細(xì)胞活體染色技術(shù)

1、細(xì)胞活體染色技術(shù)生物學(xué)基地王婷婷一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)細(xì)胞活體染色的方法。2觀察動、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體，液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布。 二、實(shí)驗(yàn)原理 活體染色是利用某些無毒或毒性較小的染色劑，在不影響細(xì)胞生命活動的情況下顯示細(xì)胞的天然構(gòu)造，更具真實(shí)性?；钚匀旧址譃轶w內(nèi)活體染色和體外活體染色。 詹納斯綠B(Janus green B)能夠活染線粒體為藍(lán)色，主要是由于線粒體內(nèi)膜上的細(xì)胞色素酶系使染料始終保持在氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))，在周圍的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，這些染料被還原為無色的色基(即無色狀態(tài))。 中性紅是液泡系的特殊活體染色劑，它可將不同發(fā)育時期的液泡染成不同深度的紅色，在細(xì)胞處于生活狀態(tài)下細(xì)胞質(zhì)和核不被染

2、色，該染料對液泡系具有一定專一性。 臺盼藍(lán)(trypan blue)是一種偶氮類酸性染料，它可以通過死亡細(xì)胞的質(zhì)膜而使細(xì)胞著色，但不能通過活細(xì)胞的質(zhì)膜，故可用臺盼藍(lán)鑒別活細(xì)胞與死細(xì)胞。三、實(shí)驗(yàn)用品(一)材料：黃豆根尖、洋蔥、小鼠。(二)器械：顯微鏡、鑷子、刀片、剪刀、解剖針、表面皿、載玻片、蓋玻片、吸管、收水紙等。 三、實(shí)驗(yàn)用品 LRinger氏液 NaCl 090g KCl 042g CaCl2 025g三、實(shí)驗(yàn)用品 213000中性紅溶液 先配制l的中性紅Ringer氏原液，因中性紅難溶解，需稍加熱，(30-40)使之溶解，過濾，將濾液裝入棕色瓶中暗處保存，臨用前取少許原液用Ringer氏

3、液稀釋成13000的中性紅溶液。三、實(shí)驗(yàn)用品315000詹納斯綠B 先配制1詹納斯綠B溶Ringer氏溶液，方法同上。4臺盼藍(lán)染色液 將l克臺盼藍(lán)溶于100毫升生理鹽水中5香柏油、二甲苯、蒸餾水等。四、實(shí)驗(yàn)方法 (一)液泡系的中性紅活體染色1用雙面刀片將黃豆芽根尖 (約l-2cm2) 處小心縱切斷面，一定要薄且均勻。2在載玻片中央滴加中性紅染料。使材料在其中染色5-10分鐘。3吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，蓋片、鏡檢、注意液泡系染成什么顏色，其形態(tài)、大小如何、分布位置。 黃豆根尖細(xì)胞液泡系的中性紅染色觀察黃豆根尖細(xì)胞液泡系的中性紅染色觀察四、實(shí)驗(yàn)方法 (二)線粒體的活體染色L用植物細(xì)胞觀

4、察線粒體的活體染色 (1)用鑷子撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮一小塊(約lcm2)，放在載玻片上用1/5000詹納斯綠B染色約30分鐘。(2)吸出染液，滴加Ringer氏液，蓋片、鏡檢，注意觀察線粒體分布及所呈形狀。四、實(shí)驗(yàn)方法 2用動物細(xì)胞觀察線粒體的活體染色(1)取鼠肝邊緣較薄的肝組織一小塊，放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗去血液。(2)將肝組織洗凈后吸去血液，加入15000詹納斯綠B染液染色30分鐘，注意不可將組織塊完全淹沒。(3)染色后撕開組織塊，這樣溶液中就會有一些細(xì)胞或細(xì)胞群。(4)用吸管吸取溶液，放在載玻片的Ringer氏液中。墊兩根短頭發(fā)，加蓋玻片，即可鏡檢。(5)用油鏡觀察活染色的線粒體標(biāo)本，要不斷地來回轉(zhuǎn)動細(xì)調(diào)焦螺旋，使蓋玻片上下慢慢移動。使材料總是得到氧氣，線粒體的染色才顯得非常清楚。四、實(shí)驗(yàn)方法 3人口腔粘膜上皮細(xì)胞線粒體的超活染色觀察（1）取清潔載玻片放在37恒溫水浴鍋的金屬板上，滴2滴15000詹納斯綠B溶液。（2）用牙簽取口腔上皮細(xì)胞，將刮下的粘液狀物放入載玻片的染液滴中，染色10一15分鐘(注意不能干燥)，蓋上蓋片，吸去多余的溶液，即可鏡檢?？谇簧掀ぜ?xì)胞示線粒體