農(nóng)業(yè)級聚谷氨酸標準

1、Q/XKJS0012011 Q/XKJS 南京軒凱生物科技有限公司 發(fā)布2011-08-01發(fā)布2011-08-01實施農(nóng)業(yè)級聚谷氨酸 Q/XKJS001-2011南京軒凱生物科技有限公司企業(yè)標準9前 言農(nóng)業(yè)級聚谷氨酸目前尚無國家標準和行業(yè)標準，根據(jù)標準化法的規(guī)定，特制定本標準，作為企業(yè)產(chǎn)品檢驗的依據(jù)。本標準的編寫要求、格式、構(gòu)成和表述方法，符合GB/T 1.1-2009標準化工作導(dǎo)則 第1部分：標準的結(jié)構(gòu)和編寫和GB/T 1.2-2002標準化工作導(dǎo)則 第2部分：標準中規(guī)范性技術(shù)要素內(nèi)容的確定方法的要求。本標準中主要技術(shù)要素是參照國外同類產(chǎn)品相關(guān)產(chǎn)品標準，并結(jié)合產(chǎn)品試劑的實際數(shù)據(jù)及市場需要確

2、定。本標準自發(fā)布之日起有效期三年，到期復(fù)審。本標準由南京軒凱生物科技有限公司提出并負責(zé)起草。本標準主要起草人： 。農(nóng)業(yè)級聚谷氨酸1 范圍本標準規(guī)定了農(nóng)業(yè)級聚谷氨酸的技術(shù)要求、檢驗方法、檢驗規(guī)則、標志、包裝、運輸與貯存等。本標準適用于以谷氨酸為原料制得的農(nóng)業(yè)級聚谷氨酸。結(jié)構(gòu)式：2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T8170-2008 數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的

3、表示和判定GB/T 603-2002  化學(xué)試劑  試驗方法中所用制劑及制品的制備GB/T6682-2008 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法NY/T 1115-2006 水溶肥料水不溶物含量的測定國家技術(shù)監(jiān)督局令1995第43號 定量包裝商品計量監(jiān)督規(guī)定3 技術(shù)要求產(chǎn)品性能應(yīng)符合表1的要求 表1 產(chǎn)品性能指標序號項目指標1物理外觀黃色或褐色粉末2含量20%3全氮5%5全磷15%6全鉀18%7不溶物含量0.5%8pH5.0-7.0 凈含量允許誤差應(yīng)符合定量包裝商品計量監(jiān)督管理辦法的規(guī)定。4 檢驗方法4.1 物理外觀在自然光線下用肉眼檢查產(chǎn)品的外觀。

4、4.2 含量4.2.1 方法提要以硫酸鈉溶液為流動相，用凝膠滲透色譜法（GPC）分離測定聚谷氨酸含量4.2.2 試劑及溶液4.2.2.1 硫酸鈉溶液（0.2mol/L）稱取28.412g硫酸鈉溶于水并稀釋至1L，用乙酸調(diào)節(jié)pH至4.0，用孔徑0.22m混合纖維素酯微孔濾膜過濾，超聲波脫氣15min。4.2.2.2 聚谷氨酸標準貯備液（10mg/mL）稱取聚谷氨酸標準品（純度99.0%）1.0g(準確至0.0002g)，用純水溶解轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用純水稀釋至刻度，混勻。4.2.2.3 聚谷氨酸標準溶液（1.0mg/mL）移取10.00mL聚谷氨酸標準貯備溶液（4.2.2.2）于100m

5、L容量瓶中，用純水稀釋至刻度，混勻。此標準溶液使用前制備。4.2.3 儀器設(shè)備 凝膠滲透色譜儀：配有紫外檢測器。一般實驗室儀器和設(shè)備。4.2.4 色譜柱及操作條件凝膠柱：SB-806M HQ檢測溫度：35檢測波長：210nm檢測器:紫外檢測器(210nm)流速：1.0mL/min進樣量：20L4.2.5 分析步驟4.2.5.1 標準曲線的繪制按表2所示，將聚谷氨酸標準溶液（4.2.2.3）分別準確移去至6個25 mL容量瓶中，用純水稀釋至刻度，溶液經(jīng)0.22m水系濾頭過濾。打開色譜儀，并調(diào)至工作狀態(tài)，待基線平穩(wěn)后，依次將上述聚谷氨酸標準溶液注入凝膠柱中，進樣量為20L，記錄峰面積，以標準溶液中

6、聚谷氨酸的質(zhì)量為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。聚谷氨酸典型圖譜見附錄A。表2 聚谷氨酸標準溶液加入量聚谷氨酸標準溶液體積，mL0510152025聚谷氨酸的對應(yīng)量，mg05101520254.2.5.2 試樣測定根據(jù)試樣中聚谷氨酸的不同含量，按表3確定稱樣量后稱樣，準確至0.0001g。然后用純水溶解轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，并用純水稀釋至刻度，搖勻。配好的試樣溶液經(jīng)0.22m水系濾頭過濾，進樣量為20L，進行GPC檢測，記錄峰面積，并根據(jù)標準曲線查得試樣中聚谷氨酸的質(zhì)量m1。表3 不同聚谷氨酸含量，稱取試料量聚谷氨酸（）%00.050.050.200.200.500.50稱取試料量（m

7、）g2.000.500.200.104.2.6 結(jié)果的表述和計算以質(zhì)量分數(shù)表示的聚谷氨酸的含量，數(shù)值以表示，按公式（1）計算： m =×100%（1）m式中：m1試料中測得聚谷氨酸的質(zhì)量，mg；m試樣質(zhì)量，g。4.2.7 允許差平行測定結(jié)果允許絕對值不得大于0.005%，取平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。4.3 全氮4.3.1 方法提要農(nóng)業(yè)級聚谷氨酸用濃硫酸加雙氧水消煮，使有機氮轉(zhuǎn)化為銨鹽。銨鹽經(jīng)堿化后形成氨，經(jīng)蒸餾將氨吸收到硼酸溶液中。以甲基紅-溴甲酚綠為指示劑，用標準酸滴定，測定全氮含量（不包括全部硝態(tài)氮）。4.3.2 試劑所有試劑除注明者外，均為分析純。分析用水應(yīng)符合GB

8、/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法三級水的規(guī)格。4.3.2.1 硫酸（GB/T 625）。4.3.2.2 30%過氧化氫（GB 6684）。4.3.2.3 氫氧化鈉：40%，（m/V）溶液，稱取40g氫氧化鈉（GB 629 分析純）溶于100mL水中。4.3.2.4 硼酸：2%（v/m）溶液，20g硼酸（GB 628）溶于1L約 60去離子水中，冷卻后再用稀堿調(diào)節(jié)溶液pH至4.5。使用前每升硼酸溶液中加入甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑20mL，并用稀酸或稀堿調(diào)節(jié)至微紅色，此時該溶液的PH值為4.5。4.3.2.5 甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑：0.5g溴甲酚綠(HG 3-1220)和0.1g

9、甲基紅(HG 3-958)于研缽中，加少量95%乙醇研磨至指示劑全溶為止，最后加95%的乙醇至100mL。4.3.2.6 硫酸標準液c（1/2 H2SO4）=0.02mol/L（GB 601）。4.3.3 儀器：4.3.3.1 消煮管：50mL或100mL。4.3.3.2 消煮爐或可調(diào)電爐：1000W。4.3.3.3 彎頸小漏斗：2cm。4.3.3.4 凱氏定氮儀：全自動或半自動。4.3.3.5 分析天平：感量為0.1mg。4.3.3.6 移液管：5，10mL。4.3.4 分析步驟4.3.4.1 試樣溶液制備稱取試樣0.5g，精確至0.001g，置于50mL消煮管中（勿將樣品粘附在瓶頸上）。先

10、滴入少些水濕潤樣品，然后加8mL硫酸，輕輕搖勻并放置過夜。在管口放一彎頸小漏斗，在消煮爐上先250消煮（溫度穩(wěn)定后計時，時間約30min），待H2SO4分解冒出大量白煙后再升高溫度至400，當(dāng)溶液呈均勻的棕黑色時取下。（時間約3h），稍冷后加10滴H2O2（注4.3.6.1），搖勻，再加熱至微沸（注4.3.6.2），消煮約5min，取下稍冷后，重復(fù)加H2O2 5-10滴，再消煮。如此重復(fù)3-5次，每次添加的H2O2的量應(yīng)逐次減少，消煮到溶液呈無色或清亮后（應(yīng)該為水的顏色），再加熱約5-10min，以除盡剩余的H2O2。將消煮管取下，冷卻。并用少量水沖洗彎頸漏斗，洗液流入消煮管。將消煮液無損的洗

11、入100mL容量瓶中，用水定容，搖勻。過濾或放置澄清后供氮的測定。4.3.4.2 空白試驗除不加試樣外，試劑用量和操作與測定試樣時相同。4.3.4.3 測定4.3.4.3.1 蒸餾前將配制好的氫氧化鈉，硫酸標準液，混合指示劑，對定氮儀進行充分預(yù)熱，進行空蒸鎦清洗管道，直至讀數(shù)穩(wěn)定。4.3.4.3.2 吸取上述待測液10.00mL（含NH4-N約1mg），注入凱氏定氮儀蒸餾管中，參數(shù)設(shè)置后，對待測液進行測定，其中加堿時間應(yīng)設(shè)為3S。 4.3.5 分析結(jié)果的表述全氮（N）含量以g/kg表示，按下式計算：全氮(N)=c(V-V0)×0.014×D×1000/m； 式中：

12、c酸標準溶液的濃度，mol/L；V滴定試樣所用的酸標準液體積，mL；V0滴定空白所用的酸標準液體積，mL；0.014N的摩爾質(zhì)量，kg/mol；m稱樣量，g；D分取倍數(shù)，定容體積/分取體積，100/10；所得結(jié)果應(yīng)保留小數(shù)點后三位。兩個平行測定結(jié)果允許絕對差應(yīng)0.06%。4.3.6 注意事項4.3.6.1 加H2O2時，要直接滴入瓶底溶液中，如果滴在瓶頸壁上，H2O2很快分解，失去氧化能力；也不要滴在小漏斗上，以免遺留的H2O2影響氮的比色測定。4.3.6.2 H2O2不宜加入過早，每次用量不可過多，加入后的消煮溫度不要過高，只要保持消煮液微沸即可。 定氮儀參數(shù)設(shè)置中，加堿量設(shè)置為3S；定氮儀

13、開機預(yù)熱后，要多空蒸幾次，等讀數(shù)穩(wěn)定后再進行樣品測定。4.4 全磷4.4.1 方法提要農(nóng)業(yè)級聚谷氨酸經(jīng)硫酸-過氧化氫消煮使各種形態(tài)的磷轉(zhuǎn)變成正磷酸。待測液中的正磷酸與偏釩酸和鉬酸能生成黃色的三元雜多酸，其吸光度與磷濃度成正比，可在波長400490nm處用吸光光度法測定。磷濃度較高時選用較長的波長，較低時選用較短波長。4.4.2 試劑 所有試劑除注明者外，均為分析純。分析用水應(yīng)符合GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法三級水的規(guī)格。4.4.2.1 硫酸（GB/T 625）。4.4.2.2 30%過氧化氫（GB 6684）。4.4.2.3 硝酸（GB/T 626）。4.4.2.4 釩鉬酸銨

14、溶液4.4.2.5 A液：稱取25.0g鉬酸銨（GB 657）溶于400mL水中；B液：稱取1.25g偏礬酸銨（HG 3-941）溶于300mL沸水中，冷卻后加250mL硝酸（4.3），冷卻。在攪拌下將A液緩緩注入B液中，用水稀釋至1L，混勻，貯于棕色瓶中。4.4.2.6 氫氧化鈉（GB/T 629）：10%（m/V）溶液。4.4.2.7 二硝基酚指示劑：0.2%（m/V）溶液，稱取0.2g 2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶于100mL水中。4.4.2.8 磷標準溶液: 50mg/L，0.2195g(干燥的KH2PO4(分析純)溶于水，加入5mL濃HNO3，轉(zhuǎn)移到1000mL的容量瓶中，然

15、后用水定容。4.4.2.9 硫酸：5%（V/V）溶液。4.4.3 儀器、設(shè)備4.4.3.1 消煮管：50mL或100mL。4.4.3.2 消煮爐或可調(diào)電爐：1000W。4.4.3.3 彎頸小漏斗：2cm。4.4.3.4 分光光度計。4.4.3.5 分析天平：感量為0.1mg。4.4.3.6 移液管：5，10mL。4.4.3.7 容量瓶：50，100，1000mL。4.4.4 分析步驟4.4.4.1 試樣溶液制備稱取試樣0.5g，精確至0.001g，置于50mL消煮管中（勿將樣品粘附在瓶頸上）。先滴入少些水濕潤樣品，然后加8mL硫酸，輕輕搖勻并放置過夜。在管口放一彎頸小漏斗，在消煮爐上先250消

16、煮（溫度穩(wěn)定后計時，時間約30min），待H2SO4分解冒出大量白煙后再升高溫度至400，當(dāng)溶液呈均勻的棕黑色時取下。（時間約3h），稍冷后加10滴H2O2（注4.4.6.1），搖勻，再加熱至微沸（注4.4.6.2），消煮約5min，取下稍冷后，重復(fù)加H2O2 5-10滴，再消煮。如此重復(fù)3-5次，每次添加的H2O2的量應(yīng)逐次減少，消煮到溶液呈無色或清亮后（應(yīng)該為水的顏色），再加熱約5-10min，以除盡剩余的H2O2。將消煮管取下，冷卻。并用少量水沖洗彎頸漏斗，洗液流入消煮管。將消煮液無損的洗入100mL容量瓶中，用水定容，搖勻。過濾或放置澄清后供磷的測定。4.4.4.2 空白溶液制備 除不

17、加試樣外，應(yīng)用的試劑和操作步驟同4.4.4.1。4.4.4.3 標準曲線繪制吸取磷標準溶液0，1.00，2.50，5.00，7.00，10.00，12.50，15.00mL分別置于8個50mL容量瓶中，加入與吸取試樣溶液等體積的空白溶液，加水至30mL左右，加2滴二硝基酚指示劑，用氫氧化鈉溶液和稀硫酸調(diào)節(jié)溶液呈微黃色，加10mL釩鉬酸銨溶液搖勻，用水定容。此溶液磷含量為0，1.00，2.50， 5.00，7.50，10.00，12.50，15.00 mg/L的標準溶液系列。在室溫15以上條件下放置20min后（最長不超過4h），在分光光度計波長440nm處用1cm光徑比色皿，以空白溶液調(diào)節(jié)儀器

18、零點，進行比色，讀取吸光度。根據(jù)磷濃度和吸光度繪制標準曲線或求出直線回歸方程。4.4.4.4 準確吸取定容，過濾或澄清后的消煮液10.00mL放入50mL容量瓶中，加水至30mL左右，與標準系列同條件顯色、比色，讀取吸光度。4.4.5 結(jié)果計算4.4.5.1 計算公式全磷（P）含量以g/kg表示，按下式計算：全磷（P）= c×V×D×10-3/m式中： C 從校準曲線或回歸方程求得的顯色液中磷的質(zhì)量濃度，mg/L；V顯色液體積，50mL；D分取倍數(shù)，定容體積/分取體積，100/10；m稱取試樣質(zhì)量，g；10-3將單位mL換算為L的換算因數(shù)。所得結(jié)果應(yīng)保留小數(shù)點后三

19、位，兩個平行測定結(jié)果允許絕對差應(yīng)0.04%。4.4.6 注意事項4.4.6.1 加H2O2時，要直接滴入瓶底溶液中，如果滴在瓶頸壁上，H2O2很快分解，失去氧化能力；也不要滴在小漏斗上，以免遺留的H2O2影響磷的比色測定。4.4.6.2 H2O2不宜加入過早，每次用量不可過多，加入后的消煮溫度不要過高，只要保持消煮液微沸即可。 4.4.6.3 一般室溫下，溫度對顯色影響不大，但室溫太低(如<15)時，需顯色30min。4.5 全鉀4.5.1 方法提要農(nóng)業(yè)級聚谷氨酸經(jīng)硝酸、高氯酸消煮后，消化液中的鉀用火焰分光光度計測定?；鹧娣止夤舛确ㄊ抢没鹧孀黾ぐl(fā)源，使鉀原子激發(fā)。根據(jù)激發(fā)出能量的大小測

20、定鉀素的含量。4.5.2 試劑 所有試劑除注明者外，均為分析純。分析用水應(yīng)符合GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法三級水的規(guī)格。4.5.2.1 硫酸（GB/T 625）。4.5.2.2 30%過氧化氫（GB 6684）。4.5.2.3 鉀標準溶液：稱取1.907g經(jīng)110條件下干燥2h的氯化鉀（GB 646），溶于水，于1L容量瓶中定容，即為1000mg/L鉀標準溶液，將其存于塑料瓶中。4.5.3 儀器與設(shè)備4.5.3.1 消煮管：50mL或100mL。4.5.3.2 消煮爐或可調(diào)電爐：1000W。4.5.3.3 彎頸小漏斗：2cm。4.5.3.4 火焰光度計。4.5.3.5 分析天

21、平：感量為0.1mg。4.5.3.6 移液管：5，10mL。4.5.3.7 容量瓶：50，100，1000mL。4.5.4 分析步驟4.5.4.1 試樣溶液制備稱取試樣0.5g，精確至0.001g，置于50mL消煮管中（勿將樣品粘附在瓶頸上）。先滴入少些水濕潤樣品，然后加8mL硫酸，輕輕搖勻并放置過夜。在管口放一彎頸小漏斗，在消煮爐上先250消煮（溫度穩(wěn)定后計時，時間約30min），待H2SO4分解冒出大量白煙后再升高溫度至400，當(dāng)溶液呈均勻的棕黑色時取下。（時間約3h），稍冷后加10滴H2O2（4.5.6.1），搖勻，再加熱至微沸（4.5.6.2），消煮約5min，取下稍冷后，重復(fù)加H2O

22、2 5-10滴，再消煮。如此重復(fù)3-5次，每次添加的H2O2的量應(yīng)逐次減少，消煮到溶液呈無色或清亮后（應(yīng)該為水的顏色），再加熱約5-10min，以除盡剩余的H2O2。將消煮管取下，冷卻。并用少量水沖洗彎頸漏斗，洗液流入消煮管。將消煮液無損的洗入100mL容量瓶中，用水定容，搖勻。過濾或放置澄清后供鉀的測定。4.5.4.2 空白溶液制備除不加試樣外，應(yīng)用的試劑和操作步驟同4.5.4.1。4.5.4.3 標準曲線繪制準確吸取鉀標準溶液（3.3）0，1.00，2.50，10.00，20.00 mL，分別放入50mL容量瓶中，加入與吸取試樣溶液等體積的空白溶液，(使標準溶液中的離子成分和待測液相近)，

23、加水定容。即得0，2，5，10，20，40 mg/L K標準系列溶液。在火焰光度計上，以濃度最高的標準溶液定火焰光度計檢流計的滿度(一般只定到90)，以空白溶液調(diào)節(jié)儀器零點，然后從稀到濃依次進行測定，記錄檢流計讀數(shù)，以檢流計讀數(shù)為縱坐標，鉀濃度為橫坐標繪制校準曲線或求直線回歸方程。4.5.4.4 測定吸取定容后的消煮液10.00mL放入50mL容量瓶中，用水定容，直接在火焰光度計上測定，讀取檢流計讀數(shù)，每5個樣品必須用鉀標準溶液校正儀器。4.5.5 結(jié)果計算4.5.5.1 計算公式全鉀（K）含量以g/kg表示，按下式計算：全鉀(K)= C×V×D×10-3/m式中

24、：C從校準曲線或回歸方程求得的測讀液中K的濃度，mg/L；V消煮液定容體積，mL；D分取倍數(shù)，定容體積/分取體積，100/10；m稱樣質(zhì)量，g；10-3將mL單位換算為L的換算因數(shù)。所得結(jié)果應(yīng)保留小數(shù)點后三位，兩個平行測定結(jié)果允許絕對差應(yīng)0.12%。4.5.6 注意事項4.5.6.1 加H2O2時，要直接滴入瓶底溶液中，如果滴在瓶頸壁上，H2O2很快分解，失去氧化能力；也不要滴在小漏斗上，以免遺留的H2O2影響鉀的比色測定。4.5.6.2 H2O2不宜加入過早，每次用量不可過多，加入后的消煮溫度不要過高，只要保持消煮液微沸即可。 4.6 不溶物含量按NY/T 1115-2006規(guī)定的方法測定。

25、4.7 pH4.7.1 方法原理試樣經(jīng)水浸泡平衡，直接用pH酸度計測定。4.7.2 儀器實驗室常用儀器及pH酸度計。4.7.3 試劑和溶液4.7.3.1 pH 4.01標準緩沖液：稱取經(jīng)110烘1h的鄰苯二鉀酸氫鉀（KHC8H4O4）10.21g，用水溶解，稀釋定容至1L。4.7.3.2 pH 6.87標準緩沖液：稱取經(jīng)120烘2h的磷酸二氫鉀（KH2PO4）3.398g和經(jīng)120 130烘2h的無水磷酸氫二鈉（Na2HPO4）3.53g，用水溶解，稀釋定容至1L。4.7.3.3 pH 9.18標準緩沖液：稱取硼砂（Na2B4O710H2O）（在盛有蔗糖和食鹽飽和溶液的干燥器中平衡一周）3.8g，用水溶