免疫組化技術(shù)在婦科地臨床應(yīng)用

1、word免疫組化技術(shù)在婦科的臨床應(yīng)用免疫組化的根本原理免疫組化是免疫組織化學(xué)技術(shù)的簡稱。 它是應(yīng)用抗原、抗體特異 性結(jié)合的原理，使用的抗體在病理切片上與相應(yīng)的抗原結(jié)合， 然后把 結(jié)合產(chǎn)物應(yīng)用組織化學(xué)的方法顯現(xiàn)出來，使之可以在顯微鏡下觀察得 以確認(rèn)。通常使用的顯色劑為聯(lián)苯胺，結(jié)合的抗體顯示為棕色顆粒， 所以把免疫組化成為“棕色革命。組成人體細(xì)胞分為假如干種，如：上皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、肌肉細(xì) 胞、血細(xì)胞等，每種細(xì)胞都有其特殊的結(jié)構(gòu)物質(zhì)，每種細(xì)胞都有其特 異功能，每種功能又有其物質(zhì)根底。如：鱗狀上皮細(xì)胞通過角化物可 以防止機體水份的蒸發(fā)和外界病原體的侵入， 肌肉可以通過肌動蛋白 使自己收縮。突觸素可以

2、傳導(dǎo)神經(jīng)興奮，某些器官借以實現(xiàn)其功能的 激素受體，載有遺傳物質(zhì)的DNA全段一一基因等?，F(xiàn)在人們都可以把 這些物質(zhì)純凈的別離出來，并把它們作為抗原免疫大鼠和家兔， 使之 產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，人們再把每種抗體別離純化，就得到我們免疫組化 應(yīng)用的抗體。我們把這些抗體作用于病理切片，然后再通過染色，如 果切片上有這種抗體對應(yīng)的抗原，就會在切片上出現(xiàn)棕色顆粒，如果 沒有棕色顆粒，就說明沒有這種抗體的抗原，在顯微鏡下就一目了然。免疫組化標(biāo)記在婦科腫瘤的應(yīng)用與其意義免疫組化以它的特異性和敏感性，結(jié)合組織學(xué)上的定位性已成為 多種腫瘤病理形態(tài)學(xué)診斷的新手段。這里需要說明的是雖然目前具有 診斷價值的腫瘤標(biāo)記物有數(shù)百種

3、之多，但至今還沒有發(fā)現(xiàn)人體腫瘤的 特異性抗原，也就是說還沒有任何一種抗體能100%地確診一種腫瘤。盡管如此，人們正是得到了一些與腫瘤相關(guān)的抗原， 存在于腫瘤 細(xì)胞的胞核、胞漿和胞膜上，它的存在或量變可以提高腫瘤的性質(zhì)， 借以了解腫瘤的組織發(fā)生，細(xì)胞分化、細(xì)胞功能，以有助于腫瘤的診 斷，鑒別診斷、分類，判斷預(yù)后和指導(dǎo)臨床治療。目前具有診斷價值的腫瘤標(biāo)記物雖已有數(shù)百種，但在臨床病理診 斷常用的有50余種，其標(biāo)記物有以下類型：一、腫瘤相關(guān)抗原這種抗原只存在腫瘤組織中，正常組織內(nèi)沒有或含量甚微。或其 為幾種類型腫瘤所共有，故又稱為腫瘤群體抗原，對判斷腫瘤的良、 惡性和起源均有一定幫助CA125對卵巢上

4、皮性腫瘤都有一定的表達，但主要對漿液性腫瘤陽性表 達，卵巢粘液性腺癌 CA125不表達。可以用于這兩種腫瘤的鑒別診 斷。CA125對子宮內(nèi)膜樣腫瘤透明細(xì)胞癌，未分化癌上皮成份也是 陽性表達。CEA癌胚抗原廣泛存在于各種上皮性腫瘤，大多數(shù)卵巢漿液性腫瘤不表達，而 卵巢粘液性腫瘤表達，在子宮內(nèi)膜樣腺癌，透明細(xì)胞癌，勃勒納氏瘤 CEA都有不同程度的表達，在胃腸道惡性腫瘤中CEA也為陽性表達，所以卵巢庫肯勃氏瘤CEA也是陽性表達。AFP甲胎蛋白是胚胎卵黃囊細(xì)胞，胚胎肝細(xì)胞和胎兒腸道細(xì)胞合成的一種糖 蛋白，主要用于肝癌的診斷，在卵巢內(nèi)胚竇瘤、胚胎性癌，惡性畸胎 瘤都為陽性表達。二、細(xì)胞結(jié)構(gòu)抗原這種抗原可

5、存在于正常組織和腫瘤組織中，為某些組織細(xì)胞群所特有，對判斷腫瘤起源有重要意義CK7:主要標(biāo)記腺上皮和移行上皮。卵巢、肺、乳腺上皮CK7陽性表達。而結(jié)腸，前列腺和胃腸道上皮CK7陰性表達?？捎糜诼殉舶┡c胃腸道 癌的鑒別診斷。CK20:主要標(biāo)記胃腸道上皮、尿道上皮。卵巢粘液性囊腺癌CK20為陽性表達。子宮內(nèi)膜腺癌、宮頸鱗癌、乳腺癌、肺癌和卵巢非粘液性 腫瘤CK20均不表達。desm in結(jié)蛋白為中間絲蛋白之一，分布于正常平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞和 肌上皮細(xì)胞與其腫瘤中。結(jié)蛋白在良性肌源性腫瘤是強陽 性表達，而在平滑肌肉瘤中表達率僅為50 %，另外在平滑肌瘤中結(jié)蛋白與波形蛋白 Vime nt

6、in是表達間葉組織來源的腫瘤，上皮來源 腫瘤不含此蛋白，用于癌與肉瘤的鑒別，惡黑與癌的鑒別等的表達 呈反向關(guān)系，分化越好結(jié)蛋白陽性反響越強， 波形蛋白陽性反響弱或 陰性；反之，分化越差，結(jié)蛋白反響弱或陰性，而波形蛋白反響越強。 另外含有肌源成份的癌肉瘤，惡性中胚葉混合瘤，畸胎瘤中也存在結(jié) 蛋白S-100是一種可溶性酸性蛋白，主要存在于神經(jīng)組織、垂體、唾液腺等 組織，是神經(jīng)性腫瘤的主要標(biāo)記。在惡黑與脂肪肉瘤為陽性表達SMA肌動蛋白是一種標(biāo)記平滑肌瘤的蛋白，主要用于診斷平滑肌瘤、血管平 滑肌瘤，平滑肌肉瘤以與肌上皮細(xì)胞。在乳腺腫瘤中以此抗體檢測導(dǎo) 管上皮肌上皮細(xì)胞陽性與否來判斷乳腺腫瘤的良、惡性。

7、三、可用于某些生殖細(xì)胞來源的腫瘤和妊娠有關(guān)的腫瘤的診斷，常用的有：內(nèi)分泌激素與其受體抗原包括肽類激素和類固醇激素兩種，以肽類激素抗原應(yīng)用較多， 常用有胰島素、高血糖素、胃泌素、生長抑素、降鈣素等。類固醇激素有雌激素、孕酮、睪酮等。但此類激素在組織切片中 保存困難，且在組織內(nèi)有多種結(jié)構(gòu)類似的激素前體， 不僅染色效果不 好，且難以正確判斷。所以多檢測其激素受體。女口： ER雌激素受體、 PR孕激素受體四、腫瘤中病毒抗原HPV人乳頭狀瘤病毒特別是 HPV16 18是宮頸癌主要致病病毒， 亦可用于頭頸部癌、前列腺癌和食管癌的研究HIV人類免疫缺陷病毒即艾滋病病毒，表達于淋巴細(xì)胞、單核細(xì) 胞、巨噬細(xì)胞、

8、濾泡樹突狀細(xì)胞和HIV感染的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，主要用 于艾滋病的研究.另外還有HSV單純性皰疹病毒等五、作為判斷預(yù)后的標(biāo)記抗體C-erbB-2是一種癌基因蛋白質(zhì)，存在于細(xì)胞膜上，該蛋白可加速細(xì)胞的運 動，參與細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移調(diào)節(jié)。在乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮內(nèi) 膜癌、胃癌陽性表達提示預(yù)后差。特別是乳腺癌陽性表達具有獨特的 預(yù)后價值，陽性表達者復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移率高，無瘤生存期與總生存期短。 宮頸腺癌C-erbB-2陽性表達者盆腔淋巴轉(zhuǎn)移率和宮頸深肌層侵犯率 高于陰性組。P53腫瘤抑制基因P53 蛋白也是現(xiàn)代分子生物學(xué)中研究最多的蛋白質(zhì)之一， P53 蛋白除具有細(xì)胞生長阻滯作用外，同時還參與細(xì)胞 DNA的損

9、傷與修 復(fù)、細(xì)胞生長與分化、誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡的過程，目前認(rèn)為 P53是生命科 學(xué)領(lǐng)域中最重要的蛋白質(zhì)分子。P53是腫瘤抑制因子，但由于失活、突變使蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生變化， 這在許多惡性腫瘤中可以見到 P53基因的突變，特別是結(jié)腸癌、直腸癌、肺癌、卵巢癌、宮頸癌、宮體癌、食道癌、胃癌、肝癌、乳腺癌 與膀胱癌尤為常見。另外對骨肉瘤、軟組織肉瘤、淋巴瘤與白血病等 惡性腫瘤細(xì)胞中也可見到。研究證明，P53突變與腫瘤大小正相關(guān)，與分化程度、病人的總生存期和無瘤生存期呈負(fù)相關(guān)。P53突變腫瘤復(fù)發(fā)率和死亡率明顯高于陽性者。且P53突變與腫瘤血管侵襲呈明 顯相關(guān)。在多種惡性腫瘤中突變性 P53蛋白表達水平升高，用免疫組

10、化 可以檢測到，所以我們?nèi)砸訮53陽性表達來預(yù)測患者的預(yù)后、術(shù)后易 復(fù)發(fā)等指標(biāo)。P53陽性表達與癌前病變的關(guān)系也極為密切，在宮頸和食管非典 型增生中均可檢測出P53蛋白。PA增殖細(xì)胞核抗原是一種僅在增殖細(xì)胞中合成或表達的核內(nèi)多肽。 PA陽性表達 與細(xì)胞增殖活性有關(guān)，可做為細(xì)胞增殖狀態(tài)的一個重要指標(biāo)。 在惡性 腫瘤中PA陽性表達提示有腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移和臨床預(yù)后不佳。Ki-67是一種與細(xì)胞增殖有關(guān)的核抗原，位于胞核中。 Ki-67增殖指 數(shù)上下即陽性表達與許多腫瘤的分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移與預(yù)后密切相 關(guān)，因此被廣泛做為各種惡性腫瘤必檢項目之一。ER PR是乳腺癌、子宮內(nèi)膜腺癌、宮頸癌、卵巢癌等必檢項目

11、之一。ER PR陽性與否與病人術(shù)后化療方案的選擇和內(nèi)分泌治療以至于腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、預(yù)后都密切相關(guān)。 ER、PR陽性者，內(nèi)分泌、化療 治療效果好，復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率少，緩解期長，生存率高。六、腫瘤多耐藥基因在臨床腫瘤治療中，經(jīng)常有這樣的情況：同一種腫瘤，使用同一 個治療方案，或同一個病人，化療之初和化療后期，其效果迥異。這 種情況決定性原因是腫瘤細(xì)胞內(nèi)是否存在或產(chǎn)生了多耐藥性。多耐藥性基因編碼蛋白可以把化療藥從細(xì)胞內(nèi)泵到細(xì)胞外，從而防止了化療 藥對細(xì)胞的破壞。研究明確，癌細(xì)胞有六種耐藥途徑，通俗點說：化療藥物要制服、 殺滅癌細(xì)胞，而癌細(xì)胞有強大對抗方法，使化療藥物奈何不了它，這 樣，癌細(xì)胞仍可肆無忌

12、彈地增生，最后達到危與健康與生命的目的。 所以每一位化療病人在治療前都應(yīng)該檢查腫瘤的耐藥性，如果陽性， 可以使用逆轉(zhuǎn)劑，提高腫瘤細(xì)胞對化療物的敏感性Pg糖蛋白它是多耐藥基因產(chǎn)物，作用“藥泵功能，弓I起癌細(xì)胞產(chǎn)生 耐藥。容易產(chǎn)生耐藥抗藥藥物主要有某某新堿、某某花堿、阿霉素、 柔紅霉素、表阿霉素、米托蒽醌、紫杉醇、 VP16等。陽性表達+ 以上有意義，對腫瘤病人選擇化療方案和愈后判斷具有重要的臨床意 義。MRP3多耐藥相關(guān)蛋白，主要用于非 Pg糖蛋白腫瘤細(xì)胞系的腫瘤耐藥性的研究。容易產(chǎn)生耐藥的抗藥藥物主要有阿霉素、柔紅霉素、表阿 霉素、某某新堿、某某花堿、VP16。常見婦科腫瘤免疫組化檢測應(yīng)用舉例

13、日常工作中根據(jù)每位病人，不同腫瘤類型從診斷、鑒別診斷、 探討組織來源、內(nèi)分泌治療與化療前腫瘤多耐藥基因與病人的愈后等 多方面選擇一組免疫組化抗體以達到輔助診斷的目的。子宮內(nèi)膜腺癌ER 、PR、Ki-67、P53漿液性乳頭狀腺癌過表達、PA、PTEN MRP3 Pg糖蛋白PTEN 是一種腫瘤抑制基因，在維持細(xì)胞增殖、分化和調(diào)亡平 衡起著重要作用，該基因在許多腫瘤表現(xiàn)突變和丟失。 子宮內(nèi)膜腺癌 的發(fā)生一局部是與持續(xù)與過多雌激素有關(guān)，病人有不排卵、不孕與子宮內(nèi)膜增生過長的病史。PTEN常為陽性表達，提示預(yù)后較好。有些 內(nèi)膜癌患者無雌激素增高，有正常排卵，卵巢功能正常。很多絕經(jīng)多 年的老年婦女，癌周內(nèi)

14、膜多顯萎縮，說明無雌激素影響，這種內(nèi)膜腺 癌發(fā)生機制尚不清楚，PTE N的陰性表達提示腫瘤惡性程度高，預(yù)后 差。子宮平滑肌肉瘤SMA 、P53、結(jié)蛋白、 波形蛋白、PA CD10、Ki-67、MRP3Pg糖蛋白。子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤ER、PR CD10 波形蛋白、desmin、SMA P53 Ki-67、MRP3 Pg糖蛋白宮頸浸潤性鱗癌廣譜 CK P16、HPV16 P53、Ki-67、MRP3 Pg 糖蛋白。P16是一種重要的抑癌基因，當(dāng) P16基因突變和丟失時細(xì)胞增殖 失控使細(xì)胞無限制增殖而發(fā)生腫瘤。在宮頸上皮內(nèi)瘤變與癌的發(fā)生是 以P16陽性表達為特征，這與宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸癌是由 HPV

15、感染 所造成細(xì)胞不死性有關(guān)。宮頸鱗形細(xì)胞原位癌與早期浸潤除以上幾項外再加IV型膠原蛋白、 層粘蛋白卵巢漿液性腺癌CA125、EMA、CEA P53、Ki 67、MRP3 Pg 糖蛋白卵巢粘液性腺癌CK7、CK20 CEA EMA CA125、S-100、P53 Ki-67、MRP3 Pg 糖蛋白卵巢卵泡膜細(xì)胞瘤Vimentin(+)( 但無法與纖維瘤區(qū)別)因瘤細(xì)胞漿內(nèi)含類脂質(zhì)，用脂肪染色可證實乳腺浸潤性癌ER、PR SMA P63 E-ca、P53 Ki-67、C-erbB-2、MRP3 Pg-糖蛋白惡黑S-100，HMB-45 NSE免疫組化染色是通過一系列環(huán)節(jié)與過程。 包括組織的固定，脫水

16、, 包埋，切片，各種抗體合理的稀釋度，孵育時間與溫度，各種有關(guān)溶 液的濃度和PH值等等，使抗體抗原更好保存并有效地結(jié)合，再通過 顯色液顯現(xiàn)出來，最后用蘇木素襯染，每一步驟和環(huán)節(jié)都必須認(rèn)真處 理，一步過失全部失敗。常用的方法有S-P法、PAP法, ABC法。目前常用的是 S-P法， 即鏈酶菌抗生物素蛋白-過氧化物法。此法可產(chǎn)生低背景，高放大效 果，更加簡便敏感和特異。在完成免疫酶標(biāo)記全過程后，對于如何判斷標(biāo)記的結(jié)果作出正確 的診斷是非常重要的。首先需要對本病例的石蠟切片，HE染色的切片有一個診斷意見， 再次須掌握切片的主要病變區(qū)和細(xì)胞形態(tài)的特點， 因為它是免疫組化 標(biāo)記的“靶細(xì)胞，應(yīng)根據(jù)“靶細(xì)胞標(biāo)記結(jié)果判斷其性質(zhì)。在染色過程中，某些組織和細(xì)胞，如：紅細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞， 肥大細(xì)胞，中性粒細(xì)胞和退化變性壞死組織也可以出現(xiàn)非特異反響， 影響對標(biāo)記結(jié)果的判斷。在鏡下必須會識別，防止誤認(rèn)為陽性細(xì)胞?？乖贵w結(jié)合后顯色，陽性時呈棕色顆粒狀。細(xì)胞陽性著色可以 在細(xì)胞漿、細(xì)胞膜和細(xì)胞核。上皮性，肌源性，神經(jīng)內(nèi)分泌，黑色素, 內(nèi)皮細(xì)胞和外周神經(jīng)細(xì)胞皆為細(xì)胞漿表達。 即在細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕色顆 粒。淋巴細(xì)胞陽性表達是在細(xì)胞膜上，圍繞細(xì)胞膜出現(xiàn)棕色線狀結(jié)構(gòu)。 ER PR陽性表達是棕色顆粒在細(xì)胞核內(nèi)。免疫組化檢測對所有腫瘤的病