工藝驗證方案 原核下游

1、編號SOP No.：*-*-*-*工藝驗證方案Process validation program生效日期Effective date：版本號Version：*第 19 頁/共 20頁(Page) 部門Dept.：原核/生產(chǎn)部復審日期Revision date：起草/日期Prepared by/Date：部門審核/日期Reviewed by/Date：QA審核/日期Reviewed by QA/Date：批準/日期Approved by/Date：分發(fā)部門Distribution：質(zhì)量保證部、USP/生產(chǎn)部、DSP/生產(chǎn)部、制劑/生產(chǎn)部、設備工程部、原核/生產(chǎn)部本SOP This SOP： 中

2、英文Chinese and English 中文Chinese 文件修訂歷史Document History版 本Version主要修訂內(nèi)容Changes生效日期Effective Date01新版本目錄一、目的：3二、范圍：3三、責任：3四、方案培訓：3五、工藝描述：3六、風險評估：4七、驗證內(nèi)容：7八、偏差報告和偏差清單：19九、變更控制：20十、結(jié)論：20十一、縮寫與定義：20十二、參考文獻：20十三、附件：20一、目的：1、通過工藝的風險評估，識別和評價生產(chǎn)工藝中關(guān)鍵工藝屬性及關(guān)鍵工藝參數(shù)；2、通過一系列的工藝驗證和取樣檢測，驗證現(xiàn)行的工藝可以確保最終產(chǎn)品質(zhì)量的風險得到有效的控制，保證

3、最終的產(chǎn)品質(zhì)量，從而降低藥品的質(zhì)量風險。二、范圍：適用于重組人白細胞介素-1受體拮抗劑原核下游的工藝驗證三、責任：部門職責原核/生產(chǎn)部組織并執(zhí)行本部門的生產(chǎn)工藝風險評估；負責生產(chǎn)工藝驗證的方案的起草；根據(jù)已經(jīng)批準的方案執(zhí)行所有測試，收集和分析驗證數(shù)據(jù)和測試結(jié)果，并形成報告；移交相關(guān)原始記錄。質(zhì)量控制部參與生產(chǎn)工藝的風險評估；參與評估工藝驗證中取樣點的設置；配合驗證的實施；根據(jù)已經(jīng)批準的分析方法進行檢驗，報告并匯總檢驗結(jié)果；審核工藝驗證的方案和報告設備工程部參與生產(chǎn)工藝的風險評估；保障工藝驗證過程中的公用工程的供應及設備的維修、保養(yǎng)工作；根據(jù)已經(jīng)批準的方案執(zhí)行相關(guān)公用工程方面的測試，收集相關(guān)數(shù)據(jù)

4、，并報告測試結(jié)果；審核工藝驗證的方案和報告。質(zhì)量保證部審核確認工藝驗證的方案及報告；協(xié)調(diào)和組織與驗證相關(guān)的工作；負責驗證文件的歸檔。生產(chǎn)管理負責人負責方案和報告的批準質(zhì)量管理負責人負責方案和報告的批準四、方案培訓：驗證開始前，由起草人按照“生產(chǎn)與質(zhì)量人員技術(shù)與法規(guī)培訓管理”（ORG-QA-TM-001），對相關(guān)人員進行方案培訓，并將培訓記錄納入驗證報告的附件。五、工藝描述：5.1工藝概述：承接上游碎菌液，經(jīng)過濾、陽離子交換層析、兩步陰離子交換層析超濾濃縮、緩沖液置換、除菌過濾等步驟，得到重組人白細胞介素-1受體拮抗劑原液。5.2 工藝流程圖六、風險評估：6.1評估方法：把工藝流程中對原液質(zhì)量標

5、準有風險的點定為關(guān)鍵點，并結(jié)合風險的嚴重性和可能性得出一個風險的程度等級，篩選質(zhì)量影響程度高的進行質(zhì)量風險評價。在風險等級劃分中，采用定性描述： “窄”（對產(chǎn)品質(zhì)量有直接影響）和 “寬”（對產(chǎn)品質(zhì)量影響較?。?。6.2工藝流程關(guān)鍵點的風險評估表MMC罐配液CQACPP控制范圍pH攪拌轉(zhuǎn)速寬電導率率攪拌時間寬溫度寬投料量窄加料順序?qū)扖IP清洗效果寬MMC桶配液pH溫度寬電導率率投料量窄加料順序?qū)捦扒逑葱Ч麑扢MC層析純度濁度窄得率流速窄柱壓窄消毒寬再生寬環(huán)境溫濕度寬介質(zhì)壽命寬柱床體積寬紫外檢測收峰窄緩沖液pH窄緩沖液電導率率窄介質(zhì)保存寬DEAE罐配液內(nèi)毒攪拌轉(zhuǎn)速寬pH攪拌時間寬電導率率溫度寬投料量

6、窄加料順序?qū)扖IP清洗效果窄DEAE桶配液pH溫度寬電導率率投料量窄加料順序?qū)捦扒逑葱Ч璂EAE層析純度流速寬得率柱壓窄內(nèi)毒消毒寬再生寬環(huán)境溫濕度寬介質(zhì)壽命寬柱床體積寬紫外檢測收峰窄緩沖液pH窄緩沖液電導率率窄介質(zhì)保存寬DEAE罐配液內(nèi)毒攪拌轉(zhuǎn)速寬pH攪拌時間寬電導率率溫度寬投料量窄加料順序?qū)扖IP清洗效果窄DEAE桶配液內(nèi)毒溫度寬pH投料量窄電導率率加料順序?qū)捦扒逑葱Ч璂EAE層析純度流速寬得率柱壓寬內(nèi)毒消毒寬再生寬環(huán)境溫濕度寬介質(zhì)壽命寬柱床體積寬紫外檢測收峰窄緩沖液pH窄緩沖液電導率率窄介質(zhì)保存寬超濾配液內(nèi)毒溫度寬pH投料量窄電導率率加料順序?qū)捛逑葱Ч?0K超濾純度泵速寬得率壓力寬內(nèi)

7、毒溫度窄置換體積窄CIP效果窄3K超濾純度泵速寬得率壓力寬內(nèi)毒溫度窄置換體積窄CIP效果窄除菌過濾原液質(zhì)量標準全項泵速寬COP效果窄過濾器完整性窄過濾環(huán)境窄過濾時間寬七、驗證內(nèi)容：1 陽離子交換層析1.1 步驟1.1.1 樣品處理：向 “澄清過濾后碎菌液(確認濁度小于1000NTU)”中緩緩加入6mol/L鹽酸或0.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為6.87.2。緩緩加入2mol/L氯化鈉或注射用水，至最終電導率值為10.513.5ms/cm；1.1.2 柱平衡：用平衡液平衡層析柱至流出液紫外基線走平，流速為70300L/h，壓力不高于2bar。1.1.3 上樣：過柱上樣，流速為42300L/

8、h，壓力低于2bar。1.1.4 上樣后平衡：用平衡液沖洗層析柱至流出液紫外回基線，流速為70300L/h，壓力不高于2bar。1.1.5 柱洗滌：柱平衡完后用洗滌液沖洗層析柱不少于2個柱體積，流速為70300L/h，壓力不高于2bar。1.1.6 柱洗脫：柱洗滌完成后用洗脫液過柱洗脫。流速為70350L/h，壓力低于2bar。收集l280nm處有紫外吸收的流出峰，即為“重組人白細胞介素-1受體拮抗劑 Capto-MMC主峰”(主峰收集在收集液中)。1.1.7 柱再生：用不少于2個柱體積再生液（2mol/LNaCl）過柱, 反壓控制在2bar以下。再生后用不少于2個柱體積注射用水過柱，反壓控制

9、在2bar以下。1.1.8 柱消毒：用不少于2個柱體積0.5mol/L NaOH消毒液過柱，反壓控制在2bar以下，并靜置不少于0.5小時。消毒后不少于2個柱體積注射用水過柱，反壓控制在2bar以下。1.1.9 柱保存：用不少于2個柱體積0.1mol/L NaOH保存液過柱 ，反壓控制在2bar以下。 1.2 操作1.2.1 緩沖液配制1.2.1.1 平衡液配制1.2.1.1.1 物料配方： 20 mmol/L PB+0.1mol/L 氯化鈉+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，pH 6.87.2，電導率值為10.513.5ms/cm； 1.2.1.1.2主要設備：配液罐、實驗室pH計、

10、實驗室電導率率儀、桶。1.2.1.1.3取樣檢測：平衡液配制完成后取樣檢測風險評估中控制范圍窄的pH，電導率；接受標準：pH 6.87.2，電導率值為10.513.5ms/cm。1.2.1.2 洗滌液配制1.2.1.2.1物料配方：10 mmol/L PB+0.1mol/L 氯化鈉+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，pH7.37.6，電導率11.513.5ms/cm； 1.2.1.2.2主要設備：桶、實驗室pH計、實驗室電導率率儀。1.2.1.2.3 取樣檢測：洗滌液配制完成后取樣檢測風險評估中控制范圍窄的pH，電導率；接受標準： pH7.37.6，電導率11.513.5ms/cm。1

11、.2.1.3 洗脫液配制1.2.1.3.1 物料配方：20mmol/LTris+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物， pH 8.5-9.2，電導率600800us/cm； 1.2.1.3.2主要設備：桶、實驗室pH計、實驗室電導率率儀。1.2.1.3.3取樣檢測：洗脫液配制完成后取樣檢測風險評估中控制范圍窄的pH，電導率；接受標準：pH 8.5-9.2，電導率600800us/cm。1.2.1.4收集液配制1.2.1.4.1 物料配方：50mmol/LTris+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，pH6.1-6.6，電導為4.0-6.0ms/cm； 1.2.1.4.2主要設備：桶、

12、實驗室pH計、實驗室電導率率儀。1.2.1.4.3取樣檢測：洗脫液配制完成后取樣檢測風險評估中控制范圍窄的pH，電導率；pH6.1-6.6，電導為4.0-6.0ms/cm。1.2.1.5 再生液配制再生液配方：2mol/L NaCl 1.2.1.6 消毒液配制消毒液配方：0.5 mol/L NaOH1.2.1.7 保存液配制保存液配方：0.1 mol/L NaOH1.2.2 層析柱操作1.2.2.1樣品處理1.2.2.1.1過程：向 “澄清過濾后碎菌液(確認濁度小于1000NTU)”中緩緩加入6mol/L鹽酸或0.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為6.87.2。緩緩加入2mol/L氯化鈉或注射

13、用水，至最終電導率值為10.513.5ms/cm；1.2.2.1.2主要設備：實驗室pH計、實驗室電導率率儀。1.2.2.2柱平衡1.2.2.2.1過程：平衡液配方： 20 mmol/L PB+0.1mol/L 氯化鈉+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，pH 6.87.2，電導率值為10.513.5ms/cm；用不少于3個柱體積的平衡液平衡層析柱至流出液紫外基線走平，流速為70300L/h，壓力不高于2bar；1.2.2.2.2主要設備：Capto-MMC手動層析系統(tǒng)，Capto-MMC離子交換層析柱。1.2.2.3上樣1.2.2.3.1過程：將調(diào)節(jié)好的碎菌液過柱上樣，流速為42300

14、L/h，壓力低于2bar；1.2.2.3.2主要設備：Capto-MMC手動層析系統(tǒng)，Capto-MMC離子交換層析柱。1.2.2.4上樣后平衡1.2.2.4.1過程：平衡液配方： 20 mmol/L PB+0.1mol/L 氯化鈉+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，pH 6.87.2，電導率值為10.513.5ms/cm；上樣結(jié)束后用不少于7個柱體積的MMC平衡液沖洗層析柱至流出液紫外回基線，流速為70300L/h，壓力不高于2bar。1.2.2.4.2主要設備：Capto-MMC手動層析系統(tǒng)，Capto-MMC離子交換層析柱。1.2.2.5柱洗滌1.2.2.5.1過程：洗滌液配方：

15、10 mmol/L PB+0.1mol/L 氯化鈉+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，pH7.37.6，電導率11.513.5ms/cm；后平衡結(jié)束后沖洗層析柱不少于3個柱體積，流速為70300L/h，壓力不高于2bar。1.2.2.5.2主要設備：Capto-MMC手動層析系統(tǒng)，Capto-MMC離子交換層析柱。1.2.2.6柱洗脫1.2.2.6.1過程：洗脫液配方：20mmol/LTris+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物， pH 8.5-9.2，電導率600800us/cm；柱洗滌過后進行柱洗脫。流速為70350L/h，壓力低于2bar。用裝有5L MMC收集液的50L桶

16、收集波長280nm處紫外吸收峰，當紫外吸收值上升為1.50AU時開始收集，當紫外吸收值降至1.00AU時停止收集，所收集的溶液即為MMC主峰（收集液配方：50mmol/LTris+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，pH6.1-6.6電導為4.0-6.0ms/cm）；1.2.2.6.2主要設備：桶、Capto-MMC手動層析系統(tǒng)、Capto-MMC離子交換層析柱。1.2.2.6.3取樣檢測：主峰收集完成后取10-15ml含目標蛋白的收集液，檢測風險評估中控制范圍窄的：A電泳（15%非還原）、B蛋白濃度、C R-HPLC純度；可接受標準：A主帶與目標條帶位置一致B實測值C純度峰：實測（主峰

17、后雜峰不積分）1.2.2.7柱再生：用不少于2個柱體積再生液（2mol/LNaCl）過柱， 反壓控制在2bar以下。再生后用不少于2個柱體積注射用水過柱，反壓控制在2bar以下。1.2.2.8柱消毒：用不少于2個柱體積0.5mol/L NaOH消毒液過柱，反壓控制在2bar以下，并靜置不少于0.5小時。消毒后不少于2個柱體積注射用水過柱，反壓控制在2bar以下。1.2.2.9柱保存：用不少于2個柱體積0.1mol/L NaOH保存液過柱 ，反壓控制在2bar以下。 2 Capto DEAE陰離子交換層析2.1 步驟2.1.1 樣品處理：向“Capto-MMC”洗脫主峰中緩緩加入6 mol/L鹽

18、酸或0.5 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.78.1，用2mol/L NaCl或注射用水調(diào)電導率至4.8-5.4ms/cm2.1.2 柱平衡：用平衡液平衡層析柱至流出液紫外基線走平，流速為70300L/h，壓力不高于2bar。2.1.3 上樣：過柱上樣，流速為70300L/h，壓力不高于2bar。2.1.4 上樣后平衡：用平衡液沖洗層析柱至流出液紫外回基線，流速為70300L/h，壓力不高于2bar。2.1.5 柱洗脫：上樣后平衡完成后用洗脫液過柱洗脫。流速為70300L/h，壓力低于2bar。收集l280nm處有紫外吸收的流出峰，即為“重組人白細胞介素-1受體拮抗劑Capto-DEAE主

19、峰”。 2.1.6 柱再生：用不少于3個柱體積2mol/LNaCl再生液過柱, 反壓控制在2bar以下。再生后用不少于2個柱體積注射用水過柱，反壓控制在2bar以下。2.1.7 柱消毒：用不少于2個柱體積0.5mol/L NaOH消毒液過柱，反壓控制在2bar以下，并靜置不少于0.5小時。消毒后不少于2個柱體積注射用水過柱，反壓控制在2bar以下。2.1.8 柱保存：用不少于2個柱體積0.1mol/L NaOH保存液過柱 ，反壓控制在2bar以下。 2.2 操作2.2.1 緩沖液配制2.2.1.1 平衡液配制2.2.1.1.1 物料配方： 20mmol/L Tris+35mmol/L氯化鈉+1

20、mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，電導率值為4.85.4ms/cm, pH 7.7 8.1； 2.2.1.1.2主要設備：配液罐、精過濾濾器、實驗室pH計、實驗室電導率率儀、桶。2.2.1.1.3取樣檢測：平衡液配制完成后取樣檢測風險評估中控制范圍窄的pH，電導率；接受標準：pH 6.87.2，電導率率值為10.513.5ms/cm，內(nèi)毒<0.5 Eu/ml。2.2.1.2 洗脫液配制2.2.1.2.1 物料配方：20mmol/L Tris+70mmol/L氯化鈉+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，電導率值為8.28.6ms/cm, pH7.8 8.2； 2.2.1.2.2

21、主要設備：桶、實驗室pH計、實驗室電導率率儀。2.2.1.2.3取樣檢測：洗脫液配制完成后取樣檢測風險評估中控制范圍窄的pH，電導率；接受標準：pH7.8 8.2，電導率值為8.28.6ms/cm。2.2.1.3 再生液配制再生液配方：2mol/L NaCl 2.2.1.4 消毒液配制消毒液配方：0.5 mol/L NaOH2.2.1.5 保存液配制保存液配方：0.1 mol/L NaOH2.2.2 層析柱操作2.2.2.1樣品處理2.2.2.1.1過程：向“Capto-MMC”洗脫主峰中緩緩加入6 mol/L鹽酸或0.5 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.78.1，用2mol/L NaCl

22、或注射用水調(diào)電導率至4.8-5.4ms/cm；2.2.2.1.2主要設備：實驗室pH計、實驗室電導率率儀。2.2.2.2柱平衡2.2.2.2.1過程：平衡液配方：20mmol/L Tris+35mmol/L氯化鈉+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，電導率率值為4.85.4ms/cm, pH 7.7 8.1；用不少于5個柱體積的平衡液平衡層析柱至流出液紫外基線走平，流速為70300L/h，壓力不高于2bar；2.2.2.2.2主要設備：Capto-DEAE手動層析系統(tǒng)，Capto-DEAE離子交換層析柱。2.2.2.3上樣2.2.2.3.1過程：將調(diào)節(jié)好的“Capto-MMC”洗脫主峰過

23、柱上樣，流速為70300L/h，壓力不高于2bar ；2.2.2.3.2主要設備：Capto-DEAE手動層析系統(tǒng)，Capto-DEAE離子交換層析柱。2.2.2.4上樣后平衡2.2.2.4.1過程：平衡液配方：20mmol/L Tris+35mmol/L氯化鈉+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，電導率值為4.85.4ms/cm, pH 7.7 8.1；用不少于5個柱體積的平衡液平衡層析柱至流出液紫外基線走平，流速為70300L/h，壓力不高于2bar；2.2.2.4.2主要設備：Capto-DEAE手動層析系統(tǒng)，Capto-DEAE離子交換層析柱。2.2.2.5柱洗脫2.2.2.5.

24、1過程：洗脫液配方：20mmol/L Tris+70mmol/L氯化鈉+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，電導率值為8.28.6ms/cm, pH7.8 8.2；柱洗滌過后進行柱洗脫。過柱洗脫，流速為70300L/h，壓力不高于2bar。用50L桶收集波長為280nm處紫外吸收峰,當紫外吸收值上升為0.07AU時開始收集，當紫外吸收值降至0.05AU時停止收集，所收集的溶液即為DEAE主峰；2.2.2.5.2主要設備：桶、Capto-DEAE手動層析系統(tǒng)、Capto-DEAE離子交換層析柱。2.2.2.5.3取樣檢測：主峰收集完成后取10-15ml含目標蛋白的收集液，檢測風險評估中控制

25、范圍窄的：A電泳（15%非還原）、B蛋白濃度、C R-HPLC純度、D內(nèi)毒；可接受標準：A主帶與目標條帶位置一致B實測值C純度峰：實測（主峰后雜峰不積分）；內(nèi)毒<0.5 Eu/ml2.2.2.6柱再生：用不少于3個柱體積2mol/LNaCl再生液過柱, 反壓控制在2bar以下。再生后用不少于2個柱體積注射用水過柱，反壓控制在2bar以下。2.2.2.7柱消毒：用不少于2個柱體積0.5mol/L NaOH消毒液過柱，反壓控制在2bar以下，并靜置不少于0.5小時。消毒后不少于2個柱體積注射用水過柱，反壓控制在2bar以下。2.2.2.8柱保存：用不少于2個柱體積0.1mol/L NaOH保

26、存液過柱 ，反壓控制在2bar以下。 3.Capto DEAE陰離子交換層析3.1 步驟3.1.1樣品處理：向“Capto-DEAE主峰”中緩緩加入注射用水，最終電導值為4.55.4ms/cm；緩緩加入6mol/L鹽酸或0.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為7.78.1。3.1.2柱平衡：以平衡液平衡層析柱，至柱平衡前后電導一致。流速為100300L/h，壓力不高于3 bar。3.1.3上樣：處理后樣品上樣。流速為100300L/h，壓力不高于3bar。3.1.4柱洗滌：洗滌液沖洗層析柱不少于3個柱體積，流速為100300L/h，壓力不高于3bar。3.1.5柱洗脫：洗脫液過柱洗脫，流速為10

27、0300L/h，壓力不高于3bar。收集l280nm處有紫外吸收的流出峰，即為“重組人白細胞介素-1受體拮抗劑Capto-DEAE主峰”。若主峰過夜需加入乙二胺四乙酸二鈉鹽二水合物的量為0.2g/L，28保存（時間不超過48小時）。3.1.6 柱再生：用不少于2個柱體積2mol/LNaCl再生液過柱, 反壓控制在3bar以下。再生后用不少于2個柱體積注射用水過柱，反壓控制在3bar以下。3.1.7 柱消毒：用不少于2個柱體積0.5mol/L NaOH消毒液過柱，反壓控制在3bar以下，并靜置不少于0.5小時。消毒后不少于2個柱體積注射用水過柱，反壓控制在3bar以下。3.1.8 保存：用不少于

28、2個柱體積0.1mol/L NaOH保存液過柱 ，反壓控制在3bar以下。3.2 操作3.2.1 緩沖液配制3.2.1.1 平衡液配制3.2.1.1.1 物料配方：20mmol/L Tris+35mmol/L氯化鈉+1mmol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，pH 7.7 8.1，電導值為4.85.4ms/cm。 3.2.1.1.2主要設備：配液罐、實驗室pH計、實驗室電導率儀、精過濾濾器、桶。3.2.1.1.3取樣檢測：平衡液配制完成后取樣檢測風險評估中控制范圍窄的pH，電導；接受標準：pH 7.7 8.1，電導值為4.85.4ms/cm，內(nèi)毒0.5 Eu/ml。3.2.1.2 洗滌液配制3.

29、2.1.2.1 物料配方：檸檬酸三鈉二水合物，pH 8.4 8.6。 3.2.1.2.2主要設備：實驗室pH計、實驗室電導率儀、桶。3.2.1.2.3取樣檢測：平衡液配制完成后取樣檢測風險評估中控制范圍窄的pH，電導；接受標準：pH 8.4 8.6，內(nèi)毒0.5 Eu/ml。3.2.1.3 洗脫液配制3.2.1.3.1 物料配方：檸檬酸三鈉二水合物+140mmol/L氯化鈉，pH 8.0 8.3。 3.2.1.3.2主要設備：實驗室pH計、實驗室電導率儀、桶。3.2.1.3.3取樣檢測：平衡液配制完成后取樣檢測風險評估中控制范圍窄的pH，電導；接受標準：pH 8.0 8.3，內(nèi)毒0.5 Eu/m

30、l。3.2.1.4 再生液配制再生液配方：2mol/L NaCl 3.2.1.5 消毒液配制消毒液配方：0.5 mol/L NaOH3.2.1.6 保存液配制保存液配方：0.1 mol/L NaOH3.2.2 層析柱操作3.2.2.1樣品處理3.2.2.1.1過程：向“Capto-DEAE主峰”中緩緩加入注射用水，最終電導值為4.55.4ms/cm；緩緩加入6mol/L鹽酸或0.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為7.78.1。3.2.2.1.2主要設備：實驗室pH計、實驗室電導率儀。3.2.2.2柱平衡3.2.2.2.1過程：平衡液配方：20mmol/L Tris+35mmol/L氯化鈉+1m

31、mol/L乙二胺四乙酸四鈉鹽四水合物，pH 7.7 8.1，電導值為4.85.4ms/cm，平衡層析柱，至柱平衡前后電導一致。流速為100300L/h，壓力不高于3 bar。3.2.2.2.2主要設備：Capto-DEAE自動層析系統(tǒng)，Capto- DEAE離子交換層析柱。3.2.2.3 上樣3.2.2.3.1過程：調(diào)節(jié)后樣品上樣。流速為100300L/h，壓力不高于3bar。3.2.2.3.2主要設備：Capto-DEAE自動層析系統(tǒng)，Capto- DEAE離子交換層析柱。3.2.2.4柱洗滌3.2.2.4.1過程：洗滌液配方：（檸檬酸三鈉二水合物溶液）pH 8.4 8.6，沖洗層析柱不少于

32、3個柱體積，流速為100300L/h，壓力不高于3bar。3.2.2.4.2主要設備：Capto-DEAE自動層析系統(tǒng)，Capto- DEAE離子交換層析柱。3.2.2.5柱洗脫3.2.2.5.1過程：洗脫液配方：（檸檬酸三鈉二水合物溶液+140mmol/L氯化鈉），pH 8.0 8.3，過柱洗脫，流速為100300L/h，壓力不高于3bar。用經(jīng)濕熱滅菌20L桶收集l280nm處有紫外吸收的流出峰。當Capto-DEAE自動層析系統(tǒng)紫外吸收值上升為1.00AU時開始收集，當紫外吸收值降至0.50AU時停止收集，所收集的溶液即為DEAE主峰。若主峰過夜需加入乙二胺四乙酸二鈉鹽二水合物的量為0.

33、2g/L，28保存（時間不超過48小時）。3.2.2.5.2主要設備：Capto-DEAE自動層析系統(tǒng)，Capto- DEAE離子交換層析柱，桶。3.2.2.5.3取樣檢測：主峰收集完成后取10-15ml含目標蛋白的收集液，檢測風險評估中控制范圍窄的：A電泳（15%非還原）、B蛋白濃度、C R-HPLC純度、D內(nèi)毒；可接受標準：A主帶與目標條帶位置一致B實測值C純度峰：實測（主峰后雜峰不積分）D<1Eu/ml3.2.2.6柱再生：用不少于2個柱體積2mol/LNaCl再生液過柱, 反壓控制在2bar以下。再生后用不少于2個柱體積注射用水過柱，反壓控制在2bar以下。3.2.2.7柱消毒：

34、用不少于2個柱體積0.5mol/L NaOH消毒液過柱，反壓控制在2bar以下，并靜置不少于0.5小時。消毒后不少于2個柱體積注射用水過柱，反壓控制在2bar以下。3.2.2.8柱保存：用不少于2個柱體積0.1mol/L NaOH保存液過柱 ，反壓控制在2bar以下。4超濾濃縮4.1步驟4.1.1 30K膜包超濾取濾出將Capto-DEAE主峰經(jīng)30K膜包超濾取濾出。并用置換液潤洗置換6次。4.1.2 3K超濾濃縮4.1.2.1將30K濾出液經(jīng)3K超濾濃縮，并用置換緩沖液進行置換8次。將濃縮液濃縮至0.5L時，將濃縮液倒入2L試劑瓶內(nèi) 。4.1.2.2用超濾置換緩沖液將殘留在3K超濾膜包系統(tǒng)內(nèi)

35、的濃縮液頂至2L試劑瓶內(nèi)，濃縮液的濃度控制在不低于120mg/ml。4.1.3 濃縮液立即稱重、取樣、密封、貼簽，即為“重組人白細胞介素-1受體拮抗劑 超濾濃縮液”。28保存（最長不超過12小時）。4.1. 4 30K、3K超濾系統(tǒng)清洗、消毒、保存4.1.4.1清洗：按每塊膜包不少于3L注射用水沖洗膜包，正確調(diào)節(jié)流速及回流管調(diào)壓閥并維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar。4.1.4.2消毒：按每塊膜包不少于2L消毒液沖洗膜包后循環(huán)至少30min，正確調(diào)節(jié)流速及回流管調(diào)壓閥并維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar。4.1.4.3保存：用注射用水沖洗膜包至回流、濾出口pH均為中性。

36、調(diào)節(jié)流速及回流管調(diào)壓閥并維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar，按每塊膜包不少于2L保存液沖洗膜包后循環(huán)至少10min。4.2操作4.2.1緩沖液配制4.2.1.1置換液配制4.2.1.1.1物料配方：檸檬酸三鈉二水合物2.2g/L，乙二胺四乙酸二鈉鹽二水合物0.2g/L，氯化鈉8.18g/L，檸檬酸0.02 g/L；4.2.1.1.2主要設備：桶、電子稱、實驗室pH計、實驗室電導率儀。4.2.1.1.3取樣檢測：置換液配制完成后取樣檢測pH，電導，用安瓿瓶取1ml置換液測內(nèi)毒，檢測風險評估中控制范圍窄的pH、電導 、D內(nèi)毒；接受標準： pH6.26.8，電導15.517.5ms/cm

37、，D置換液內(nèi)毒素不大于0. 25Eu/ml。4.2.1.2消毒液配制消毒液配方：0.1 mol/L NaOH4.2.1.3保存液配制保存液配方：0.01 mol/L NaOH4.2.2 超濾操作4.2.2.1 30K超濾前處理4.2.2.1.1維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar，用10L注射用水洗膜。4.2.2.1.2維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar，用3L的0.1mol/L氫氧化鈉沖洗膜包后，循環(huán)消毒不少于30min。4.2.2.1.3維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar，用注射用水沖洗膜包至回流口、濾出口pH試紙檢測均為中性。4.2.2.1.4主要設備：

38、蠕動泵520S，30K超濾系統(tǒng)。4.2.2.1.5取樣檢測：系統(tǒng)處理結(jié)束后用安瓿瓶取濾出液和回流液各1ml，檢測風險評估中控制范圍窄的 D內(nèi)毒；可接受標準：D處理后系統(tǒng)內(nèi)毒素不大于0. 5Eu/ml。4.2.2.2 30K超濾4.2.2.2.1樣品超濾將需超濾的樣品置冰浴中，調(diào)節(jié)流速及回流管調(diào)壓閥，使進出口壓力均1.0bar，用無熱原血清瓶收集30K濾出液。4.2.2.2.2置換液置換樣品濾至500ml時加入置換液500ml繼續(xù)超濾，當樣品濾至500ml時再加入置換液500ml繼續(xù)超濾，如此反復置換6次。4.2.2.2.3主要設備：蠕動泵520S，30K超濾系統(tǒng)。4.2.2.2.4取樣檢測：用

39、安瓿瓶取30K超濾濾出液1ml，檢測風險評估中控制范圍窄的 D內(nèi)毒；可接受標準： D處理后系統(tǒng)內(nèi)毒素不大于0.5Eu/ml。4.2.2.3 30K超濾系統(tǒng)清洗、消毒、保存4.2.2.3.1清洗：用不少于3L注射用水沖洗膜包，正確調(diào)節(jié)流速及回流管調(diào)壓閥并維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar。4.2.2.3.2消毒：用不少于2L消毒液沖洗膜包后循環(huán)至少30min，正確調(diào)節(jié)流速及回流管調(diào)壓閥并維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar。4.2.2.3.3保存：用注射用水將膜包沖洗至回流、濾出口pH均為中性。調(diào)節(jié)流速及回流管調(diào)壓閥并維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar，用不少于

40、2L保存液沖洗膜包后循環(huán)至少10min。4.2.2.4 3K超濾前處理4.2.2.4.1維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar，用20L注射用水洗膜。4.2.2.4.2維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar，用10L的0.1mol/L氫氧化鈉沖洗膜包后，循環(huán)消毒30min。4.2.2.4.3維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar，用注射用水洗膜包至回流口、濾出口pH試紙檢測為中性。4.2.2.4.4主要設備：蠕動泵520S，3K超濾系統(tǒng)。4.2.2.4.5取樣檢測：系統(tǒng)處理結(jié)束后用安瓿瓶取濾出液和回流液各1ml，檢測風險評估中控制范圍窄的 D內(nèi)毒；可接受標準： D處理后

41、系統(tǒng)內(nèi)毒素不大于0.25Eu/ml。4.2.2.5 3K超濾濃縮：4.2.2.5.1 樣品超濾將裝有30K超濾濾出樣品的血清瓶置于冰浴中經(jīng)3K超濾濃縮，調(diào)節(jié)流速及回流管調(diào)壓閥并使壓力1.5bar 。4.2.2.5.2置換液置換樣品濾至1.5L時加入置換液1.5L繼續(xù)超濾，當樣品濾至1.5L時再加入置換液1.5L繼續(xù)超濾，如此反復置換8次。4.2.2.5.3將3K超濾濃縮置換好且濃縮至一定濃度（不低于120mg/ml）的樣品泵出至無熱原的2L試劑瓶內(nèi)。4.2.2.5.4用超濾置換緩沖液將殘留在3K超濾系統(tǒng)內(nèi)的濃縮液頂出至2L試劑瓶內(nèi)，濃縮液的濃度控制在不低于120mg/ml。4.2.2.5.5主

42、要設備：蠕動泵520S，3K超濾系統(tǒng)。4.2.2.5.6取樣檢測：用安瓿瓶取3K超濾濃縮液1ml，檢測風險評估中控制范圍窄的B蛋白濃度、D內(nèi)毒；可接受標準： B實測值 D處理后系統(tǒng)內(nèi)毒素不大于0.25Eu/ml。4.2.2.6濃縮液立即稱重、取樣、密封、貼簽，即為“重組人白細胞介素-1受體拮抗劑 超濾濃縮液”。28保存（最長不超過12小時）。4.2.2.7 3K超濾系統(tǒng)清洗、消毒、保存4.2.2.7.1清洗：用不少于15L注射用水沖洗膜包，正確調(diào)節(jié)流速及回流管調(diào)壓閥并維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar。4.2.2.7.2消毒：用不少于10L消毒液沖洗膜包后循環(huán)至少30min，正確調(diào)

43、節(jié)流速及回流管調(diào)壓閥并維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar。4.2.2.7.3保存：用注射用水將膜包沖洗至回流、濾出口pH均為中性。調(diào)節(jié)流速及回流管調(diào)壓閥并維持進口壓力1.0bar，出口壓力1.0bar，用不少于10L保存液沖洗膜包后循環(huán)至少10min。5.除菌過濾5.1 步驟將“超濾濃縮液”在A級送風環(huán)境下用0.2mm除菌濾器過濾除菌，用無菌、無熱原容器收集過濾后的超濾濃縮液，稱重、取樣、密封、貼簽，即為“重組人白細胞介素-1受體拮抗劑原液”。原液在28保存不超過72小時。在-20-40長期保存，保存期暫定3年。5.2 操作5.2.1 除菌過濾前準備5.2.1.1 內(nèi)容：將經(jīng)完整性

44、測試合格的0.2mm除菌濾器連接上進口和出口硅膠管（硅膠管已用0.5mol/L NaOH溶液浸泡12小時以上），并連接蠕動泵，用20L 0.5mol/L NaOH消毒液消毒過濾器，用注射用水洗至pH試紙檢測濾器流出液為中性，再將濾器經(jīng)濕熱滅菌合格后待用；4L原液桶經(jīng)0.5mol/L NaOH浸泡12小時以上，用注射用水洗至pH試紙檢測濾器流出液為中性，再將4L原液桶進行濕熱滅菌，合格后待用。5.2.1.2主要設備：蠕動泵520S。5.2.1.3取樣檢測：除菌濾器經(jīng)消毒注射用水洗至中性后，取樣檢測風險評估中控制范圍窄的D內(nèi)毒；可接受標準：D0.25 Eu/ml。4L原液桶取樣檢測風險評估中控制范

45、圍窄的D內(nèi)毒；可接受標準：D0.25 Eu/ml。5.2.2除菌過濾5.2.2.1過程：將“超濾濃縮液”在A級送風環(huán)境下用0.2mm除菌濾器過濾除菌，用無菌、無熱原4L原液桶收集過濾后的超濾濃縮液，稱重、取樣、密封、貼簽，即為“重組人白細胞介素-1受體拮抗劑原液”。原液在28保存不超過72小時。在-20-40長期保存，保存期暫定3年。5.2.2.2主要設備：蠕動泵520S。5.2.2.3取樣檢測：重組人白細胞介素-1受體拮抗劑原液取樣檢測風險評估中控制范圍窄的原液全項，可接受標準：依rhIL-1ra原液檢測標準操作規(guī)程。八、偏差報告和偏差清單：驗證過程中發(fā)生的偏差都應在備注中注明偏差號，針對每一項均應進行記錄，驗證報告中應列出以上所有確認的報告中應有偏差記錄及匯總表。九、變更控制：1. 驗證過程中出現(xiàn)任何變更都應按照變更控制程序進行。2. 當工藝出現(xiàn)變更時需進行再驗證十、結(jié)論：驗證報告中應明確說明驗證結(jié)論。十一、縮寫與定義：1.CQA是Critical Quality Attritubes（關(guān)鍵質(zhì)量屬性）的縮寫。2.CP