橄欖油紫外分光光度檢測(cè)法

1、1 / 7COI/T20/Doc. no. 19/Rev. 3 2010油脂紫外分光光度檢測(cè)法前言紫外吸光度的檢測(cè)能反應(yīng)油脂的品質(zhì)，加工過(guò)程會(huì)引起油脂吸光度的變化。由于油脂中的某些成分存在共軸雙鍵和三鍵結(jié)構(gòu)， 所以會(huì)在特定波長(zhǎng)下有紫外吸1%收。吸收度用E1cm表示（1 g油脂溶解于100 mL溶劑，比色皿光徑為1 cm）。一般情況下也用K（消光系數(shù)）表示。1.范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)植物油脂紫外吸光度測(cè)定的方法。2原理將油脂溶解在所需溶劑中，以此溶劑為參比液，測(cè)定樣品在特定波長(zhǎng)下的吸 光度。記錄分光光度計(jì)的讀數(shù)并計(jì)算樣品的吸光度。3.儀器3.1分光光度計(jì)，可讀取220 nm360 nm波長(zhǎng)。3.2

2、1 cm光徑石英比色也。3.3 25 mL容量瓶。4試劑4.1分析純異辛烷（2,2,4-三甲基戊烷），以蒸僻水為參比溶液，在220 nm處的 透光率不低于60%，在250 nm處不低于95%?；蛘哂梅治黾儹h(huán)己烷，以蒸僻水為參比溶液，在220 nm處的透光率不低于40%,在250 nm處不低于95%?；蛘哂闷渌芡耆芙庥椭娜軇?。5.測(cè)定步驟5.1待測(cè)樣品必須完全混勻并且無(wú)懸浮物。若油脂在室溫下是液態(tài)的，則需在30C左右用濾紙過(guò)濾。固體脂肪在高于溶點(diǎn)溫度10C以?xún)?nèi)均質(zhì)化并用濾紙過(guò)濾。5.2精確稱(chēng)量0.25 g樣品，置于25 mL容量瓶?jī)?nèi)，用溶劑（異辛烷或環(huán)己烷） 溶解樣品，2 / 7并稀釋至刻

3、度。該溶液必須活澈，如有乳光或渾濁現(xiàn)象必須立即用濾 紙過(guò)濾。5.3將待測(cè)溶液倒入石英比色血，用溶劑做參比，使用分光光度計(jì)測(cè)定在232nm276 nm波長(zhǎng)范圍的吸光度，吸光度必須在0.10.8之間，否則應(yīng)適當(dāng)加 大樣品濃度或進(jìn)行稀釋重新測(cè)定。5.4如果吸光度測(cè)定之前油脂需要過(guò)氧化鋁柱， 則按以下步驟處理：30 g堿性氧 化鋁用己烷溶成懸浮狀，裝層析柱。待氧化鋁壓實(shí)之后將多余的己烷吸出，使液面高丁氧化鋁約1 cm。溶解10 g油脂丁100 mL己烷，按5.1均質(zhì)化并過(guò)濾， 然后倒入層析柱。收集洗脫液，在低丁25C下真空減壓濃縮至無(wú)溶劑。然后立即 按5.2驟處理得到的油脂樣品。5.5如溶劑使用異辛烷

4、則最大吸收波長(zhǎng)為268 nm,如使用環(huán)己烷則最大吸收波長(zhǎng)為270 nm。6.結(jié)果計(jì)算6.1記錄相應(yīng)波長(zhǎng)下的吸光度，按下式計(jì)算：k旦c.s式中:K入：波長(zhǎng)W的吸光度（以濃度1 g/100 mL, 1 cm比色皿波長(zhǎng)頑U得吸光度表示）；E入：波長(zhǎng)W測(cè)得的試樣吸光度；C:試樣溶液中樣品的濃度，單位為g/100 mL;S:比色也光徑，單位為cm。結(jié)果應(yīng)保留兩位小數(shù)點(diǎn)。6.2橄欖油的吸光度測(cè)定方法與歐盟規(guī)定的官方方法一致， 涉及到用異辛烷做溶 液檢測(cè)232nm和270 nm波長(zhǎng)下的吸光度，并且需測(cè)定吸光度的變異值（K）,按下式檢測(cè)： K KmKm4 Km42Km是波長(zhǎng)m下的吸光度，最大吸收波長(zhǎng)在270

5、nm附近。注：如溶液用異辛烷則最大吸收波長(zhǎng)為268 nm和232 nm,如溶液用環(huán)己烷,則最大吸收波長(zhǎng)為270 nmffi 232 nm。附錄I3 / 7分光光度計(jì)的校正A.2.儀器必須六個(gè)月校驗(yàn)一次，包括波長(zhǎng)響應(yīng)值和響應(yīng)值的準(zhǔn)確性。A.2.1.波長(zhǎng)校驗(yàn)可以用汞燈或使用合適的濾光片進(jìn)行。A.2.2.光電管和光電倍增管響應(yīng)值的校驗(yàn)按以下步驟進(jìn)行： 稱(chēng)0.2000孫析純銘 酸鉀溶于0.05 mol/L的氫氧化鉀溶液中，定溶至1000 mL。取上述溶液25 mL于500 mL容量瓶中，用0.05 mol/L的氫氧化鉀溶液稀釋至刻度。用0.05 mol/L的氫氧化鉀溶液作為參比溶液，1cm光徑比色血，

6、測(cè)定此溶液在275 nm處的吸 光度，應(yīng)該為0.200 0.005。方法精密度200W，來(lái)自13個(gè)國(guó)家的21個(gè)擁有IOC認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室參加了這次由執(zhí)行秘書(shū) 處實(shí)施的合作檢測(cè)。共檢測(cè)了五個(gè)樣品：A:特級(jí)初榨橄欖油B:二次離心橄欖油C:精煉油橄欖果渣油D:初榨橄欖油+菜籽油+高油酸葵花籽油E:初榨橄欖油+精煉大豆油 測(cè)試結(jié)果見(jiàn)下表（A.1-A.6）4 / 7表A.1 232 nm處的紫外吸收(異辛烷為溶液)項(xiàng)目ABCDE實(shí)驗(yàn)室數(shù)量2122222222可接受數(shù)量2018182117均值1.762.103.813.852.82重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差Sr0.02590.01260.01550.03590.0193

7、重復(fù)性變異系數(shù)CV (r), %1.470.600.410.930.69重復(fù)性限r(nóng)0.0730.0350.0430.1010.054再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差SR0.07730.06920.1740.21080.0694再現(xiàn)性變異系數(shù)CV (R), %4.383.294.585.482.46再現(xiàn)性限R0.2160.1940.4880.5900.194表A.2 232nm處的紫外吸收(環(huán)己烷為溶液)項(xiàng)目ABCDE實(shí)驗(yàn)室數(shù)量2121212121可接受數(shù)量1820202121均值1.762.123.833.862.79重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差Sr0.02500.02160.04230.04050.0322重復(fù)性變異系數(shù)C

8、V (r), %1.421.021.111.051.19重復(fù)性限r(nóng)0.0700.0600.1190.1130.093再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差SR0.04930.07300.15130.13780.0996再現(xiàn)性變異系數(shù)CV (R), %2.813.443.953.573.57再現(xiàn)性限R0.1380.2040.4240.3860.2795 / 7表A.3 268 nm處的紫外吸收(異辛烷為溶液)項(xiàng)目ABCDE實(shí)驗(yàn)室數(shù)量2122222222可接受數(shù)量2018201720均值0.120.431.140.450.60重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差Sr0.00490.00500.01550.00660.0066重復(fù)性變異系數(shù)CV

9、(r), %3.961.171.361.461.10重復(fù)性限r(nóng)0.0140.0140.0430.0180.019再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差SR0.00990.01590.02960.01340.0335再現(xiàn)性變異系數(shù)CV (R), %8.003.752.592.985.56再現(xiàn)性限R0.0280.0450.0830.0380.094表A.4 270 nm處的紫外吸收(環(huán)己烷為溶液)項(xiàng)目ABCDE實(shí)驗(yàn)室數(shù)量2121212121可接受數(shù)量2019202017均值0.130.431.120.450.59重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差Sr0.00520.00830.01030.01180.0064重復(fù)性變異系數(shù)CV (r), %

10、4.021.930.922.631.08重復(fù)性限r(nóng)0.0140.0230.02890.0330.018再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差SR0.01090.01570.02650.01440.0148再現(xiàn)性變異系數(shù)CV(R), %8.513.662.373.202.52再現(xiàn)性限R0.0310.0440.0740.0400.0426 / 7表A.5 270也nm處的紫外吸收變異值A(chǔ)K(環(huán)己烷為溶液)項(xiàng)目ABCDE實(shí)驗(yàn)室數(shù)量2021212121可接受數(shù)量1920192018均值-0.0020.0020.0850.0350.047重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差Sr0.00060.00050.00090.00100.0014重復(fù)性變異系

11、數(shù)CV(r), %28.9021.611.092.862.90重復(fù)性限r(nóng)0.00160.00150.00260.00280.0038再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差SR0.00290.00130.00430.00260.0038再現(xiàn)性變異系數(shù)CV(R), %147.5151.975.067.588.13再現(xiàn)性限R0.00800.00360.01210.00680.0106表A.6 268也nm處的紫外吸收變異值 K(異辛烷為溶液)項(xiàng)目ABCDE實(shí)驗(yàn)室數(shù)量2121222222可接受數(shù)量2118212020均值-0.0020.0000.0820.0310.042重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差Sr0.00090.00050.0019

12、0.00140.0007重復(fù)性變異系數(shù)CV(r), %36.44121.082.274.381.65重復(fù)性限r(nóng)0.00250.00140.00520.00380.0020再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差SR0.00360.00100.00820.00390.0045再現(xiàn)性變異系數(shù)CV(R), %148.18234.7710.0012.6310.63再現(xiàn)性限R0.01010.00270.02290.01100.0126參考文獻(xiàn)ISO 5725-1: 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results- Part 1:

13、General principles and definitionsISO 5725-2: 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and7 / 7results Part 2: Basic method for the determination of the repeatability andreproducibility of a standard measurement methodISO 5725-5: 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results- Part 5: Alternativ