ELISA(雙抗體夾心法)—檢測(cè)HBsAg

1、ELISA （雙抗體夾心法）一檢測(cè)HBsAg摘要：以已知抗體（抗HBs）包被載體，然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入，共同孵育后，抗原結(jié)合于包被抗體上，再加入酶標(biāo)記特異抗體（酶標(biāo)抗HBs）,酶標(biāo)抗體連接到抗原上，最后加入底物溶液，根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。【材料】HBsAgi式劑盒，本試劑盒含：1、包被抗-HBs反應(yīng)條1瓶2、酶結(jié)合物1 瓶3、HBsAg陽(yáng)性對(duì)照1瓶4、HBsA判性對(duì)照1瓶5、洗滌液：用前每瓶作 1: 20稀釋1瓶6、顯色劑（找產(chǎn)品，上生物幫>> >>相關(guān)專題ELISA免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)以已知抗體（抗HBs）包被載體,然后將含有抗原的待檢標(biāo)本加入,共同孵育 后，抗

2、原結(jié)合于包被抗體上,再加入酶標(biāo)記特異抗體（酶標(biāo)抗HBs）,酶標(biāo)抗體 連接到抗原上，最后加入底物溶液，根據(jù)顏色反應(yīng)來判定抗原含量。（1）抗體吸附 于戟體表面，洗 滌<2）加特測(cè)抗 原,抗原特異性 結(jié)合抗體，洗滌3）加"標(biāo)記抗殖，緒自抗原， 洗滌（4）加底榭產(chǎn)生顏色反應(yīng)底物水解量=抗原 存在重圖3-3測(cè)定抗原的雙抗住夾心法原理【材料】HBsAg式劑盒，本試劑盒含1、包被抗-HBs反應(yīng)條2、酶結(jié)合物 1瓶3、HBsAg陽(yáng)性對(duì)照1瓶4、HBsAg陰性對(duì)照1瓶5、洗滌液: 用前每瓶作1： 20稀釋1瓶6、顯色劑(TMB)A1瓶7、顯色劑(TMB)B1瓶8、終止液1瓶【方法】1、加入待測(cè)標(biāo)

3、本每孔0.05ml,并設(shè)HBsAg陽(yáng)性又1照2孔，HBsAg陰性又1照2 孔，空白對(duì)照1孔，然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml、空白對(duì)照孔不加)， 充分混勻后置37孵育30 分鐘。2、洗板: 棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體、拍干、用洗滌液注滿每孔，棄去拍干，反復(fù)五次后拍干。3、顯色劑：先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml),然后再加顯色劑B每孔1滴 (0.05ml) ，混勻， 37孵育 10分鐘。4、每孔加終止液1 滴 (0.05ml) ，混勻?！窘Y(jié)果】比色法：波長(zhǎng)450nvm先用空白孔校零點(diǎn)，然后讀取各孔光密度值。樣品OD值/陰性對(duì)照平均OD值2.1判斷為陽(yáng)性，否則為陰性。備注：陰性對(duì)照平均OD®低于0.05作0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD®計(jì) 算。陽(yáng)性對(duì)照OD值0.8,實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效?！咀⒁馐马?xiàng)】1、試劑盒置2c8c保存。2、使用前試劑應(yīng)搖勻，并棄去12滴后垂直滴加。3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測(cè)標(biāo)本所需微孔條，置室溫平衡 30 分鐘后再行測(cè)試，余者應(yīng)及時(shí)封存于冰箱中以備后用。4、待測(cè)標(biāo)本不可用NaN