交叉配血知識

1、交叉配血交叉配血 知識講座知識講座 2018/11/8 1 ?RBC表面有豐富唾液酸，在中性環(huán)境中帶負電荷，互相分離?？赏ㄟ^縮短細胞間距，以及在致敏細胞上的抗體之間搭橋使RBC凝集。 ?凝集一般為二個步驟 ? ? ? ? ? ? 抗體吸附于RBC抗原上成為致敏狀態(tài) 致敏RBC凝集形成塊狀 2018/11/8 2 一一 一一 二二 二標本的采集及要求標本的采集及要求 血型血型 不規(guī)則抗體的篩選不規(guī)則抗體的篩選 三 四四四 交叉配血交叉配血 3 2018/11/8 標本的采集與要求標本的采集與要求 2018/11/8 4 1.標本要新鮮: 標本要具有代表性，標本要具有代表性，能代表患者目前狀況能代

2、表患者目前狀況 ? 前三個月內(nèi)輸血或妊娠 :配血試驗標本抽取48h,避免因回憶反應產(chǎn)生的抗體漏檢。 ? 新近的輸血或妊娠： 可引起意外抗體迅速出現(xiàn) ,如果對病人的輸血史或人身史不明 ,使用的標本必須是輸血前48h內(nèi)抽取的。 ? 血量約為5ml 。 2.使用右旋糖酐、pvp等： ? 治療前抽取標本備用 ,防止RBC緡錢狀凝集的干擾 2018/11/8 5 3.24小時內(nèi)輸了12u血后： ? 可輸注未經(jīng)交叉配血的 ABO、RH同型的血液,因為原始交叉配血用的血清已不能代表患者血清的情況。 4.防止血樣的稀釋和溶血的產(chǎn)生： ? 溶血標本一般不使用 ,因為血清中游離血紅蛋白可掩蓋在輸血前實驗中抗體反映

3、引起的溶血 5.標本標識：唯一性標識無誤、與輸血申請單一致 6.使用血漿標本：應排除纖維蛋白原的干擾 7.輸血后標本保存：2-8,至少一周。 2018/11/8 6 血血 型型 1. 1. 紅細胞懸液的配制紅細胞懸液的配制 2. 2. 離心力的標準離心力的標準 3. 3. 離心后結果觀察離心后結果觀察 4. 4. 鹽水試驗鹽水試驗 5. 5. 正反定型結果不一致原因及處理正反定型結果不一致原因及處理 2018/11/8 7 1. 1.紅細胞懸液的配制紅細胞懸液的配制 ? 洗滌洗滌 洗滌目的: 去除RBC表面物質 少量的血漿蛋白 已溶解紅細胞的基質（有競爭抗體的作用） 抗凝劑（有抗補體的作用）

4、至少要用大量生理鹽水洗一次 ? 濃度濃度 ?2%：一般用于抗體效價的測定 ?5%：一般用于血型鑒定、配血試驗、抗球蛋白試驗等大多數(shù)血型血清學試驗 ?10%：一般用于測定抗體的親和力試驗 2018/11/8 8 2. 2. 離心力的標準離心力的標準 ? 不同規(guī)格離心機，力矩不同，統(tǒng)一離心轉速，但沒有統(tǒng)一離心力。 離心轉速換算公式： RCF = 1.118 10-5 (rpm) 2 R (cm) 3. 3. 離心后結果觀察注意事項離心后結果觀察注意事項 ? 將試管成30-45角拿在手上，細胞扣朝上，手腕輕輕用力，用液體去沖細胞扣。 - 細胞成細沙狀沿試管壁流下 + 細胞成塊狀或成齒狀沿試管壁流下

5、? 切不可用力使勁搖試管，那樣凝集顆粒會被搖散，弱凝集則會誤判為陰性。 2018/11/8 9 常用的記錄符號及所示的凝集強度 4+ 3+ 2+ 1W+ + O 一個大的凝集塊,背景透明,無游離細胞 數(shù)個大凝集塊,背景透明,無游離細胞 許多小凝集塊,肉眼可見,大小均勻,背景基本透明,有游離細胞 很小的凝集塊,肉眼可見,背景不透明,游離細胞較多,需要微小凝集塊,肉眼很難看清,背景混濁,要用顯微鏡觀察 用顯微鏡觀察 無凝集,無溶血,全部是游離細胞,要用顯微鏡觀察 P部分溶血 H H 完全溶血 W 混合外觀 2018/11/8 10 4. 4.鹽水試驗鹽水試驗 ? 多采用立即離心法 ? 正確的操作是

6、：RBC懸液加到血清后立即離心并觀察結果 反應時間過長而延誤離心對ABO血型系統(tǒng)的抗體檢出影響 室溫2分鐘后離心 室溫5分鐘后離心 可能使3+4+的凝集減弱為0+ 1+,并有溶血 原有凝集可能消失,并有溶血 有的標本延遲離心 原有凝集會變?yōu)榧炔荒膊蝗苎?難以發(fā)現(xiàn)ABO血型的不配合。（多發(fā)生在O型人的血清抗體與A型、B型或AB型紅細胞反應的試驗中,發(fā)生率為2%-3%.發(fā)生機制是反應強的抗A、抗B和抗原強度強的A、B抗原作用,補體C1在有Ca2+存在的條件下,固定到紅細胞膜上,妨礙了紅細胞的凝集,進一步可能引起溶血） 解決的方法： A:血清與紅細胞混合后立即離心。 B:用血漿或滅活的血清做試驗

7、C:用EDTA鹽水配制紅細胞懸液, D:稀釋血清 11 2018/11/8 ?加樣時先加血清再加紅細胞，以避免漏加； ?抗體和抗原的比例一般為 2：1。 ?必須要做正反定型實驗才能確定血型。 ?正定型試驗有條件可加做抗AB（檢測弱A、弱B ） ?反定型一定要加做O細胞,（發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體） 2018/11/8 12 5.5.正反定型結果不一致正反定型結果不一致 ?原因：技術、受檢紅細胞或血清本身 （1）技術和管理錯誤 ?器材不潔 假陽 ?試劑污染或不足 假陽 ?標本和試劑搞錯 假陽 、假陰 ?離心過度或不足 假陽 、假陰 ?結果記錄或判斷錯誤 假陽 、假陰 ?漏加試劑 假陰 ?陽性反應產(chǎn)生溶血現(xiàn)

8、象未能識別 假陰 2018/11/8 13 （2）標準血清效價太低、親和力不強。如抗A血清效價不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。 （3）紅細胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當，使反應不明顯，誤判為陰性反應。 （4）血清異常 華通膠或血清蛋白異常引起串錢狀形成，影響反定性結果 （5）紅細胞致敏 在含高蛋白介質試劑中可發(fā)生凝集，產(chǎn)生假陽性 （6）近期曾異型輸血，病人血液標本成為不同型別的紅細胞混合物，定型時顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。 （7）疾病因素導致抗原減弱 某些白血病病人ABO血型抗原可受到抑制，檢出困難。 （8）紅細胞多凝集現(xiàn)象 RBC因遺傳或獲得性的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。

9、 2018/11/8 14 （9 9） 獲得性類獲得性類B B 由于G-桿菌作用，RBC可獲得“類B”活性 （1010）異常血漿蛋白）異常血漿蛋白 病人血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例異常和高濃度的FIB等能導致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象 （1111）近期內(nèi)進行大量的血漿置換血漿置換治療，影響抗體效價，造成反定型困難。 （1212）不規(guī)則抗體的產(chǎn)生）不規(guī)則抗體的產(chǎn)生 受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外的不規(guī)則抗體，如自身抗I，與試劑A、B細胞上的相應抗原起反應。 （1313）低丙種球蛋白血癥）低丙種球蛋白血癥 可能會因免疫球蛋白水平全面下降使血清定型時不見凝集或僅見弱凝集反應。 （1414）藥

10、物等因素）藥物等因素 藥物、右旋糖酐等靜脈注射某些造影劑可引起紅細胞聚集而類似凝集。 （1515）年齡因素）年齡因素 如新生兒、老年人等。 2018/11/8 15 ? 正反定型不一致的處理方法正反定型不一致的處理方法 ? 首先要重做試驗一次。 嚴格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質量合格的試劑以及細心觀察結果，可解決明顯的問題. ? 對一些疑難問題需進一步檢查?？沙醪讲扇∫韵麓胧?1)重新抽樣，糾正因污染或搞錯標本造成的不符。 2)將紅細胞洗滌數(shù)次，配成5%鹽水細胞懸液，用抗A、抗B、抗A+B做實驗，可得到其他有用信息。有條件加做抗H試驗 3)對受檢者作直接抗人球蛋白試驗，看RBC有沒有被致敏 4)如疑

11、為A抗原或B抗原減弱，可將受檢紅細胞與抗A或抗B血清作吸收放散試驗。 5)如試驗結果紅細胞成緡錢狀排列，加等滲鹽水1滴混勻，往往可使緡錢現(xiàn)象消失。 6)做反定型試驗時需要加做O細胞。 2018/11/8 16 ? 疑難血型病例 1.白血病血型變異 2.血漿蛋白紊亂 3. 類B 4.多/全凝集 5.冷凝集 6.ABO亞型 2018/11/8 17 三、不規(guī)則抗體的篩選三、不規(guī)則抗體的篩選 1.篩選目的篩選目的 2.篩選步驟篩選步驟 3.不規(guī)則抗體篩選與交叉配血結果分析不規(guī)則抗體篩選與交叉配血結果分析 2018/11/8 18 ?定義：抗A、抗B以外的血型抗體，多為抗體。主要是經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺

12、激產(chǎn)生。 ?血型抗體是體內(nèi)免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的針對血型抗原發(fā)生特 異性反應的一類免疫球蛋白類物質。人類血清中有5種類型：G、M、A、D、E，其中IgM、G是最重要的2種抗體。 ? RBC血型抗體分為： 完全抗體：能在鹽水中凝集相應RBC， 又稱鹽水抗體。 主要是分子量較大的IgM 不完全抗體：能結合RBC上抗原致敏RBC ， 但在鹽水中不能使之凝集。主要是分子量小的IgG， 需用抗球蛋白 ? 2018/11/8 19 1.篩選目的： ? 發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體，以確保安全有效用血。 ? 最好獻血者血清也作不規(guī)則抗體的篩選，如有發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，鑒定此抗體，找出能與其相配合的血液，不可隨便用于輸血

13、。 ? 不規(guī)則抗體多為IgG抗體，鹽水介質中不能凝集，只能致敏相應抗原的RBC,必須通過特殊介質(酶、抗人球蛋白、poly等)才能使致敏RBC出現(xiàn)凝集反應，這些方法的選擇可按抗體的血清學行為和試驗的具體條件來確定。 系統(tǒng)相同,其它紅細胞血型系統(tǒng)未必相同。 ? 臨床上通常所稱的“同型血”是指ABO血型系統(tǒng)和Rh血型 如果交叉配血不仔細,或只用鹽水介質配血,則可能檢查不出ABO血型系統(tǒng)之外的不規(guī)則抗體,而此抗體與相應抗原發(fā)生免疫反應,可導致溶血性輸血反應的發(fā)生。 20 2018/11/8 2. 2.篩選細胞：篩選細胞： 通常是由2-3個單人份的O型紅細胞組成一套篩選細胞試劑，包括以下常見的抗原：

14、Rh系統(tǒng) 、MNSs系統(tǒng)、P系統(tǒng)、Lewis系統(tǒng)、Duffy系統(tǒng)等。 3. 3.抗體篩選試驗局限性：抗體篩選試驗局限性： 不一定能檢出所有有臨床意義的不規(guī)則抗體。一些抗低頻率抗原的抗體則可能漏檢。 2018/11/8 21 不規(guī)則抗體篩選的操作步驟 被檢血清 + 抗體篩選細胞 鹽水介質或非鹽水介質（凝聚胺、抗球蛋白、酶） 對Kell系統(tǒng)抗體不理想，陰性結果需做抗球。中國人群幾乎100%為篩選篩選III 病人紅細胞病人紅細胞 kk型，具有K抗原的幾乎為0，至今未發(fā)現(xiàn)Kell系統(tǒng)抗體 1. 篩選細胞篩選細胞 I 篩選篩選II 病人血清病人血清 凝聚胺含多價陽離子，中和RBC表面負電荷，減少RBC間

15、距離 病人血清病人血清 病人血清病人血清 病人血清病人血清 枸櫞酸鈉重懸液，為負電荷，中和凝聚胺正電荷，使正常RBC凝集解散 3. 4. PolyGram 100ul 血清血清 + 篩選細胞篩選細胞I Resuspending 100ul 2. LIM 600ul 低離子介質中孵育，促進抗體與RBC結合 2018/11/8 血清血清 + + + 篩選細胞篩選細胞II 篩選細胞篩選細胞III 病人紅細胞病人紅細胞 血清血清 血清血清 非特異性凝集 無凝集則重做 特異性凝集 22 2018/11/8 4. 抗 篩 和 交 叉 配 血 結 果 分 析 抗篩陰性，鹽水直接離心交叉配血不相容 ?獻血者紅

16、細胞是ABO血型不相容 ?存在在室溫反應的同種異體抗體 ?獻血者的紅細胞是多凝集紅細胞 抗篩陰性，酶試驗、抗球蛋白交叉配血試驗等不相容 ?獻血者紅細胞DAT試驗為陽性 ?受血者血清抗體活性很弱，則抗篩試驗成陰性 ?抗體與低頻率抗原反應 抗篩陽性，交叉配血相容 ?自身抗-H ?抗-Lebh ?抗篩陽性，但獻血者紅細胞可能正好不含與相應的抗原， 因此配血可以相合。 抗篩陽性，交叉配血不相容 ?同種異體抗體存在，自身對照成陰性 ?同種異體抗體存在，自身對照成陽性 ?冷反應自身抗體能引起難以確定的陽性 ?溫反應自身抗體能引起難以確定的陽性 ?“錢串狀”紅細胞形成引起非真實的陽性結果 23 輸血前試驗“

17、 三保險” 血型、抗篩、交叉配血 相合% 隨機 64 ABO 99.4 Rh 99.8 抗篩 99.94 交叉配血 99.95 自身輸血 100 2018/11/8 24 四、交叉配血四、交叉配血 交叉配血試驗也稱配合性試驗，實際上是檢查不配合性，使病人，獻血者血液之間沒有相對應的抗原、抗體成分（如：患者體內(nèi)有抗 A抗體，獻血者RBC上就不能有A抗原） ? 試驗應在37下進行。 ? 2018/11/8 25 ?用于IgM抗體的檢出、鹽水配血試驗、用鹽水抗體鑒定的血 鹽水法 聚凝胺 酶技術 AGT 抗人球 2018/11/8 型抗原，如ABO、MN、P等血型系統(tǒng)的抗原。 ?當IgG抗A、抗B的濃

18、度足夠大時，在鹽水介質里也能與相應的紅細胞發(fā)生凝集反應 ?Poly是帶高價陽離子的多聚物，溶解后能產(chǎn)生正電荷，中和RBC表面負電荷，縮短RBC間距，引起正常RBC可逆非特異性凝集、抗體致敏的紅細胞則凝集不可逆 ?蛋白水解酶能消化破壞RBC表面唾液酸，減少RBC表面負電菏，縮短RBC間距，IgG抗體能與有相應抗原的RBC產(chǎn)生凝集。 ?適合：酶法能顯著增強Rh和Kidd系統(tǒng)的抗原抗體反應， ?不適合：蛋白酶破壞M、N、S、s、Fya、Fyb抗原 ?又稱Coombs試驗,是檢查IgG抗體的最有效方法。 ?除可測定RBC上IgG抗體外,還可測定IgM、IgA,、補體C3、C4 ?直接：測體內(nèi)致敏RBC

19、 用于檢查紅細胞是否已被不完全抗體所致敏,如新生兒溶血病、溶血性輸血反應、自身免疫性溶血性貧血. ?間接：測血清中不完全抗體 26 . 常用于血型鑒定、抗體的檢出和鑒定、輸血前交叉配血試驗等酶處理細胞的凝集試驗方法 也稱直接法，菠蘿酶和木瓜酶適用于一期法。操 一期 作時在已標記好的試管中加入100ul的血清和50ul 酶法 的紅細胞懸液，再加50ul的酶溶液，37孵育15 分鐘，1000轉/分離心1分鐘，輕搖后觀察結果 也稱間接法，木瓜酶和無花果酶適用于二期法。 二期分兩步，第一步是酶處理紅細胞：在1份洗滌 的壓積紅細胞中加兩份木瓜酶溶液，37孵育30 二期 分鐘，用大量的Ph7。4的PBS洗

20、滌3次，用生理鹽 酶法 水配成5%的懸液備用。第二步是在已標記好的試 管中加受檢血清100ul ,再加50ul酶處理過的紅細 胞懸液，37孵育15-30分鐘觀察結果，凝集和溶 血皆屬于陽性反應。 2018/11/8 27 ? 交叉配血試驗通常包括： ?主 側（受者血清+供者RBC）：測對供者RBC反應的抗體 ?次 側（受者RBC+供者血清）：測對受者RBC反應的抗體 ?自身對照（受者RBC+受者血清）： 顯示自身抗體、DAT陽性、RBC緡錢狀假陽性的存在 ? 除作鹽水介質外，至少還要做聚凝胺法，有條件加做抗球、酶法等。在配血的任何步驟中均不產(chǎn)生溶血或凝集獻血者的主管 次管 自身 血液才能給病人

21、輸注 2018/11/8 28 ? 實際當中難免有抗篩陰性，但交叉配血不合的情況，應依據(jù)實際情況合理解釋： ? 緡錢狀形成：血清在室溫和37中，使RBC假凝集。常見于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、霍奇金病、其他表現(xiàn)為血沉加快的病例。 ? 交叉配血不相容，顯示有未撿明的同種抗體存在 ? 室溫反應中顯示有自身抗體 ? AGT 試驗中顯示有自身抗體 ? 抗篩陰性，交叉配血陽性，提示可能有未檢明的抗體存在 ? 離心力不當，造成假陰性 ? 水浴箱溫度不正確，造成錯誤結果 ? RBC不正確的洗滌和懸浮，使AGT試驗假陰性 ? 血清中如含有溶血性抗體，則相應RBC被溶解而不是凝集，交叉配血應為陽性。此時應滅活血清再做試驗。 29 2018/11/8 幾種交叉配血方法的比較 方法 鹽水法 酶法