




版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、蛋白質(zhì)含量測定 雙縮脲法(Biuret法) 實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)分光光度法測定的原理和方法2學(xué)習(xí)蛋白質(zhì)含量測定的原理和方法3掌握雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量的方法實驗原理 雙縮脲(NH3CONHCONH3)是兩個分子脲經(jīng)180左右加熱,放出一個分子氨后得到的產(chǎn)物。在強堿性溶液中,雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物,稱為雙縮脲反應(yīng)。凡具有兩個酰胺基或兩個直接連接的肽鍵,或能過一個中間碳原子相連的肽鍵,這類化合物都有雙縮脲反應(yīng)。 紫色絡(luò)合物 紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān),故可用來測定蛋白質(zhì)含量。測定范圍為1-10mg蛋白質(zhì)。干擾這一測定的物質(zhì)主要有:Tris緩沖液和某
2、些氨基酸等。 此法的優(yōu)點是較快速,不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近,以及干擾物質(zhì)少。主要的缺點是靈敏度差。因此雙縮脲法常用于需要快速,但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測定。 蛋白質(zhì)測定方法:1雙縮脲法(biuret法) 2微量凱氏(kjeldahl)定氮法 3folin酚試劑法4考馬斯亮蘭法5紫外吸收法 6總蛋白定量分析BCA實驗試劑與器材 (一)、實驗試劑 1、標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液:用標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)晶牛血清清蛋白(BSA)或標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白,配制成10mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液,牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制,酪蛋白用005N NaOH配制。 2、雙縮脲試劑 (二)、實驗器材 可見光分光光度計 分光光度計
3、的基本原理是溶液中的物質(zhì)在光的照射下,產(chǎn)生了對光吸收的效應(yīng),物質(zhì)對光的吸收是具有選擇性的。各種不同的物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜,因此當(dāng)某單色光通過溶液時,其能量就會被吸收而減弱,光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系,也即符合比色原理Lambert-Beers law: 數(shù)學(xué)表達(dá)式: A=lg(1/T)=KCL A為吸光度 T為透射率,是投射光強度比上入射光強度 C為吸光物質(zhì)的濃度 L為吸收層厚度 K為吸收系數(shù) 物理意義是當(dāng)一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的西光物質(zhì)時,其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度C及吸收層厚度L成正比. 儀器操作鍵介紹“方式設(shè)定”鍵(MODE):用于設(shè)置測試方式“10
4、0%T/0ABS”鍵:用于自動調(diào)整100.0%T(100.0透射比)或0ABS(零吸光度)“0%T”鍵:用于自動調(diào)整零透射比“波長設(shè)置”旋鈕:用于設(shè)置分析波長樣品測試操作 打開電源開關(guān),使儀器預(yù)熱20分鐘 用“波長設(shè)置”按鈕將波長設(shè)置在您將要使用的分析波長位置上 打開樣品室蓋,將擋光體插入比色皿架,并將其推或拉入光路 蓋好樣品室蓋,按“0%T”鍵調(diào)透射比零 取出擋光體,蓋好樣品室蓋,按“100%T”調(diào)100%透射比 按“方式鍵”(MODE)將測試方式設(shè)置為吸光度方式(A) 將參比溶液和被測溶液分別倒入比色皿中 打開樣品室蓋,將盛有溶液的比色皿分別插入比色皿槽中,蓋上樣品室蓋 將參比溶液推入或拉
5、入光路中,按“100%T”調(diào)零A 將被測溶液拉入光路中,此時,顯示器上所顯示是被測樣品的吸光度參數(shù)實驗完成后,關(guān)閉電源,洗凈比色皿,并蓋好蓋布。 使用注意:1每次測量前檢查,檢查波長是否所需值;2比色皿應(yīng)拿磨砂面,不可用手接觸透光面;3比色皿在盛裝樣品前,應(yīng)用所盛樣品沖洗兩次,裝樣量為比色皿的2/3容積;4向比色皿加樣時,若樣品流到比色皿外壁時,應(yīng)用濾紙點干,切忌用濾紙擦拭,比色皿易出現(xiàn)劃痕;5測量結(jié)束后應(yīng)用蒸餾水清洗比色皿,清洗干凈后放起.操作方法 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定 取12支試管分兩組,分別加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液,用水補足到1毫升,然后加入4毫升雙縮脲試劑。充分搖勻后,在室溫(2025)下放置20分鐘,于540nm處進(jìn)行比色測定(30分鐘內(nèi)必須完成測定)。用未加蛋白質(zhì)溶液的第一支試管作為空白對照液。取兩組測定的平均值,以蛋白質(zhì)的含量為橫座標(biāo),光吸收值為縱座標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、樣品的測定 取2-3個試管,用上述
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 二零二五年度手店面轉(zhuǎn)租合同:電競主題客棧轉(zhuǎn)租管理協(xié)議
- 2025年度離婚協(xié)議書模板:離婚后子女撫養(yǎng)權(quán)及贍養(yǎng)費協(xié)議
- 2025年度自愿離婚協(xié)議及財產(chǎn)分割執(zhí)行合同
- 二零二五年度物業(yè)賠償業(yè)主裝修期間意外事故協(xié)議
- 2025年度時尚服裝加盟店合作協(xié)議
- 2025年度餐飲服務(wù)業(yè)勞動合同解除協(xié)議
- 二零二五年度反擔(dān)保合同匯編:農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化項目融資風(fēng)險控制
- 二零二五年度順豐快遞員績效獎金合同
- 二零二五年度耕地租賃與農(nóng)業(yè)文化遺產(chǎn)保護(hù)合同
- 企業(yè)信息管理軟件開發(fā)合同
- 《實踐論》《矛盾論》導(dǎo)讀修改稿課件
- 先天性馬蹄內(nèi)翻足后內(nèi)側(cè)松懈和肌腱移植術(shù)后護(hù)理查房
- 《遙感導(dǎo)論》全套課件
- 七年級上冊數(shù)學(xué)應(yīng)用題專項
- 降低混凝土路面裂縫發(fā)生率QC小組資料
- 【教師必備】部編版四年級語文上冊第二單元【集體備課】
- 學(xué)習(xí)強國挑戰(zhàn)答題題庫1600題
- 2023年已打印自主招生數(shù)學(xué)試題及答案
- 水文地質(zhì)手冊
- 城鄉(xiāng)居民基本醫(yī)療保險參保登記表
- 2023年云南省初中信息技術(shù)學(xué)業(yè)水平考試操作題
評論
0/150
提交評論