




版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、生物技術(shù)制藥課后習(xí)題 by Yuan 1、 生物技術(shù)制藥分為哪些類型? 生物技術(shù)制藥分為四大類: (1) 應(yīng)用重組DNA技術(shù)(包 括基因工程技術(shù)、蛋白質(zhì)工程技術(shù))制造的基因重組多肽,蛋白質(zhì)類治療劑。 (2) 基因藥物,如基因治療劑,基因疫苗,反義藥物和核酶等 (3) 來自動(dòng)物、植物和微生物的天然生物藥物 (4) 合成與部分合成的生物藥物 2、生物技術(shù)制藥具有什么特征? (1)分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜 (2)具有種屬特異性 (3)治療針對(duì)性強(qiáng),療效高 (4)穩(wěn)定性差 (5)基因穩(wěn)定性 (6)免疫原性 (7)體內(nèi)的半衰期短 (8)受體效應(yīng) (9)多效性 (10)檢驗(yàn)的特殊性3、 生物技術(shù)制藥中有哪些應(yīng)用? 應(yīng)
2、用主要有: (1) 基因工程制藥:包括基因工程藥物品種的開發(fā),基因工程疫苗,基因工程抗體, 基因診斷與基因治療,應(yīng)用基因工程技術(shù)建立新藥的篩選模型,應(yīng)用基因工程技術(shù)改良菌種,產(chǎn)生新的微生物藥物,基因工程技術(shù)在改進(jìn)藥物生產(chǎn)工藝中的應(yīng)用,利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物生產(chǎn)蛋白質(zhì)類藥物 (2) 細(xì)胞工程制藥:包括單克隆抗體,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),植物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝 產(chǎn)物 (3) 酶工程制藥 (4) 發(fā)酵工程制藥 4、基因工程藥物制造的主要程序有哪些? 基因工程藥物制造的主要步驟有: 目的基因的克隆,構(gòu)造DNA重組體,構(gòu)造工程菌,目的基因的表達(dá),外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化產(chǎn)品的檢驗(yàn)5、 影響目的的基因在大腸桿菌中表達(dá)
3、的因素有哪些? (1)外源基因的計(jì)量 (2)外源基因的表達(dá)效率: a、啟動(dòng)子的強(qiáng)弱 b、核糖體的結(jié)合位點(diǎn) c、SD序列和起始密碼的間距 d、密碼子組成 (3)表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性 (4)細(xì)胞的代謝付荷 (5)工程菌的培養(yǎng)條件6、質(zhì)粒不穩(wěn)定分為哪兩類,如何解決質(zhì)粒不穩(wěn)定性?質(zhì)粒不穩(wěn)定分為分裂分為分裂不穩(wěn)定和結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。質(zhì)粒的分裂不穩(wěn)定是指工程菌分裂時(shí)出現(xiàn)一定比例不含質(zhì)粒的子代菌的現(xiàn)象;質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定是DNA從質(zhì)粒上丟失或堿基重排,缺失所致工程菌性能的改變。提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法如下:(1) 選擇合適的宿主細(xì)菌 (2)選擇合適的載體(3)選擇壓力(4)分階段控制培養(yǎng)(5)控制培養(yǎng)條件(6)固定化7、
4、影響基因工程菌發(fā)酵的因素有哪些?如何控制發(fā)酵的各種參數(shù)? 影響因素: (1)培養(yǎng)基 (2)接種量 (3)溫度 (4)溶解氧 (5)誘導(dǎo)時(shí)機(jī)的影響 (6)誘導(dǎo)表達(dá)程序 (7)PH值8、什么是高密度發(fā)酵?影響高密度發(fā)酵的因素有哪些?可采取哪些方法來實(shí)現(xiàn)高密度發(fā)酵? 高密度發(fā)酵:是指培養(yǎng)液中工程菌的菌體濃度在50gDCW/L以上,理論上的最高值可達(dá)200gDCW/L 影響因素:(1)培養(yǎng)基(2)溶氧濃度(3)PH(4)溫度(5)代謝副產(chǎn)物 實(shí)現(xiàn)高密度發(fā)酵的方法: (1)改進(jìn)發(fā)酵條件:a、培養(yǎng)基b、建立流加式培養(yǎng)基c、提高供養(yǎng)能力 (2)構(gòu)建出產(chǎn)乙酸能力低的工程菌宿主菌:a、阻斷乙酸產(chǎn)生的主要途徑b、
5、對(duì)碳代謝流進(jìn)行分流c、限制進(jìn)入糖酵解途徑的碳代謝流d、引入血紅蛋白基因 (3)構(gòu)建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌9、分離純化常用的色譜分離方法有哪些?它們的原理是什么? 方法有離子交換色譜、疏水色譜、反相色譜、親和色譜、凝膠過濾色譜及高壓液相色譜。 (1)離子交換色譜IEC:是以離子交換劑為固定相,依據(jù)流動(dòng)相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進(jìn)行可逆交換時(shí)的結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一種層析方法。 (2)疏水層析HIC:是利用蛋白質(zhì)表面的疏水區(qū)與固定相上疏水性基團(tuán)相互作用力的差異,對(duì)蛋白質(zhì)組進(jìn)行分離的層析方法。 (3)親和層析AC:是利用固定化配體與目的蛋白質(zhì)之間的非常特異的生物親和力進(jìn)行吸附
6、,這種結(jié)合既是特異的,又是可逆的,改變條件可以使這種結(jié)合解除。 (4)凝膠過濾層析:以多孔性凝膠填料為固定相,按分子大小對(duì)溶液中各組分進(jìn)行分離的液相層析方法。10、對(duì)由基因重組技術(shù)所獲得的蛋白質(zhì)藥物進(jìn)行鑒定時(shí),常做哪些項(xiàng)目分析? 基因工程藥物質(zhì)量控制主要包括以下幾點(diǎn):產(chǎn)品的鑒別,純度,活性,安全性,穩(wěn)定性和一致性 項(xiàng)目分析主要有:(1)生物活性測(cè)定(2)理化性質(zhì)鑒定(3)蛋白質(zhì)含量鑒定(4)蛋白質(zhì)純度分析(5)雜志檢測(cè)(6)穩(wěn)定性考察(7)產(chǎn)品一致性的保證11、 離體培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞分為哪些類型? 分為三類: (1)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞生長(zhǎng)必須有可以貼附的支持物表面,細(xì)胞依靠自身分泌的培養(yǎng)基中提供的貼
7、附因子才能在該表面上生長(zhǎng)增殖。 (2)懸浮細(xì)胞:細(xì)胞的生長(zhǎng)不依賴支持物表面,可在培養(yǎng)液中懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)(3)兼性貼壁細(xì)胞:既可貼附于支持物表面生長(zhǎng),又在懸浮生長(zhǎng)。12、 生產(chǎn)用的動(dòng)物細(xì)胞有哪些種類?它們各有什么特點(diǎn)?13、 常用的培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基的種類有哪些? (1)天然培養(yǎng)基 (2)合成培養(yǎng)基 (3)無血清培養(yǎng)基14、 如何進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)?大規(guī)模培養(yǎng)的方法:(1)懸浮細(xì)胞(2)貼壁細(xì)胞 (3)貼壁懸浮細(xì)胞:a、微載體培養(yǎng)b、包埋和微囊培養(yǎng)c、結(jié)團(tuán)培養(yǎng)大規(guī)模培養(yǎng)的操作方式:(1) 分批式操作(2) 半連續(xù)式操作(3) 灌流式操作15、 動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器必須具備哪些基本要求?有哪些類
8、型?特定是什么? 動(dòng)物細(xì)胞反應(yīng)器具備的基本要求: (1)制造生物反應(yīng)器所采用的一切材料,尤其是與培養(yǎng)基,細(xì)胞直接接觸的材料,對(duì)細(xì)胞必須是無毒性的。 (2)生物反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)必須使之具有良好的傳質(zhì)、傳熱和混合的性能 (3)密封性良好,可避免一切外采的不需要的微生物污染。 (4)對(duì)培養(yǎng)基環(huán)境中多種物理化學(xué)參數(shù)能自動(dòng)檢測(cè)和調(diào)節(jié)控制,控制的精度高,而且能保持環(huán)境質(zhì)量的均一。 (5)可長(zhǎng)期連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn),這對(duì)于培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的生物反應(yīng)器顯得尤其重要。 (6)容器加工制造時(shí)要求內(nèi)面光滑,無死角,以減少細(xì)胞或微生物的沉積。 (7)拆裝,連結(jié)和清潔方便,能耐高壓蒸汽消毒,便于操作維修 (8)設(shè)備成本盡可能低。 反應(yīng)器類
9、型及特點(diǎn): (1)攪拌罐式生物反應(yīng)器:主要用于是懸浮細(xì)胞培養(yǎng),微載體培養(yǎng),微囊和巨載體培養(yǎng)以及結(jié)團(tuán)培養(yǎng) (2)氣升式生物反應(yīng)器:氣體通過裝在罐底的噴管進(jìn)入反應(yīng)器的導(dǎo)流管,致使該部液體的密度小于導(dǎo)流管外部的液體形成循環(huán)流。 (3)中空纖維式生物反應(yīng)器:占地空間小,產(chǎn)品產(chǎn)量、質(zhì)量高,生產(chǎn)成本低,不能重復(fù)使用,不能耐高壓蒸汽滅菌,需用環(huán)氧乙烷或其它消毒劑滅菌,難以取樣檢測(cè)。 (4)透析袋或膜式生物反應(yīng)器:可使細(xì)胞達(dá)到高密度,又可隨意組合進(jìn)行操作,對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行濃縮純化。 (5)固定床或流化床生物反應(yīng)器:結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,裝填材料易得。16、動(dòng)物細(xì)胞制藥有哪些新進(jìn)展?17、什么是單克隆抗體?單克隆抗體有哪些不足?
10、單克隆抗體:是針對(duì)一個(gè)抗原決定簇的抗體,又是單一的B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的抗體。不足: (1)單克隆抗體均是鼠源性抗體,應(yīng)用于人體內(nèi)可產(chǎn)生人抗鼠抗體,加速了排斥反應(yīng),在人體內(nèi)半衰期只有5-6h,難以維持有效藥物作用靶組織時(shí)間。 (2)完整的抗體分子,即Ig的相對(duì)分子質(zhì)量過大,難以穿透實(shí)體腫瘤組織,達(dá)不到有效治療濃度。18、如何制備雜交瘤細(xì)胞? 將兩個(gè)細(xì)胞(例如B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞)通過誘導(dǎo)融合形成雜交細(xì)胞,具體操作時(shí)為了提高成功率會(huì)用多個(gè)細(xì)胞同時(shí)雜交,然后篩選出目的細(xì)胞,再進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)使其有絲分裂而增值,得到大量目的細(xì)胞(雜交瘤細(xì)胞)。19、基因工程抗體有哪些類型?其特性和制備方法有什么不同?基
11、因工程抗體主要包括嵌合抗體、人源化抗體、完全人源抗體、單鏈抗體、雙特異性抗體等。 (1)嵌合抗體嵌合抗體(chimericatibody)是最早制備成功的基因工程抗體。它是由鼠源性抗體的V區(qū)基因與人抗體的C區(qū)基因拼接為嵌合基因,然后插入載體,轉(zhuǎn)染骨髓瘤組織表達(dá)的抗體分子。因其減少了鼠源成分,從而降低了鼠源性抗體引起的不良反應(yīng),并有助于提高療效。 (2)人源性抗體是將人抗體的CDR代之以鼠源性單克隆抗體的CDR,由此形成的抗體,鼠源性只占極少,稱為人源化抗體。 (3)完全人源化抗體采用基因敲除術(shù)將小鼠Ig基因敲除,代之以人Ig基因,然后用Ag免疫小鼠,再經(jīng)雜交瘤技術(shù)即可產(chǎn)生大量完全人源化抗體。
12、(4)單鏈抗體是將Ig的H鏈和L鏈的V區(qū)基因相連,轉(zhuǎn)染大腸桿菌表達(dá)的抗體分子,又稱單鏈FV(singlechainfragmentofvariableregion,sFv)。SFv穿透力強(qiáng),易于進(jìn)入局部組織發(fā)揮作用。 (5)雙特異性抗體將識(shí)別效應(yīng)細(xì)胞的抗體和識(shí)別靶細(xì)胞的抗體聯(lián)結(jié)在一起,制成雙功能性抗體,稱為雙特異性抗體。如由識(shí)別腫瘤抗原的抗體和識(shí)別細(xì)胞毒性免疫效應(yīng)細(xì)胞(CTL細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞)表面分子的抗體(CD3抗體或CD16抗體)制成的雙特異性抗體,有利于免疫效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用。20、抗體治療藥物有哪些? (1)放射性同位素標(biāo)記的抗體治療藥物 (2)抗癌藥物偶聯(lián)的抗體藥物 (
13、3)毒素偶聯(lián)的抗體藥物21、 抗體診斷試劑有哪些類型? (1)血清學(xué)鑒定用的抗體試劑 (2)免疫標(biāo)記用的抗體試劑 (3)導(dǎo)向診斷藥物 (4)CD單克隆抗體系列22、單克隆抗體制備的基本原理與過程?有什么意義? 原理:B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對(duì)這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細(xì)胞的這種能力和量是有限的,不可能持續(xù)分化增殖下去,因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細(xì)胞與非分泌型的骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞,再進(jìn)一步克隆化,這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤的無限生長(zhǎng)的能力,又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力,將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即
14、可獲得大量的高效價(jià)、單一的特異性抗體。這種技術(shù)即稱為單克隆抗體技術(shù)。過程 1)免疫脾細(xì)胞的制備制備單克隆抗體的動(dòng)物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質(zhì)。免疫方法同一般血清的制備,也可采用脾內(nèi)直接免疫法。 2)骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與篩選在融合前,骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)經(jīng)過含8-AG的培養(yǎng)基篩選,防止細(xì)胞發(fā)生突變恢復(fù)HGPRT的活性(恢復(fù)HGPRT的活性的細(xì)胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活)。骨髓瘤細(xì)胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),融合前24h換液一次,使骨髓瘤細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。 3)細(xì)胞融合的關(guān)鍵: 1技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。例如,供者淋巴細(xì)胞沒有查到免疫應(yīng)答。這
15、必然要失敗的。 2融合試驗(yàn)最大的失敗原因是污染,融合成功的關(guān)鍵是提供一個(gè)干凈的環(huán)境,以及適宜的無菌操作技術(shù)。4)陽性克隆的篩選應(yīng)盡早進(jìn)行。通常在融合后10天作第一次檢測(cè),過早容易出現(xiàn)假陽性。檢測(cè)方法應(yīng)靈敏、準(zhǔn)確、而且簡(jiǎn)便快速。具體應(yīng)用的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì),以及所需單克隆抗體的功能進(jìn)行選擇。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法最簡(jiǎn)便,RIA法最準(zhǔn)確。陽性克隆的篩選應(yīng)進(jìn)行多次,均陽性時(shí)才確定為陽性克隆進(jìn)行擴(kuò)增。5)克隆化克隆化的目的是為了獲得單一細(xì)胞系的群體。克隆化應(yīng)盡早進(jìn)行并反復(fù)篩選。這是因?yàn)槌跗诘碾s交瘤細(xì)胞是不穩(wěn)定的,有丟失染色體的傾向。反復(fù)克隆化后可獲得穩(wěn)定的
16、雜交瘤細(xì)胞株。克隆化的方法很多,而最常用的是有限稀釋法。 (1)顯微操作法:在顯微鏡下取單細(xì)胞,然后進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)。這種方法操作復(fù)雜,效率低,故不常用。 (2)有限稀釋法:將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的雜交瘤細(xì)胞用培養(yǎng)液作一定的稀釋后,按每孔1個(gè)細(xì)胞接種在培養(yǎng)皿中,細(xì)胞增值后成為單克隆細(xì)胞系。第一次克隆化時(shí)加一定量的飼養(yǎng)細(xì)胞。由于第一次克隆化生長(zhǎng)的細(xì)胞不能保證單克隆化,所以為獲得穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞株需經(jīng)23次的再克隆才成。應(yīng)該注意的是,每次克隆化過程中所有有意義的細(xì)胞都應(yīng)冷凍保存,以便重復(fù)檢查,避免丟失有意義的細(xì)胞。 (3)軟瓊脂法:將雜交瘤細(xì)胞稀釋到一定密度,然后與瓊脂混懸。在瓊脂中的細(xì)胞不能自由移動(dòng),彼此互
17、不相混,從而達(dá)到單細(xì)胞培養(yǎng)的目的。但此法不如有限稀釋法好。 (4)熒光激光細(xì)胞分類法:用抗原包被的熒光乳膠微球標(biāo)記雜交瘤細(xì)胞,然后根據(jù)抗原與雜交瘤細(xì)胞結(jié)合的特異性選出細(xì)胞,并進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)。 6)細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇 7)大規(guī)模單克隆抗體的制備選出的陽性細(xì)胞株應(yīng)及早進(jìn)行抗體制備,因?yàn)槿诤霞?xì)胞隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),發(fā)生污染、染包體丟失和細(xì)胞死亡的機(jī)率增加??贵w制備有兩種方法。一是增量培養(yǎng)法,即將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng),在培養(yǎng)液中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設(shè)備,一般應(yīng)用無血清培養(yǎng)基,以利于單克隆抗體的濃縮和純化。最普遍采用的是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠,先用降植烷或液體石蠟行小鼠
18、腹腔注射,一周后將雜交瘤細(xì)胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周后即有明顯的腹水產(chǎn)生,每只小鼠可收集510ml的腹水,有時(shí)甚至超過40ml。該法制備的腹水抗體含量高,每毫升可達(dá)數(shù)毫克甚至數(shù)十毫克水平。此外,腹水中的雜蛋白也較少,便于抗體的純化。 意義: 用于以下各種生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)并具有醫(yī)用價(jià)值 (1)沉淀反應(yīng):Precipitationreaction (2)凝集實(shí)驗(yàn):haemaglutination (3)放射免疫學(xué)方法檢測(cè)免疫復(fù)合物 (4)流式細(xì)胞儀:用于細(xì)胞的分型和細(xì)胞分離。 (5)ELISA等免疫學(xué)檢測(cè) (6)BIAcorebiosensor:檢測(cè)Ab-Ag或與蛋白的親和力。 (7)免疫印
19、記(westernblotting) (8)免疫沉淀: (9)親和層析:分離蛋白質(zhì) (10)磁珠分離細(xì)胞 (11)臨床疾病的診斷和治療;23、 植物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基由哪些主要成分組成? (1)無機(jī)鹽(2)碳源(3)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(4)有機(jī)氮源(5)維生素24、植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的主要方法及其特點(diǎn)是什么? (1)成批培養(yǎng)法:將培養(yǎng)基一次性地加入反應(yīng)器中,接種,培養(yǎng)一定時(shí)間后收獲細(xì)胞的操作方式。特點(diǎn):操作強(qiáng)度低,設(shè)備簡(jiǎn)單,容易發(fā)生污染,通氣受限制。 (2)半連續(xù)培養(yǎng)法:在反應(yīng)器中投料和接種培養(yǎng)一段時(shí)間后,將部分培養(yǎng)液和新鮮培養(yǎng)液進(jìn)行交換的培養(yǎng)方法。 (3)連續(xù)培養(yǎng)法:是利用連續(xù)培養(yǎng)反應(yīng)器,在投料和
20、接種培養(yǎng)一段時(shí)間后,以一定速度采集細(xì)胞和培養(yǎng)液,并以同樣速度供給誒新鮮培養(yǎng)基以使細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境長(zhǎng)期恒定的方法。 (4)固定化培養(yǎng)法:將細(xì)胞固定于尼龍網(wǎng)套內(nèi),或固定于中空纖維有網(wǎng)狀多孔板,尼龍?zhí)缀椭锌绽w維膜上,放入培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng),或連續(xù)流入新鮮培養(yǎng)液,進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)及連續(xù)收集培養(yǎng)產(chǎn)物,也可通入凈化空氣以代替攪拌。25、 影響植物細(xì)胞積累次級(jí)代謝產(chǎn)物的因素有哪些? (1)生物條件(2)物理?xiàng)l件(3)化學(xué)條件(4)工業(yè)培養(yǎng)條件26、各種植物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器的特點(diǎn)是什么? (1)機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器:有較大的操作范圍,混合程度高,適應(yīng)性廣,剪切力大,容易損傷細(xì)胞。 (2)鼓泡式生物反應(yīng)器:優(yōu)于機(jī)械攪
21、拌式反應(yīng)器。但由于鼓泡式反應(yīng)器對(duì)氧的利用率較低,如果用較大通氣量,則產(chǎn)生的剪切力會(huì)損傷細(xì)胞。 (3)氣升式生物反應(yīng)器:廣泛應(yīng)用于植物細(xì)胞培養(yǎng)的研究和生產(chǎn),最高細(xì)胞濃度和最短倍增時(shí)間可從氣升罐中得到。 (4)轉(zhuǎn)鼓式生物反應(yīng)器:生長(zhǎng)速率高,其氧的傳遞及剪切力對(duì)細(xì)胞的傷害水平方面均優(yōu)于氣升式反應(yīng)器。 (5)固定化細(xì)胞反應(yīng)器:可保護(hù)細(xì)胞免受剪切,可長(zhǎng)時(shí)間重復(fù)使用,易于實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的高密度培養(yǎng),細(xì)胞接觸良好,易于分化,有利于次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成,減少細(xì)胞的遺傳不穩(wěn)定性,易于實(shí)現(xiàn)連續(xù)化操作。27、植物細(xì)胞培養(yǎng)有哪些新進(jìn)展? (1)誘導(dǎo)了在植物細(xì)胞工程研究中的應(yīng)用 (2)前體飼喂 (3)兩相法培養(yǎng) (4)轉(zhuǎn)基因技
22、術(shù)在次級(jí)代謝產(chǎn)物生產(chǎn)中的應(yīng)用 (5)植物身為轉(zhuǎn)化技術(shù)與生物制藥28、酶工程主要研究?jī)?nèi)容是什么? (1)酶的分離、純化、大批量生產(chǎn)及應(yīng)用。 (2)酶和細(xì)胞的固定化及酶反應(yīng)器的研究。 (3)酶生產(chǎn)中基因工程技術(shù)的應(yīng)用及遺傳修飾酶研究。 (4)酶的分子改造與化學(xué)修飾以及酶的結(jié)構(gòu)與功能之間關(guān)系的研究。 (5)有機(jī)相中酶反應(yīng)的研究。 (6)酶的抑制劑,激活劑的開發(fā)及應(yīng)用與研究。 (7)抗體酶,核酸酶的研究。 (8)模擬酶,合成酶及酶分子的人工設(shè)計(jì)、合成的研究。29、固定化酶回合固定化細(xì)胞的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)各是什么?怎樣制備? 固定化酶的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn):(1)同一批固定化酶能在工藝流程中重復(fù)多次地使用;(2)固定化
23、后,和反應(yīng)物分開,有利于控制生產(chǎn)過程,同時(shí)也省去了熱處理使酶失活的步驟; (3)穩(wěn)定性顯著提高;(4)可長(zhǎng)期使用,并可預(yù)測(cè)衰變的速度;(5)提供了研究酶動(dòng)力學(xué)的良好模型。固定化細(xì)胞的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn): 1.使用固定化細(xì)胞省去了酶的分離過程,顯著降低了成本。 2.固定化細(xì)胞為多酶系統(tǒng),不需要輔助因子 3.增加了細(xì)胞對(duì)不利環(huán)境的耐逆性,可重復(fù)使用。 4.增加了酶的穩(wěn)定性。 固定化酶制備: (1)吸附法: 過載體表面和酶分子表面間的次級(jí)鍵相互作用而達(dá)到固定目的的方法,是固定化中最簡(jiǎn)單的方法。酶與載體之間的親和力是范德華力、疏水相互作用、離子鍵和氫鍵等。 (2)包埋發(fā): 將酶包埋在高聚物的細(xì)微凝膠網(wǎng)格中或高
24、分子半透膜內(nèi)的固定化方法。前者又稱為凝膠包埋法,酶被包埋成網(wǎng)格型;后者又稱為微膠囊包埋法,酶被包埋成微膠囊型。 (3)共價(jià)鍵結(jié)合法: 將酶與聚合物載體以共價(jià)鍵結(jié)合的固定化方法。 (4)交聯(lián)法 使用雙功能或多功能試劑使酶分子之間相互交聯(lián)呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的固定化方法。由于酶蛋白的功能團(tuán),如氨基、酚基、巰基和咪唑基,參與此反應(yīng),所以酶的活性中心構(gòu)造可能受到影響,而使酶失活明顯。但是盡可能地降低交聯(lián)劑濃度和縮短反應(yīng)時(shí)間將有利于固定化酶活力的提高。固定化細(xì)胞的制備:一種固定化細(xì)胞的制備方法,包括以下步驟:a選用甲烷利用細(xì)菌MethylomonasspGYJ3,在可供給微生物能量的甲烷和空氣的混合氣體中,輔以無
25、機(jī)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng); b培養(yǎng)好的菌體細(xì)胞離心后用無機(jī)培養(yǎng)基懸浮,加入到硅酸鈉溶液和鹽酸溶液制成的溶膠中,待溶膠凝固變成凝膠后,就制得了包埋的細(xì)胞,將包埋細(xì)胞置于低溫環(huán)境中以增加包埋強(qiáng)度; c用磷酸鹽緩沖液洗去包埋細(xì)胞的雜質(zhì),充入可給微生物提供能量的相應(yīng)的甲烷與空氣的混合氣體,在搖床上培養(yǎng)48120小時(shí)。30、為什么要對(duì)酶進(jìn)行化學(xué)修飾? (1).更好的熱穩(wěn)定性以及抗核酸酶性對(duì)于臨床應(yīng)用很重要; (2)提高酶蛋白在體內(nèi)的半衰期; (3)提高酶蛋白的靶向性; (4)提高酶蛋白效力。31、何謂分子印跡?分子印跡的應(yīng)用范圍有哪些?分子印跡:是指制備對(duì)某一特定化合物具有選擇性的聚合物的過程。應(yīng)用范圍: (1
26、)用于化學(xué)仿生傳感器 (2)色譜分離 (3)固相萃取 (4)天然杭體模擬 (5)模擬酶催化 (6)控緩釋藥物32、有機(jī)相酶反應(yīng)的定義及其優(yōu)點(diǎn)是什么?有機(jī)相酶反應(yīng):是指酶在具有有機(jī)溶劑存在的介質(zhì)中所進(jìn)行對(duì)的催化反應(yīng)。優(yōu)點(diǎn)是:(1) 增加疏水性底物或產(chǎn)物的溶解度。 (2)熱力學(xué)平衡向合成方向移動(dòng)。 (3)可抑制有水劑中分離純化產(chǎn)物。(4)酶不溶于有機(jī)介質(zhì),易于回收再利用。(5)容易從低沸點(diǎn)的溶劑中分離純化產(chǎn)物。(6)酶的熱穩(wěn)定性提高,PH的適應(yīng)性擴(kuò)大。(7)無微生物污染。 (8)能測(cè)定某介質(zhì)中反應(yīng)時(shí),通過改變?nèi)軇?,能夠控制底物的特異性、區(qū)域選擇性和立體選擇性,并可以催化某些在水中不能進(jìn)行的反應(yīng)。3
27、3、何謂人工模擬酶?人工模擬酶:是指根據(jù)酶的作用機(jī)理,用各種方法人為制造的具有酶性質(zhì)的催化劑。34、發(fā)酵工程的研究?jī)?nèi)容包括哪些?發(fā)酵工程研究?jī)?nèi)容涉及:菌種的培養(yǎng)和選育、菌的代謝與調(diào)節(jié)、培養(yǎng)基滅菌、通氣攪拌、溶氧、發(fā)酵條件的優(yōu)化、發(fā)酵過程各種參數(shù)與動(dòng)力學(xué)、發(fā)酵反應(yīng)器的設(shè)計(jì)和自動(dòng)控制、產(chǎn)品的分離純化和精制等。35、微生物菌種誘變使用的主要誘變劑有哪些?它們的誘變機(jī)制是什么? (1)物理誘變劑:主要有紫外線、X射線、射線、快中子、射線、射線和超聲波等。 (2)化學(xué)誘變劑:金屬離子、一般化學(xué)試劑、生物堿、抗代謝物、生長(zhǎng)刺激素、抗生素及高分子化合物、殺菌劑、染料等。誘變機(jī)制:1、 堿基的類似物誘發(fā)突變2
28、、 改變DNA的化學(xué)結(jié)構(gòu)3、 結(jié)合到DNA分子上誘發(fā)移碼突變4、 紫外線及其他射線引起的DNA分子的變化36、微生物發(fā)酵主要有哪些方式?各具有什么特點(diǎn)? (一)分批發(fā)酵:是將全部物料一次投入到反應(yīng)器中,經(jīng)滅菌,接種,經(jīng)過若干時(shí)間的發(fā)酵后再將發(fā)酵液一次放出的操作方式。特點(diǎn): (1)對(duì)溫度的要求低,工藝操作簡(jiǎn)單; (2)比較容易解決雜菌污染和菌種退化等問題; (3)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物的利用效率較高,產(chǎn)物濃度也比連續(xù)發(fā)酵要高 (4)人力、物力、動(dòng)力消耗較大; (5)生產(chǎn)周期較長(zhǎng) (6)生產(chǎn)效率低 (二)補(bǔ)料分批發(fā)酵:指在微生物分批發(fā)酵過程中,以某種方式向發(fā)酵系統(tǒng)中補(bǔ)加一定物料,但并不連續(xù)地向外放出發(fā)酵液的發(fā)酵
29、技術(shù),是介于分批發(fā)酵和連續(xù)發(fā)酵之間的一種發(fā)酵技術(shù)。 特點(diǎn):(1)可以解除底物的抑制、產(chǎn)物的反饋抑制和分解代謝物阻遏作用。(2)可以減少菌體生長(zhǎng)量,提高有用產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化率;(3)菌種的變異及雜菌污染問題易控制;(4)便于自動(dòng)化控制 (三)連續(xù)發(fā)酵:是指以一定的速度向發(fā)酵罐內(nèi)添加新鮮培養(yǎng)基,同時(shí)以相同速度流出培養(yǎng)液,從而使發(fā)酵罐內(nèi)的液量維持恒定的發(fā)酵過程。 特點(diǎn): (1)設(shè)備的體積可以減??;v (2)操作時(shí)間短,總的操作管理方便,便于自動(dòng)化控制; (3)產(chǎn)物穩(wěn)定,人力物力節(jié)省,生產(chǎn)費(fèi)用低 (4)對(duì)設(shè)備的合理性和加料設(shè)備的精確性要求甚高; (5)營(yíng)養(yǎng)成分的利用較分批發(fā)酵差,產(chǎn)物濃度比分批發(fā)酵低 (6)
30、雜菌污染的機(jī)會(huì)較多,菌種易因變異而發(fā)生退化。37、影響發(fā)酵的主要因素有哪些?如何對(duì)發(fā)酵過程進(jìn)行控制? (1)溫度溫度對(duì)微生物的影響是多方面的。首先,溫度影響酶的活性。在最適溫度范圍內(nèi),隨著溫度的升高,菌體生長(zhǎng)和代謝加快,發(fā)酵反應(yīng)的速率加快。當(dāng)超過最適溫度范圍以后,隨著溫度的升高,酶很快失活,菌體衰老,發(fā)酵周期縮短,產(chǎn)量降低。溫度也能影響生物合成的途徑。例如,金色鏈霉菌在30以下時(shí),合成金霉素的能力較強(qiáng),但當(dāng)溫度超過35時(shí),則只合成四環(huán)素而不合成金霉素。此外,溫度還會(huì)影響發(fā)酵液的物理性質(zhì),以及菌種對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解吸收等。因此,要保證正常的發(fā)酵過程,就需維持最適溫度。但菌體生長(zhǎng)和產(chǎn)物合成所需的最適溫度不一定相同。如灰色鏈霉菌的最適生長(zhǎng)溫度是37,但產(chǎn)生抗生素的最適溫度是28。通常,必須通過實(shí)驗(yàn)來確定不同菌種各發(fā)酵階段的最適溫度,采取分段控制。 (2)pHpH能夠影響酶的活性,以及細(xì)胞膜的帶電荷狀況。細(xì)胞膜的帶電荷狀況如果發(fā)生變化,膜的透性也會(huì)改變,從而有可能影響
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 糞污資源化利用技術(shù)在中小規(guī)模養(yǎng)殖企業(yè)中的應(yīng)用
- 德育共同體視角下中醫(yī)藥高校學(xué)生思想政治教育效果評(píng)估
- 山東省齊河縣2024-2025學(xué)年八上數(shù)學(xué)期末學(xué)業(yè)質(zhì)量監(jiān)測(cè)模擬試題含解析
- 內(nèi)蒙古烏拉特前旗三校2024-2025學(xué)年化學(xué)九上期末質(zhì)量檢測(cè)模擬試題含解析
- 第6課 西方的文官制度教學(xué)設(shè)計(jì)
- 酒店餐飲企業(yè)代理記賬與餐飲財(cái)務(wù)管理合同
- 廠房抵押貸款居間擔(dān)保協(xié)議
- 茶餐廳廚房承包及員工培訓(xùn)服務(wù)合同
- 某商業(yè)廣場(chǎng)電力設(shè)施規(guī)劃與配電系統(tǒng)設(shè)計(jì)
- 虛擬現(xiàn)實(shí)技術(shù)在安全培訓(xùn)中的應(yīng)用
- 道路施工工藝培訓(xùn)
- 2025-2030全球及中國(guó)乙酰檸檬酸三丁酯(ATBC)行業(yè)市場(chǎng)現(xiàn)狀供需分析及市場(chǎng)深度研究發(fā)展前景及規(guī)劃可行性分析研究報(bào)告
- 2025濟(jì)寧市泗水縣泗河街道社區(qū)工作者考試真題
- 初二化學(xué)全套試題及答案
- 融資代建合同模板5篇
- 甲方工期回復(fù)函
- 直播肖像權(quán)使用合同協(xié)議
- 2024年山東滕州市屬國(guó)有企業(yè)第三批次招聘120人筆試參考題庫附帶答案詳解
- 中科曙光2025測(cè)評(píng)
- 兒科換錯(cuò)藥護(hù)理不良事件
- 英語四六級(jí)資料 全國(guó)大學(xué)英語四六級(jí)全部詞匯
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論