液比到達(dá)1: 10時(shí)與1: 8時(shí)的提取率沒(méi)有顯著差異。綜合考慮成本及后續(xù)濃縮處理，該試驗(yàn)選擇了1: 8的料液比。繼續(xù)增大料液比，提取率增加不大，同時(shí)還會(huì)增加成本，也使提取液的濃縮工作 負(fù)荷增加。0.390.380.370.360.350.340.33料液比（WN）圖9酸法提取料液比對(duì)花青素提取量的影響3.3.5 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表4酸法提取工藝的正交試

24、驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)號(hào)吸光值A(chǔ)BCD111110.3821212220.3912313330.3753421320.3942522230.3956633110.3883731230.3813832310.3942933120.385K10.38290.38590.38760.3882K20.39270.39370.38690.3901K30.38680.38290.38750.3841R0.00980.01080.00070.006通過(guò)正交試驗(yàn)，結(jié)果表明（表4）,影響黑米花色素提取率的因素主次順序?yàn)? B>A>D>C,即提取溫度對(duì)黑米花色素甘提取效果影響最大，其次為乙醇濃度 和料液比，

25、提取時(shí)間影響較小。即酸化乙醇法提取黑米花青素的最優(yōu)組合為A2B2C1D2,即最佳提取條件：乙醇濃度為75%,浸提溫度為30oC,料液比為1: 8,浸提時(shí)間為30min。正交試驗(yàn)花青素吸光值在0.3753 0.3956之間，其中提取率最高的是5號(hào)實(shí) 驗(yàn),其吸光值為0.3956。在A2B2C1D2工藝條件下進(jìn)行花青素提取實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)， 黑米花青素的吸光值為0.4267,可見(jiàn)，黑米花青素提取率有略微提高。與5號(hào)正 交試驗(yàn)（A2B2c2D3）相比，吸光值提高主要原因是提取時(shí)間加長(zhǎng)，料液比減小， 從而使黑米花青素盡可能釋放出來(lái)。因此，取A2B2C1D2為提取黑米花青素最佳工藝條件。3.4 黑米花青素粗提取

26、得率計(jì)算根據(jù)花青素標(biāo)準(zhǔn)曲線彳#線性回歸方程為A=0.0007+0.0318C3.4.1 水提法準(zhǔn)確稱(chēng)取黑米粉5.00g,將黑米粉攪拌均勻，按料液比為1:8,提取溫度為 50oC, pH為3.2,浸提120min后過(guò)濾，所得濾液定容之至500ml,在530nm處測(cè) 吸光值為：0.3640。后將濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，后冷凍干燥，得花青素粗提取 物 1.21g?；ㄇ嗨氐寐实挠?jì)算：線性回歸方程為A=0.0007+0.0318C即 0.3640=0.0007+0.0318C故得 C=11.423.4.2 酸化乙醇提取方法準(zhǔn)確稱(chēng)取黑米粉1.00g,將黑米粉攪拌均勻，按料液比為 1: 8加入75%的 酸化乙

27、醇，提取溫度為30oC,浸提30min后將提取液離心，去上清液1ml定容 至10ml,在530nm處混勻測(cè)吸光值為：0.3961?；ㄇ嗨氐寐实挠?jì)算：線性回歸方程為A=0.0007+0.0318C即 0.4267=0.0007+0.0318C 故得 C=13.404結(jié)論與討論本課題采用了溶劑浸提法浸提黑米中的花青素，即水提法和酸化乙醇浸提法。水提法和酸性乙醇浸提法均是提取色素最常用的一種方法，其方便、快捷、 簡(jiǎn)單。利用水提法提取黑米花青素的實(shí)驗(yàn)中，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用 張文佳 等的實(shí)驗(yàn)確定了影響原花青素得率較顯著因子，即料液比、提取溫度，提取時(shí)間 和pH值。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定最優(yōu)工藝，即最終

28、確定黑米花青素的最佳提取工藝 為料液比1: 8,提取溫度50C, pH3.2,提取時(shí)間120min。此條件下測(cè)得的花 青素的吸光值為0.3540,根據(jù)回歸方程得黑米花青素的粗提取率為11.42。利用酸化乙醇浸提法提取黑米花青素的實(shí)驗(yàn)中，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用趙權(quán)等的實(shí)驗(yàn) 確定了影響原花青素得率較顯著因子，即料液比、提取溫度，提 取時(shí)間和乙醇濃度。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定最優(yōu)工藝，即最佳提取條件：乙醇濃度為 75%,浸提溫度為30oC,料液比為1: 8,浸提時(shí)間為30min。此條件下測(cè)得的 花青素的吸光值為0.4267,根據(jù)回歸方程得黑米花青素的粗提取率為13.40。綜上所述，黑米花色甘作為一種天然

29、食用色素，安全無(wú)毒、色彩鮮艷且資源豐富，同時(shí)具有廣泛的疾病預(yù)防和健康促進(jìn)作用，在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域具有較大的應(yīng)用潛力。目前對(duì)黑米花青素的研究仍然處于起步階段，黑米花青素的浸提工藝還未完善口”。而本研究采用了綠色、低碳的分離純化工藝，所制得的黑米花青 素粗提取物，為黑米的加工及花青素的規(guī)?；a(chǎn)提供了依據(jù)。今后的研究方向因從黑米花青素的浸提工藝的研究入手，為開(kāi)發(fā)利用豐富的黑米資源，增加經(jīng)濟(jì) 附加值，尋找天然食品著色劑提供依據(jù)。5主要參考文獻(xiàn)1董愛(ài)文，張敏，趙虹橋，等爵床色素浸提及穩(wěn)定性研究J.食品科技，2004,8:44-472吳素萍.黑米色素的提取及穩(wěn)定性研究J.中國(guó)調(diào)味品，2011,12:106-110.3郭紅輝，凌文華.黑米花色昔研究進(jìn)展J.食品研究與開(kāi)發(fā)，2008,03:133-136.4 Kong J M,Chia LS,Goh NK,et al.Analysis and biological activities Of anthocyanins J. Phytochemistry,2003,64:923- 9335 LEE J,WROLSTAD R E.Extraction of anthocyanin and polyphenolics from blu