第06章電泳技術和常用電泳儀

1、第六章第六章 電泳技術和常用電泳儀電泳技術和常用電泳儀第六章第六章 電泳技術和常用電泳儀電泳技術和常用電泳儀 一、概述一、概述 generalization) 電泳（電泳（electrophoresis）是指帶電荷的溶質或）是指帶電荷的溶質或粒子在電場中向著與其本身所帶電荷相反的電極粒子在電場中向著與其本身所帶電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。利用電泳現(xiàn)象將多組分物質分離、移動的現(xiàn)象。利用電泳現(xiàn)象將多組分物質分離、分析的技術叫做電泳技術（分析的技術叫做電泳技術（electrophoresis technique）。可以實現(xiàn)電泳分離技術的儀器稱）。可以實現(xiàn)電泳分離技術的儀器稱之為電泳儀（之為電泳儀（el

2、ectrophoresister）。）。 第六章第六章 電泳技術和常用電泳儀電泳技術和常用電泳儀 目前，電泳技術已廣泛用于蛋白質、多肽、電泳技術已廣泛用于蛋白質、多肽、氨基酸、核苷酸、無機離子等成份的分離和鑒定，氨基酸、核苷酸、無機離子等成份的分離和鑒定，甚至還用于細胞與病毒的研究。甚至還用于細胞與病毒的研究。 臨床常用的電泳分析方法主要有醋酸纖維素臨床常用的電泳分析方法主要有醋酸纖維素薄膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳薄膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳和毛細管電泳等。和毛細管電泳等。 第一節(jié)第一節(jié) 電泳原理電泳原理第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法第三

3、節(jié)第三節(jié) 常用電泳設備的基本結構及技術指標常用電泳設備的基本結構及技術指標第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式第五節(jié)第五節(jié) 電泳儀的臨床應用電泳儀的臨床應用第六節(jié)第六節(jié) 電泳技術的質量控制電泳技術的質量控制本章目錄本章目錄第一節(jié)第一節(jié) 電泳原理電泳原理 一、電泳的基本原理一、電泳的基本原理 物質分子在正常情況下一般不帶電，即所帶正負電荷物質分子在正常情況下一般不帶電，即所帶正負電荷量相量相 等，故不顯示帶電性。但是在一定的物理作用或化等，故不顯示帶電性。但是在一定的物理作用或化學反應條件下，某些物質分子會成為帶電的離子（或粒學反應條件下，某些物質分子會成為

4、帶電的離子（或粒子），不同的物質，由于其帶電性質、顆粒形狀和大小不子），不同的物質，由于其帶電性質、顆粒形狀和大小不同，因而在一定的電場同，因而在一定的電場 中它們的移動方向和移中它們的移動方向和移 動速度也不同，因此可動速度也不同，因此可 使它們分離。使它們分離。06-01電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象。第一節(jié)第一節(jié) 電泳原理電泳原理 若將帶凈電荷若將帶凈電荷Q的粒子放入電場，則該粒子所受的粒子放入電場，則該粒子所受到的電荷引力為：到的電荷引力為： F引引=E Q （6-1） 在溶液中在溶液中,運動粒子與溶液之間存在阻力運動粒子與溶液之間存在阻力F阻阻 F阻阻=6rV （6-2）

5、當當F引引=F阻阻時時 EQ= 6rV V = EQ/6r （6-3） 由上式可以看出由上式可以看出,粒子的移動速度粒子的移動速度(泳動速度泳動速度V)與與電場強度電場強度(E)和粒子所帶電荷量和粒子所帶電荷量(Q)成正比成正比,而與粒子的而與粒子的半徑半徑(r)及溶液的粘度及溶液的粘度()成反比。成反比。第一節(jié)第一節(jié) 電泳原理電泳原理 二、影響電泳的外界因素二、影響電泳的外界因素 （一）電場強度（一）電場強度 （二）溶液的（二）溶液的pHpH值值 （三）溶液的離子強度（三）溶液的離子強度 （四）電滲作用（四）電滲作用 （五）粒子的遷移率（五）粒子的遷移率 （六）吸附作用（六）吸附作用第二節(jié)第

6、二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法一、電泳技術的分類一、電泳技術的分類 （一）根據(jù)工作原理的不同：可分為移界電泳、（一）根據(jù)工作原理的不同：可分為移界電泳、區(qū)帶電泳、等速電泳、等電聚焦電泳、免疫電區(qū)帶電泳、等速電泳、等電聚焦電泳、免疫電泳等。泳等。 （二）根據(jù)有無固體支持物可分為：自由電泳和（二）根據(jù)有無固體支持物可分為：自由電泳和支持物電泳支持物電泳 第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法（三）根據(jù)支持載體的位置或形狀可分成：水平電泳、（三）根據(jù)支持載體的位置或形狀可分成：水平電泳、垂直電泳、板狀電泳、柱狀電泳、垂直電泳、板狀電泳、柱狀電泳、U U型管電泳

7、、型管電泳、倒倒V V字形電泳、毛細管電泳等。字形電泳、毛細管電泳等。（四）根據(jù)支持物的特點又可分為：（四）根據(jù)支持物的特點又可分為： 無阻滯支持物電泳。無阻滯支持物電泳。高密度的凝膠電泳。高密度的凝膠電泳。 （五）根據(jù)電源控制的不同，一般可分為以下（五）根據(jù)電源控制的不同，一般可分為以下3 3類：類： 1. 1. 恒壓電泳恒壓電泳; 2. ; 2. 恒流電泳恒流電泳; 3. ; 3. 恒功率電泳恒功率電泳 。第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法 （六）根據(jù)自動化程度的不同，可分為半自動和（六）根據(jù)自動化程度的不同，可分為半自動和 全自動型。全自動型。 （七）根據(jù)其功能的

8、不同，可分為制備型、分析（七）根據(jù)其功能的不同，可分為制備型、分析 型、轉移型、濃縮型等。型、轉移型、濃縮型等。 （八）根據(jù)用法的類型可分為：雙向電泳、交叉（八）根據(jù)用法的類型可分為：雙向電泳、交叉 電泳、連續(xù)紙電泳、電泳層析相結合技術等。電泳、連續(xù)紙電泳、電泳層析相結合技術等。 （九）根據(jù)不同的使用目的可分為：核酸電泳、（九）根據(jù)不同的使用目的可分為：核酸電泳、 血清蛋白電泳、制備電泳、血清蛋白電泳、制備電泳、DNADNA測序電泳等。測序電泳等。第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法 二、電泳方法簡介二、電泳方法簡介 （一）紙電泳（一）紙電泳 指用濾紙作為支持載體的電泳方

9、法。指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區(qū)帶電泳。是最早使用的區(qū)帶電泳。 06-02 平臥式電泳槽裝置示意圖 將濾紙條水平地架設在將濾紙條水平地架設在兩個裝有緩沖溶液的容器之兩個裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點于濾紙中央。當間，樣品點于濾紙中央。當濾紙條被緩沖液潤濕后，再濾紙條被緩沖液潤濕后，再蓋上絕緣密封罩，即可由電蓋上絕緣密封罩，即可由電泳電源輸入直流電壓泳電源輸入直流電壓（100V100V1000V1000V）進行電泳進行電泳。 第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法（二）醋酸纖維素薄膜電泳（二）醋酸纖維素薄膜電泳 電泳時經(jīng)過膜的預處理、加樣、電泳、染色、電泳時

10、經(jīng)過膜的預處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點是分離速度快、點是分離速度快、 電泳時間短、樣品電泳時間短、樣品 用量少。因此特別用量少。因此特別 適合于病理情況下適合于病理情況下 微量異常蛋白的檢測。微量異常蛋白的檢測。 06-03 血清蛋白的電泳圖譜 第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法 （三）凝膠電泳（三）凝膠電泳 由區(qū)帶電泳中派生出一種用凝膠物質作支持物進行電由區(qū)帶電泳中派生出一種用凝膠物質作支持物進行電泳的方式，被稱為凝膠電泳。普通的凝膠電泳在板上進泳的方式，被稱為凝膠電泳。普通的凝膠電

11、泳在板上進行，以凝膠作為介質。電泳中常用的凝膠為葡聚糖、交行，以凝膠作為介質。電泳中常用的凝膠為葡聚糖、交聯(lián)聚丙烯酰胺和瓊脂糖。聯(lián)聚丙烯酰胺和瓊脂糖。 它具有機械強度好、彈性大、它具有機械強度好、彈性大、 透明、化學穩(wěn)定性高、無電滲透明、化學穩(wěn)定性高、無電滲 作用、設備簡單、樣品量小作用、設備簡單、樣品量小 (1(1100g100g）、分辨率高等優(yōu)點。、分辨率高等優(yōu)點。 06-04 凝膠電泳圖凝膠電泳圖第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法（四）等電聚焦電泳（四）等電聚焦電泳 1 等電聚焦電泳過程等電聚焦電泳過程 一種利用有一種利用有pH值梯度的介值梯度的介質，分離等電點不

12、同的蛋白質的電泳技術。質，分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。 將等電點不同的蛋白質混合將等電點不同的蛋白質混合物加入有物加入有pHpH值梯度的凝膠介質中，值梯度的凝膠介質中，在電場內經(jīng)過一段時間后，各組在電場內經(jīng)過一段時間后，各組分將分別聚焦在各自等電點相應分將分別聚焦在各自等電點相應的的pHpH值位置上，最后，樣品的各值位置上，最后，樣品的各組分在各自的等電點聚焦成一條組分在各自的等電點聚焦成一條清晰而穩(wěn)定的窄帶。清晰而穩(wěn)定的窄帶。 06-05 凈電荷與PH的關系曲線 第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法 2 2等電聚焦電泳的特點等電聚焦電泳的特點 使用兩性載體電解質，

13、在電極之間形成穩(wěn)使用兩性載體電解質，在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的定、連續(xù)、線性的pHpH梯度；梯度；由于由于“聚焦效應聚焦效應”，即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面；即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面；電泳速度快電泳速度快; ;分辨率高分辨率高; ;加入樣品的位置可加入樣品的位置可任意選擇；任意選擇；可用于測定蛋白質類物質的等電可用于測定蛋白質類物質的等電點點; ;適用于中、大分子量（如蛋白質、肽類、同適用于中、大分子量（如蛋白質、肽類、同工酶等）生物組分的分離分析。工酶等）生物組分的分離分析。第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法（五）等速電泳（五）等

14、速電泳 采用兩種不同濃度的電解質組成，采用兩種不同濃度的電解質組成，一種為前導電解質，充滿整個毛細管柱；另一種一種為前導電解質，充滿整個毛細管柱；另一種為尾隨電解質，置于一端的電泳槽中。前導電解為尾隨電解質，置于一端的電泳槽中。前導電解質的遷移率高于任何樣品組分，后者則低于任何質的遷移率高于任何樣品組分，后者則低于任何樣品組分，被分離的組分按其不同的遷移率夾在樣品組分，被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間，在強電場的作用下，各被分離組分在前導中間，在強電場的作用下，各被分離組分在前導電解質與尾隨電解電解質與尾隨電解 質之間的空隙中移動，質之間的空隙中移動， 實現(xiàn)分離。實現(xiàn)分離。 06-06 等

15、速電泳示意圖 第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法（六）雙向凝膠電泳（二維電泳）（六）雙向凝膠電泳（二維電泳） 第一向采用等電聚焦第一向采用等電聚焦 根據(jù)復雜的蛋白質成根據(jù)復雜的蛋白質成分中各個蛋白質的分中各個蛋白質的PIPI的不同，將蛋白質進行分離。的不同，將蛋白質進行分離。 第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠電泳 （SDS-PAGESDS-PAGE）就是按蛋白質分子量的大）就是按蛋白質分子量的大小使其在垂直方向進行分離。其結果不再是條帶小使其在垂直方向進行分離。其結果不再是條帶狀，而是呈現(xiàn)為斑點狀狀，而是呈現(xiàn)為斑點

16、狀 。第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法膠性 PH9中電加解入質了溶雙液 PH3加上電場后建立穩(wěn)定PH梯度蛋白質溶液加入，建立電場染色后，蛋白質因PI值不同，沿PH梯度分離開第一向等電聚焦等電聚焦PI逐漸降低等電聚焦膠放在SDS聚丙烯酰胺凝膠上 第二向SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分子量逐漸降低PI 逐漸降低 06-07 雙向凝膠電泳示意圖雙向凝膠電泳示意圖第二節(jié)第二節(jié) 常用電泳技術和電泳方法常用電泳技術和電泳方法 (七）免疫電泳七）免疫電泳 免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴散兩種免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴散兩種方法的結合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進行電泳，方法的結

17、合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開，然后加入抗體做雙相免疫擴散，把已分離的各抗原成然后加入抗體做雙相免疫擴散，把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴散而相遇，在二者比例適當?shù)牡胤峙c抗體在瓊脂中擴散而相遇，在二者比例適當?shù)牡胤?，形成肉眼可見的沉淀弧。方，形成肉眼可見的沉淀弧。第三?jié)第三節(jié) 常用電泳設備的基本結構及技術指標常用電泳設備的基本結構及技術指標一、常用電泳設備的基本結構一、常用電泳設備的基本結構（一）電泳電源（一）電泳電源（二）電泳槽（二）電泳槽（三）附加裝置（三）附加裝置 06-08 平臥式電泳

18、槽裝置示意圖平臥式電泳槽裝置示意圖第三節(jié)第三節(jié) 常用電泳設備的基本結構及技術指標常用電泳設備的基本結構及技術指標二、電泳儀的主要技術指標二、電泳儀的主要技術指標 1 輸出電壓 8 連續(xù)工作時間 2 輸出電流 9 保護措施 3 輸出功率 10 顯示方式 4 電壓穩(wěn)定度 11 定時方式 5 電流穩(wěn)定度 12 電源電壓 6 功率穩(wěn)定度 13 電源頻率 7 輸出組數(shù) 14 功耗 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式一、毛細管電泳的相關概念一、毛細管電泳的相關概念 1. 1. 電場強度電場強度 （Electric Field StrengthElectric Fie

19、ld Strength） 2. 2. 電泳淌度電泳淌度 ( Electrophoretic( Electrophoretic Mobility) Mobility) 3. 3. 遷移時間遷移時間 （Migration TimeMigration Time） 4. 4. 電泳速度電泳速度 ( Electrophoretic( Electrophoretic Velocity) Velocity) 5. 5. 電滲流電滲流 （ElectroosmoticElectroosmotic Flow Flow，EOFEOF） 6. 6. 焦耳熱焦耳熱 （Joule HeatingJoule Heating

20、） 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式 二、毛細管電泳的基本工作原理二、毛細管電泳的基本工作原理 溶液中的帶電粒子以高壓電場為驅動力，溶液中的帶電粒子以高壓電場為驅動力，沿毛細管通道，以不同速度向與其所帶電荷相沿毛細管通道，以不同速度向與其所帶電荷相反的電極方向遷移，并依據(jù)樣品中各組分之間反的電極方向遷移，并依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異淌度和分配行為上的差異 而實現(xiàn)分離。而實現(xiàn)分離。第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式 06-09 毛細管電泳儀裝置示意圖 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細

21、管電泳的基本結構和分離模式三、毛細管電泳的特點三、毛細管電泳的特點 1. 高靈敏度高靈敏度 2. 高速度高速度 3. 高分辨率高分辨率 4. 樣品少樣品少 5. 自動化程度高自動化程度高 6. 應用范圍廣應用范圍廣 06-10 英特雷勃英特雷勃 全自動電泳儀全自動電泳儀第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式四、毛細管電泳的分離模式四、毛細管電泳的分離模式 （一）毛細管區(qū)帶電泳（一）毛細管區(qū)帶電泳 它是通過在充滿電解質溶液的毛細管中，不同質荷比大它是通過在充滿電解質溶液的毛細管中，不同質荷比大小的組分在電場的作用下，依遷移速度的不同而進行分離小的組分在電場的作

22、用下，依遷移速度的不同而進行分離的。根據(jù)組分的遷移時間的。根據(jù)組分的遷移時間 進行定性，根據(jù)電泳峰進行定性，根據(jù)電泳峰 的峰面積或峰高進行定的峰面積或峰高進行定 量分析。量分析。 06-11 毛細血管區(qū)帶電泳原理圖 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式 （二）毛細管凝膠電泳（二）毛細管凝膠電泳 將板上的凝膠移到毛細管中作支持物進行的電泳。將板上的凝膠移到毛細管中作支持物進行的電泳。凝膠具有多孔性，起類似分子篩的作用，能根據(jù)凝膠具有多孔性，起類似分子篩的作用，能根據(jù)待測組分的質荷比和分子體積的不同而進行分離。待測組分的質荷比和分子體積的不同而進行分離。 適用

23、于分離、測定肽類、蛋白質、適用于分離、測定肽類、蛋白質、DNA類物質的類物質的分離。分離。 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式（三）毛細管膠束電動色譜（三）毛細管膠束電動色譜(MECC) 使使MECC系統(tǒng)中存在兩個相：流動的水相和起系統(tǒng)中存在兩個相：流動的水相和起到固定相作用的膠束相。在含有膠束的流動相中，到固定相作用的膠束相。在含有膠束的流動相中，溶質在溶質在“水相水相”和和“膠束相膠束相”(準固定相準固定相)之間進行之間進行分配，即使是中性溶質，因其本身疏水性不同，在分配，即使是中性溶質，因其本身疏水性不同，在二者之間的分二者之間的分 配也會有差異，

24、疏水性強的溶質在配也會有差異，疏水性強的溶質在“膠束相膠束相”中停留時間長，遷移速度就慢。反之，中停留時間長，遷移速度就慢。反之，親水性強的溶質遷移速度就快，最終中性溶質將依親水性強的溶質遷移速度就快，最終中性溶質將依其疏水性不同而得以分離。其疏水性不同而得以分離。 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式06-12毛細管膠束電動色譜原理圖毛細管膠束電動色譜原理圖第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式（四）毛細管等電聚焦電泳（四）毛細管等電聚焦電泳 不同等電點的分子分別聚集在不同的位置上，不同等電點的分子分別聚集在不同的位置

25、上，不作遷移而彼此分離，這就是等電聚焦分離過不作遷移而彼此分離，這就是等電聚焦分離過程。毛細管的等電聚焦是在毛細管內實現(xiàn)的等程。毛細管的等電聚焦是在毛細管內實現(xiàn)的等電聚焦過程，具有極高的分辨率，通?？梢苑蛛娋劢惯^程，具有極高的分辨率，通常可以分離等電點差異小于離等電點差異小于 0.01pH單位的兩種蛋白質，單位的兩種蛋白質，例如肽類、蛋白質的分離。例如肽類、蛋白質的分離。第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式（五）毛細管等速電泳（五）毛細管等速電泳 毛細管內首先導入具有比被分離各組分高電泳毛細管內首先導入具有比被分離各組分高電泳淌度的前導電解質，然后進樣，隨

26、后再導入比各淌度的前導電解質，然后進樣，隨后再導入比各分離組份低電泳淌度的尾隨電解質，在強電場的分離組份低電泳淌度的尾隨電解質，在強電場的作用下，各被分離組分在前導電解質與尾隨電解作用下，各被分離組分在前導電解質與尾隨電解質之間的空隙中發(fā)生分離。質之間的空隙中發(fā)生分離。 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式 （六）毛細管電色譜（六）毛細管電色譜 它包含了電泳和色譜兩種機制，是在毛細管中填充它包含了電泳和色譜兩種機制，是在毛細管中填充 或在毛細管壁或在毛細管壁 上鍵合（或涂壁）固上鍵合（或涂壁）固 定相，從而構成毛細定相，從而構成毛細 管色譜柱，依靠電滲管色

27、譜柱，依靠電滲 流推動流動相，攜帶流推動流動相，攜帶 樣品遷移，根據(jù)樣品樣品遷移，根據(jù)樣品 分子的質荷比、分子分子的質荷比、分子 尺寸及分配系數(shù)的差尺寸及分配系數(shù)的差 別而分離。別而分離。 06-13 CEC-加壓毛細管電色譜儀加壓毛細管電色譜儀第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式五、毛細管電泳儀的基本結構五、毛細管電泳儀的基本結構 毛細管電泳儀的結構并不復雜，主要有高壓源、毛細管電泳儀的結構并不復雜，主要有高壓源、毛細管柱、檢測器，以及兩毛細管柱、檢測器，以及兩 個供毛細管兩端插入而又可個供毛細管兩端插入而又可 和電源相連的緩沖液槽。和電源相連的緩沖液槽

28、。 （一）毛細管柱（一）毛細管柱 （二）檢測器（二）檢測器 （三）毛細管電泳（三）毛細管電泳 法的進樣技術法的進樣技術 06-14毛細管電泳儀毛細管電泳儀第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式 六、常用各種電泳儀簡介六、常用各種電泳儀簡介 （一）穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀（一）穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀 穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀是中壓電泳儀。其輸出電壓的穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀是中壓電泳儀。其輸出電壓的調節(jié)范圍為調節(jié)范圍為0V0V600V600V、輸出電流為、輸出電流為0mA0mA100mA100mA。該。該機工作穩(wěn)定性好、調節(jié)范圍寬，并設有完善的短路機工作穩(wěn)定性好、調節(jié)范圍寬，并設有完善的短路保護電

29、路和過流保護電路，是目前國內中、低壓電保護電路和過流保護電路，是目前國內中、低壓電泳實驗中應用最廣泛的電泳儀之一。泳實驗中應用最廣泛的電泳儀之一。 06-15 穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式（二）全自動醋纖膜電泳儀（二）全自動醋纖膜電泳儀 全自動醋纖膜電泳儀為全自動電泳儀，有可全自動醋纖膜電泳儀為全自動電泳儀，有可見光單系統(tǒng)，使用醋酸纖維薄膜電泳片，優(yōu)點為見光單系統(tǒng)，使用醋酸纖維薄膜電泳片，優(yōu)點為自動化程度高。只需將樣品、試劑、電泳片放好，自動化程度高。只需將樣品、試劑、電泳片放好，人員可離機完成實驗并得到結果。人員可離機

30、完成實驗并得到結果。 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式（三）全自動熒光（三）全自動熒光/可見光雙系統(tǒng)電泳儀可見光雙系統(tǒng)電泳儀 全自動熒光全自動熒光/可見光雙系統(tǒng)電泳儀為全自動電泳可見光雙系統(tǒng)電泳儀為全自動電泳儀，具有熒光儀，具有熒光/可見光雙系統(tǒng)，在使用熒光試劑項可見光雙系統(tǒng)，在使用熒光試劑項目如目如CK、LD同工酶時為全自動。只需將樣品、同工酶時為全自動。只需將樣品、試劑、瓊脂糖凝膠電泳膠片放好后，操作人員可試劑、瓊脂糖凝膠電泳膠片放好后，操作人員可離機完成實驗并得到結果。離機完成實驗并得到結果。 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電

31、泳的基本結構和分離模式（四）全自動瓊脂糖電泳儀（四）全自動瓊脂糖電泳儀 全自動電泳儀，有可見光單系統(tǒng)，使用瓊脂糖凝全自動電泳儀，有可見光單系統(tǒng)，使用瓊脂糖凝膠電泳膠片，優(yōu)點為靈敏度高，可適用于低濃度膠電泳膠片，優(yōu)點為靈敏度高，可適用于低濃度蛋白檢驗蛋白檢驗 。該儀器自動化程度較差，當電泳結束。該儀器自動化程度較差，當電泳結束和染色脫色完成后，工作人員必須將電泳片由機和染色脫色完成后，工作人員必須將電泳片由機器中取出。器中取出。 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式（五）雙向電泳及雙向電泳（五）雙向電泳及雙向電泳- -液相色譜液相色譜- -質譜聯(lián)用質譜聯(lián)用

32、雙向電泳是將樣品進行電泳后，在它的直角方雙向電泳是將樣品進行電泳后，在它的直角方向再進行一次電泳。雙向電泳第一向為等電聚焦，向再進行一次電泳。雙向電泳第一向為等電聚焦，第二向為梯度第二向為梯度SDSSDS電泳。樣品經(jīng)過電荷與質量兩次電泳。樣品經(jīng)過電荷與質量兩次分離后可得到分子的等電點、分子量等信息。這是分離后可得到分子的等電點、分子量等信息。這是目前所有電泳技術中分辨率最高，信息量最多的技目前所有電泳技術中分辨率最高，信息量最多的技術，已成為分析復雜蛋白混合物的基本工具。術，已成為分析復雜蛋白混合物的基本工具。 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式（六）高

33、效毛細管電泳及高效毛細管電泳（六）高效毛細管電泳及高效毛細管電泳- -質譜聯(lián)用質譜聯(lián)用 高效毛細管電泳是以彈性石英毛細管為分離高效毛細管電泳是以彈性石英毛細管為分離通道，以高壓直流電場為推動力，依據(jù)樣品中各通道，以高壓直流電場為推動力，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的電泳分離分析方法。高效毛細管電泳是一種迅速電泳分離分析方法。高效毛細管電泳是一種迅速發(fā)展的分離技術，儀器簡單、操作簡便、分析速發(fā)展的分離技術，儀器簡單、操作簡便、分析速度快、分離效率高、操作模式多、開發(fā)分析方法度快、分離效率高、操作模式多、開發(fā)分析方法容易、實驗成本低

34、、消耗少、應用范圍極廣。容易、實驗成本低、消耗少、應用范圍極廣。 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式（七）毛細管電泳芯片（七）毛細管電泳芯片 利用毛細管電泳芯片可以進行利用毛細管電泳芯片可以進行DNA長度分析、長度分析、序列分析和基因分型等研究。是利用芯片分離熒序列分析和基因分型等研究。是利用芯片分離熒光標記的寡核苷酸，整個分離過程在光標記的寡核苷酸，整個分離過程在45s之內，之內，而芯片的長度僅為而芯片的長度僅為3.8cm。因為其可承載高電壓。因為其可承載高電壓（2300V/cm）并具有較小的樣品體積，故有利）并具有較小的樣品體積，故有利于得到較好的分

35、離效果。于得到較好的分離效果。 第四節(jié)第四節(jié) 毛細管電泳的基本結構和分離模式毛細管電泳的基本結構和分離模式（八）（八）DNA測序系統(tǒng)測序系統(tǒng) 該系統(tǒng)利用凝膠毛細管的原理，將多道毛細管陣該系統(tǒng)利用凝膠毛細管的原理，將多道毛細管陣列設計，用四種不同的熒光染色標記列設計，用四種不同的熒光染色標記4 4種核苷酸，種核苷酸，在模板上合成在模板上合成DNADNA單鏈，然后在單鏈，然后在DNADNA外切酶的作用外切酶的作用下進行堿基的連續(xù)水解和釋放，用激光識別和記下進行堿基的連續(xù)水解和釋放，用激光識別和記錄釋放的堿基。錄釋放的堿基。 06-16 DNA測序系統(tǒng)測序系統(tǒng)第五節(jié)第五節(jié) 電泳儀的臨床應用電泳儀的臨

36、床應用 一、一、 血清蛋白電泳血清蛋白電泳 新鮮血清經(jīng)醋酸纖維薄膜或瓊脂糖電泳、染色新鮮血清經(jīng)醋酸纖維薄膜或瓊脂糖電泳、染色后，通?？梢姾螅ǔ？梢? 5條帶，即清蛋白、條帶，即清蛋白、 1 1、 2 2、 和和 球蛋球蛋白。許多疾病總血清蛋白濃度和各蛋白組分的比例白。許多疾病總血清蛋白濃度和各蛋白組分的比例有所改變，通過血清蛋白電泳圖譜能幫助我們對某有所改變，通過血清蛋白電泳圖譜能幫助我們對某些疾病進行診斷及鑒別診斷。些疾病進行診斷及鑒別診斷。 06-17 血清蛋白電泳圖譜血清蛋白電泳圖譜第五節(jié)第五節(jié) 電泳儀的臨床應用電泳儀的臨床應用二、尿蛋白電泳二、尿蛋白電泳 臨床進行尿蛋白電泳的主要目的是：臨床進行尿蛋白電泳的