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1、PCR設(shè)計(jì)引物時(shí)酶切位點(diǎn)的保護(hù)酶寡核苷酸序列切割率%2 hr20 hrAcc IGGTCGAC C00CGGTCGAC CG00CCG GTCGAC CGG00Afl IIICACATGT G00CCACATGT GG>90>90CCC ACATGT GGG>90>90Asc IGGCGCGCC>90>90AGGCGCGCC T>90>90TTGGCGCGCC AA>90>90Ava ICCCCGGG G50>90CC CCCGGG GG>90>90TCC CCCGGG GGA>90>90BamH ICG
2、GATCC G1025CGGGATCC CG>90>90CGC GGATCC GCG>90>90Bgl IICAGATCT G00GAAGATCT TC75>90GGA AGATCT TCC25>90BssH IIGGCGCGC C00AG GCGCGC CT00TTG GCGCGC CAA50>90BstE IIGGGT(A/T)ACC C010BstX IAACTGCAGAA CCAATGCATTGG00AAAACTGCAG CCAATGCATTGG AA2550CTGCAGAA CCAATGCATTGG ATGCAT25>90Cla ICA
3、TCGAT G00GATCGAT C00CCATCGAT GG>90>90CCC ATCGAT GGG5050EcoR IG GAATTC C>90>90CG GAATTC CG>90>90CCG GAATTC CGG>90>90Hae IIIGG GGCC CC>90>90AGC GGCC GCT>90>90TTGC GGCC GCAA>90>90Hi nd IIICAAGCTT G00CCAAGCTT GG00CCC AAGCTT GGG1075Kpn IGGGTACC C00GG GGTACC CC>
4、;90>90CGG GGTACC CCG>90>90Mlu IGACGCGT C00CG ACGCGT CG2550Neo 1CCCATGG G00CATG CCATGG CATG5075Nde ICCATATG G00CCCATATG GG00CGC CATATG GCG00GGGTTT CATATG AAACCC00GGAATTC CATATG GAATTCC75>90GGGAATTC CATATG GAATTCCC75>90Nhe IGGCTAGC C00CGGCTAGC CG1025CTA GCTAGC TAG1050Not ITTGCGGCCGC AA0
5、0ATTT GCGGCCGC TTTA1010AAATAT GCGGCCGC TATAAA1010ATAAGAAT GCGGCCGC TAAACTAT2590AAGGAAAAAA GCGGCCGC AAAAGGAAAA25>90Nsi ITGC ATGCAT GCA10>90CCA ATGCAT TGGTTCTGCAGTT>90>90Pae ITTAATTAA00GTTAATTAA C025CC TTAATTAA GG0>90Pme IGTTTAAAC00G GTTTAAAC C025GG GTTTAAAC CC050AGCTTT GTTTAAAC GGCGCGC
6、CGG75>90Pst IGCTGCAG C00TGCA CTGCAG TGCA1010AA CTGCAG AACCAATGCATTGG>90>90AAAA CTGCAG CCAATGCATTGGAA>90>90CTGCAG AACCAATGCATTGGATGCAT00Pvu ICCGATCG G00AT CGATCG AT1025TCG CGATCG CGA010Sac ICGAGCTC G1010Sac IIGCCGCGG C00TCC CCGCGG GGA50>90Sal IGTCGAC GTCAAAAGGCCATAGCGGCCGC00GC GTCGA
7、C GTCTTGGCCATAGCGGCCGCGG1050ACGC GTCGAC GTCGGCCATAGCGGCCGCG1075GAASca IGAGTACT C1025AAA AGTACT TTT7575Sma ICCCGGG010CCCCGGG G010CC CCCGGG GG1050TCC CCCGGG GGA>90>90Spe IGACTAGT C10>90GGACTAGT CC10>90CGG ACTAGT CCG050CTAG ACTAGT CTAG050Sph IGGCATGC C00CAT GCATGC ATG025ACAT GCATGC ATGT1050
8、Stu IAAGGCCT T>90>90GAAGGCCT TC>90>90AAA AGGCCT TTT>90>90Xba ICTCTAGA G00GCTCTAGA GC>90>90TGC TCTAGA GCA75>90CTAG TCTAGA CTAG75>90Xho ICCTCGAG G00CCCTCGAG GG1025CCG CTCGAG CGG1075Xma ICCCCGGG G00CCCCCGGG GG2575CCC CCCGGG GGG50>90TCCC CCCGGG GGGA>90>90注釋:1 如果要加在序列的 5 '端,就在酶切
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