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1、PCR反應(yīng)原理及其操作反應(yīng)原理及其操作2021/8/52 2021/8/532021/8/54 4 4種種dNTPdNTP混合物混合物 各各200umol/L200umol/L（dATP,dGTP,dCTP,dTTP） 引物引物 各各1010100pmol100pmol 模板模板DNA DNA 0.10.12ug2ug Taq DNATaq DNA聚合酶聚合酶 2.5u2.5u MgMg2+ 2+ 1.5mmol/L1.5mmol/L2021/8/55 1. DNA變性變性（90-96）：雙鏈）：雙鏈DNA模板在熱作用模板在熱作用下，下， 氫鍵斷裂，形成單鏈氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。2. 退火

2、（復(fù)性）退火（復(fù)性）（25-65）：系統(tǒng)溫度降低，引物與）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈。模板結(jié)合，形成局部雙鏈。3. 延伸延伸（70-75）：在）：在Taq酶（在酶（在72左右，左右，活性最佳）的作用下，以活性最佳）的作用下，以dNTP為原料，為原料，從引物的從引物的5端端3端延伸，合成與模板互端延伸，合成與模板互補(bǔ)的補(bǔ)的DNA鏈。鏈。2021/8/562021/8/572021/8/582021/8/592021/8/5102021/8/5112021/8/5122021/8/513 在引物作在引物作用下，用下，Taq酶酶從從引物引物3端端開(kāi)開(kāi)始延伸始延伸DNA鏈，鏈，即即DNA的合成的合成方向是從子鏈方向是從子鏈的的5端自端自3端端延伸的延伸的。實(shí)際。實(shí)際上就是在體外上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過(guò)的復(fù)制過(guò)程。程。DNA的復(fù)的復(fù)制需要引物，制需要引物，其主要原因是其主要原因是DNA聚合酶只聚合酶只能從能從3端延伸端延伸DNA鏈。鏈。2021/8/5142021/8/5

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