生物安全柜的選擇-西城區(qū)衛(wèi)生服務網(wǎng)-網(wǎng)站首頁

1、生物安全柜的選擇、使用及維護生物安全柜的選擇、使用及維護李 仁 清 博士北京市疾病預防控制中心2007年10月依依 據(jù)據(jù) GB 194892007實驗室生物安全通用要求實驗室生物安全通用要求 實驗室生物安全手冊實驗室生物安全手冊（第三版，（第三版，2004） ISO 151902003醫(yī)學實驗室醫(yī)學實驗室安全要求安全要求 YY0569-2005 生物安全柜（生物安全柜（2005.7.18） JG170-2005 生物安全柜（生物安全柜（2005.3.25） 實驗室生物安全指南（第三版，實驗室生物安全指南（第三版，2004） 生物危害一級防護：生物安全柜的選擇、安裝和生物危害一級防護：生物安全柜

2、的選擇、安裝和使用（第二版，使用（第二版，2000.9） 微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全手冊（第四版，微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全手冊（第四版，1999.4）目目 的的掌握生物安全柜的選擇、放置、使掌握生物安全柜的選擇、放置、使用和維護用和維護熟悉生物安全柜的檢測方法熟悉生物安全柜的檢測方法需要解決的六個問題需要解決的六個問題選擇生物安全柜的理由選擇生物安全柜的理由u工作對象具有生物危害工作對象具有生物危害原代培養(yǎng)物、菌毒種以及診斷性標本等原代培養(yǎng)物、菌毒種以及診斷性標本等 -具有潛在感染性的實驗材料具有潛在感染性的實驗材料屬于屬于人間傳染的病原微生物名錄人間傳染的病原微生物名錄中第一、中第

3、一、二、三和四類微生物二、三和四類微生物人間傳染的病原微生物名錄人間傳染的病原微生物名錄類與級對應表類與級對應表-GB19489-2004實驗室生物安全通用要求第一類第一類 第二類第二類第三類第三類第四類第四類選擇生物安全柜的理由選擇生物安全柜的理由u容易產(chǎn)生氣溶膠的工作行為容易產(chǎn)生氣溶膠的工作行為 對液體或半流體進行搖動、傾注或攪拌操作時，對液體或半流體進行搖動、傾注或攪拌操作時， 將液體滴加到固體表面上或另一種液體中時，將液體滴加到固體表面上或另一種液體中時， 在對瓊脂板劃線接種、用吸管接種細胞培養(yǎng)瓶，在對瓊脂板劃線接種、用吸管接種細胞培養(yǎng)瓶， 采用多道加樣器將感染性試劑的混懸液轉(zhuǎn)移到微采

4、用多道加樣器將感染性試劑的混懸液轉(zhuǎn)移到微量培養(yǎng)板中，量培養(yǎng)板中， 對感染性物質(zhì)進行勻漿及渦旋振蕩，對感染性物質(zhì)進行勻漿及渦旋振蕩， 對感染性液體進行離心，對感染性液體進行離心， 進行動物操作時。進行動物操作時。選擇生物安全柜的理由選擇生物安全柜的理由u生物安全柜能夠阻止工作中所產(chǎn)生生物安全柜能夠阻止工作中所產(chǎn)生的氣溶膠對外環(huán)境或者操作者本身的氣溶膠對外環(huán)境或者操作者本身產(chǎn)生危害，還可以減少樣本之間由產(chǎn)生危害，還可以減少樣本之間由于氣溶膠產(chǎn)生的交叉污染。于氣溶膠產(chǎn)生的交叉污染。生物安全柜基本工作原理生物安全柜基本工作原理l定向氣流：定向氣流： 風幕風幕lHEPA濾器：濾器： 一種一次性使用，一種

5、一次性使用，框架內(nèi)有多重褶迭框架內(nèi)有多重褶迭的干性過濾材料的過濾器，對的干性過濾材料的過濾器，對0.3微米氣溶膠的過濾效微米氣溶膠的過濾效能達到能達到99.97%。 保證排出氣體和內(nèi)循環(huán)氣體的無菌狀態(tài)。保證排出氣體和內(nèi)循環(huán)氣體的無菌狀態(tài)。生物安全柜的選擇生物安全柜的選擇要素：要素：樣品的生物危害樣品的生物危害第一、二、三和四類病原微生物第一、二、三和四類病原微生物保護樣品保護樣品I級生物安全柜不保護樣品級生物安全柜不保護樣品其他其他是否涉及到揮發(fā)性、放射性核素或化學品是否涉及到揮發(fā)性、放射性核素或化學品生物安全柜的選擇（一）生物安全柜的選擇（一）生物安全柜生物安全柜進風面進風面速率速率（m/s

6、）氣流百分數(shù)氣流百分數(shù)排風系統(tǒng)排風系統(tǒng)重新循重新循環(huán)部分環(huán)部分排出部排出部分分 I 級級0.360100硬管硬管級級A1型型0.380.517030排到房間或排到房間或套管連接處套管連接處外排風型外排風型級級A2型型0.517030套管連接處套管連接處級級B1型型0.513070硬管硬管級級B2型型0.510100硬管硬管III級級不適用不適用0100硬管硬管生物安全柜的選擇（二）生物安全柜的選擇（二）生物安全柜生物安全柜保護類型保護類型保護對象保護對象 I 級級第二、三和四類病原微生物；第二、三和四類病原微生物；揮發(fā)放射性核素揮發(fā)放射性核素/化學品化學品操作者，環(huán)境操作者，環(huán)境級級A1型型第

7、二、三和四類病原微生物第二、三和四類病原微生物操作者，環(huán)境和樣品操作者，環(huán)境和樣品外排風型外排風型級級A2型型第二、三和四類病原微生物；第二、三和四類病原微生物；痕量揮發(fā)放射性核素痕量揮發(fā)放射性核素/化學品化學品操作者，環(huán)境和樣品操作者，環(huán)境和樣品級級B1型型第二、三和四類病原微生物；第二、三和四類病原微生物；少量揮發(fā)放射性核素少量揮發(fā)放射性核素/化學品化學品操作者，環(huán)境和樣品操作者，環(huán)境和樣品級級B2型型第二、三和四類病原微生物；第二、三和四類病原微生物；揮發(fā)放射性核素揮發(fā)放射性核素/化學品化學品操作者，環(huán)境和樣品操作者，環(huán)境和樣品III級級第一、二、三和四類病原微生第一、二、三和四類病原微

8、生物；揮發(fā)放射性核素物；揮發(fā)放射性核素/化學品化學品操作者，環(huán)境和樣品操作者，環(huán)境和樣品II級級A2型生物安全柜型生物安全柜室內(nèi)空氣污染的空氣HEPA 濾過的空氣正壓污染空氣生物安全柜的選擇（三）生物安全柜的選擇（三）l生物安全柜的寬度：生物安全柜的寬度：工作需要；空間工作需要；空間l費用：費用：安全柜本身；運輸費用；附件費安全柜本身；運輸費用；附件費用（支架，紫外燈，椅子等）；排風和送用（支架，紫外燈，椅子等）；排風和送風系統(tǒng)：風系統(tǒng)： 風機和管道（風機和管道（II級級B2）l認證：認證： NSF 49 美國美國 EN12469 歐洲歐洲 YY05692005 中國中國生物安全柜放置生物安全

9、柜放置l五個遠離點（氣流）五個遠離點（氣流）門門風扇風扇空調(diào)空調(diào)開著的窗戶開著的窗戶人員活動頻繁的區(qū)域人員活動頻繁的區(qū)域l擺放要求擺放要求穩(wěn)固的平臺或支架穩(wěn)固的平臺或支架兩側(cè)、后面和上端留兩側(cè)、后面和上端留30cmAir Register設備設備首選位置首選位置候選位置候選位置工工 作作 臺臺設備視頻反面反面 教材教材生物安全柜的使用要求生物安全柜的使用要求 個人防護要求個人防護要求 柜內(nèi)物品的擺放柜內(nèi)物品的擺放 紫外燈紫外燈 明火明火 工作前準備工作前準備 工作中操作及溢出處理工作中操作及溢出處理 工作結(jié)束后處理工作結(jié)束后處理生物安全柜的使用生物安全柜的使用個人防護要求：個人防護要求： 在使

10、用生物安全柜時必須穿個人防在使用生物安全柜時必須穿個人防護服，戴手套（手套應套在隔離衣的護服，戴手套（手套應套在隔離衣的外面）外面） 最好帶口罩和帽子，根據(jù)需要帶防護最好帶口罩和帽子，根據(jù)需要帶防護眼罩或者面罩。眼罩或者面罩。視頻生物安全柜的使用生物安全柜的使用生物安全柜內(nèi)物品擺放原則生物安全柜內(nèi)物品擺放原則 按照從潔凈區(qū)到污染區(qū)的方向擺放按照從潔凈區(qū)到污染區(qū)的方向擺放 所有物品盡可能放在工作臺后部所有物品盡可能放在工作臺后部 將廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶將廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶等體積較大的物品放在柜內(nèi)某一側(cè)等體積較大的物品放在柜內(nèi)某一側(cè) 前進氣格柵不能被紙、儀器設

11、備或者其他物品前進氣格柵不能被紙、儀器設備或者其他物品阻擋阻擋生物安全柜的使用生物安全柜的使用潔凈區(qū)半污染區(qū)污染區(qū)生物安全柜的使用生物安全柜的使用對紫外燈的三點要求：對紫外燈的三點要求： 每周進行清潔，除去可能影響殺菌效果的每周進行清潔，除去可能影響殺菌效果的灰塵和污垢灰塵和污垢 每次生物安全柜的認證，要檢查紫外線強每次生物安全柜的認證，要檢查紫外線強度，以確保有適當?shù)墓獍l(fā)射量度，以確保有適當?shù)墓獍l(fā)射量 房間中有人時一定要關閉紫外燈，以保護房間中有人時一定要關閉紫外燈，以保護眼睛和皮膚，避免因不慎暴露而造成傷害眼睛和皮膚，避免因不慎暴露而造成傷害生物安全柜的使用生物安全柜的使用避免使用明火，原

12、因有三：避免使用明火，原因有三： 明火可造成生物安全柜的氣流紊亂，明火可造成生物安全柜的氣流紊亂，干擾氣流模式干擾氣流模式 可損壞可損壞HEPA過濾器過濾器 處理揮發(fā)性物品和易燃物品時易造成處理揮發(fā)性物品和易燃物品時易造成危險危險生物安全柜的使用生物安全柜的使用工作前需要準備的內(nèi)容：工作前需要準備的內(nèi)容：首先紫外燈照射首先紫外燈照射30分鐘分鐘 關紫外燈，打開安全柜的日光燈和風機，用消關紫外燈，打開安全柜的日光燈和風機，用消毒劑對生物安全柜的內(nèi)表面進行消毒擦拭毒劑對生物安全柜的內(nèi)表面進行消毒擦拭 將實驗中需要用到的物品集中用消毒劑擦拭后將實驗中需要用到的物品集中用消毒劑擦拭后放在臺面相應位置上

13、（切記勿阻擋風口?。┓旁谂_面相應位置上（切記勿阻擋風口?。┑却却?min，凈化工作區(qū)的空氣污染物，凈化工作區(qū)的空氣污染物視頻生物安全柜的使用生物安全柜的使用工作時操作規(guī)范：工作時操作規(guī)范： 雙臂垂直緩慢進入前面的開口，在生物安全雙臂垂直緩慢進入前面的開口，在生物安全柜中等待大約一分鐘，以使安全柜調(diào)整完畢柜中等待大約一分鐘，以使安全柜調(diào)整完畢后才可對物品進行處理。后才可對物品進行處理。 所有操作應在離前窗所有操作應在離前窗10cm以外的工作區(qū)進行。以外的工作區(qū)進行。 廢棄物應丟棄在生物安全柜內(nèi)的處理容器中廢棄物應丟棄在生物安全柜內(nèi)的處理容器中視頻生物安全柜的使用生物安全柜的使用操作時注意事項：

14、操作時注意事項： 避免胳膊在前開口處快速移動和頻繁進出。避免胳膊在前開口處快速移動和頻繁進出。 盡量避免污染的物品進入潔凈區(qū)。盡量避免污染的物品進入潔凈區(qū)。 在生物安全柜內(nèi)進行操作時，不能進行文字在生物安全柜內(nèi)進行操作時，不能進行文字工作。工作。 盡量減少操作者身后的人員活動。盡量減少操作者身后的人員活動。視頻生物安全柜的使用生物安全柜的使用 溢出處理：溢出處理： GB194892007實驗室生物安全通用實驗室生物安全通用要求要求中生物安全柜內(nèi)溢出時的處理方法中生物安全柜內(nèi)溢出時的處理方法 滴狀溢出或體積不足滴狀溢出或體積不足1 mL 的，可簡單地的，可簡單地用消毒劑擦洗。用消毒劑擦洗。生物安

15、全柜的使用生物安全柜的使用n大量溢出，則要做特殊的處理：大量溢出，則要做特殊的處理：1、 使生物安全柜保持開啟狀態(tài)。使生物安全柜保持開啟狀態(tài)。2、 在溢出物上覆蓋浸有消毒劑的吸水材料，在溢出物上覆蓋浸有消毒劑的吸水材料，作用大約作用大約10分鐘以發(fā)揮消毒作用。分鐘以發(fā)揮消毒作用。3、 在安全柜內(nèi)對污染的手套消毒后，脫下在安全柜內(nèi)對污染的手套消毒后，脫下手套。如果衣服已經(jīng)污染，也要先脫下消手套。如果衣服已經(jīng)污染，也要先脫下消毒。穿戴干凈的手套和衣服作如下進一步毒。穿戴干凈的手套和衣服作如下進一步的清潔工作。的清潔工作。生物安全柜的使用生物安全柜的使用4、 用消毒劑噴灑或擦拭安全柜內(nèi)壁、工用消毒劑

16、噴灑或擦拭安全柜內(nèi)壁、工作表面以及前視窗的內(nèi)側(cè)。作用作表面以及前視窗的內(nèi)側(cè)。作用20 min后，擦干消毒劑并將擦拭物置于生物危后，擦干消毒劑并將擦拭物置于生物危害袋中。害袋中。5、 如果溢出情況需要浸泡接液槽，則不如果溢出情況需要浸泡接液槽，則不得現(xiàn)場清理接液槽。應報告實驗室主管得現(xiàn)場清理接液槽。應報告實驗室主管后采用適當?shù)臍怏w消毒方式。后采用適當?shù)臍怏w消毒方式。生物安全柜的使用生物安全柜的使用6、 將所有清理用物品以及防護服進行高將所有清理用物品以及防護服進行高壓消毒。用消毒肥皂和水洗手和暴露皮壓消毒。用消毒肥皂和水洗手和暴露皮膚。膚。7、 立即通知實驗室主管。如果溢出物流立即通知實驗室主管

17、。如果溢出物流入安全柜內(nèi)，可能需要對安全柜進行更入安全柜內(nèi)，可能需要對安全柜進行更為廣泛的消毒處理。為廣泛的消毒處理。視頻生物安全柜的使用生物安全柜的使用工作結(jié)束后的要求：工作結(jié)束后的要求： 將安全柜繼續(xù)運行至少將安全柜繼續(xù)運行至少3min來完成來完成“凈化凈化”過程。過程。 將柜內(nèi)物品移出前，應使用有效的消毒劑將柜內(nèi)物品移出前，應使用有效的消毒劑擦拭擦拭 每天實驗結(jié)束后，對生物安全柜的內(nèi)壁和每天實驗結(jié)束后，對生物安全柜的內(nèi)壁和臺面進行擦拭。臺面進行擦拭。 等待等待5分鐘后，關閉前窗，關燈，關風機，分鐘后，關閉前窗，關燈，關風機，紫外燈照射紫外燈照射30分鐘。分鐘。視頻生物安全柜的維護生物安全

18、柜的維護保持生物安全柜表面清潔和無污染狀態(tài)保持生物安全柜表面清潔和無污染狀態(tài) 用用70%酒精或者合適的消毒劑擦拭內(nèi)壁和工作酒精或者合適的消毒劑擦拭內(nèi)壁和工作臺面；臺面； 如果使用漂白劑等腐蝕性消毒劑后，需要用無如果使用漂白劑等腐蝕性消毒劑后，需要用無菌水再次進行擦拭除去殘余的消毒劑；菌水再次進行擦拭除去殘余的消毒劑； 定期抬起工作臺面對其下面的區(qū)域進行清潔；定期抬起工作臺面對其下面的區(qū)域進行清潔； 消毒后，用玻璃清潔器對前窗玻璃和紫外燈進消毒后，用玻璃清潔器對前窗玻璃和紫外燈進行清潔。行清潔。生物安全柜的維護生物安全柜的維護l定期保養(yǎng)：定期保養(yǎng)：用濕布擦拭內(nèi)壁和工作臺面；用濕布擦拭內(nèi)壁和工作臺

19、面；每年按需要更換紫外燈和日光燈；每年按需要更換紫外燈和日光燈；每年至少認證一次每年至少認證一次 醫(yī)學實驗室醫(yī)學實驗室安全要求安全要求 YY0569-2005 生物安全柜生物安全柜 實驗室生物安全手冊實驗室生物安全手冊（第三版，（第三版，2004）視頻生物安全柜的維護生物安全柜的維護生物安全柜的污染清除生物安全柜的污染清除甲醛、過氧化氫熏蒸等方法甲醛、過氧化氫熏蒸等方法 應由有資質(zhì)的專業(yè)人員來進行應由有資質(zhì)的專業(yè)人員來進行在以下情況下需要進行熏蒸：在以下情況下需要進行熏蒸：在檢查和維修之前在檢查和維修之前 在更換在更換HEPAHEPA濾器之前濾器之前在移動安全柜之前在移動安全柜之前 安全柜被嚴

20、重地污染安全柜被嚴重地污染變換使用目的變換使用目的 長時間未用長時間未用需要熏蒸的其它時間需要熏蒸的其它時間生物安全柜的維護生物安全柜的維護 甲醛熏蒸步驟之一甲醛熏蒸步驟之一-準備準備電爐兩個；福爾馬林；氨水；電爐兩個；福爾馬林；氨水；100mL100mL燒杯燒杯4 4個；個；膠帶；透明塑料薄膜、膠帶；透明塑料薄膜、75%75%酒精等。酒精等。使用使用75%75%酒精對生物安全柜內(nèi)、外表面進行酒精對生物安全柜內(nèi)、外表面進行消毒清潔；消毒清潔；將生物安全柜和放置在同一房間內(nèi)的冰箱、將生物安全柜和放置在同一房間內(nèi)的冰箱、CO2CO2培養(yǎng)箱等儀器用膠帶紙進行密封處理。培養(yǎng)箱等儀器用膠帶紙進行密封處理

21、。視頻生物安全柜的使用生物安全柜的使用 甲醛熏蒸步驟之二甲醛熏蒸步驟之二-熏蒸熏蒸將電爐放在生物安全柜中，連接電源將電爐放在生物安全柜中，連接電源用兩個燒杯分取福爾馬林用兩個燒杯分取福爾馬林20mL20mL、水、水50mL50mL，置電，置電爐上爐上關閉視窗，用膠帶封嚴窗門關閉視窗，用膠帶封嚴窗門開啟電源，水和福爾馬林同時被加熱，待福爾開啟電源，水和福爾馬林同時被加熱，待福爾馬林揮發(fā)完畢時，關閉電源馬林揮發(fā)完畢時，關閉電源, , 保持密閉狀態(tài)，保持密閉狀態(tài)，過夜過夜視頻生物安全柜的使用生物安全柜的使用 甲醛熏蒸步驟之三甲醛熏蒸步驟之三-中和中和取氨水取氨水36mL36mL、水、水50mL50m

22、L，分放于，分放于2 2個燒杯中，個燒杯中，置電爐上置電爐上再次將生物安全柜門密封再次將生物安全柜門密封開啟電源，待氨水揮發(fā)完后，關閉電源開啟電源，待氨水揮發(fā)完后，關閉電源密閉過夜密閉過夜視頻生物安全柜的熏蒸生物安全柜的熏蒸生物安全柜的檢測生物安全柜的檢測 什么情況下需要檢測？什么情況下需要檢測？ 應該由什么人來進行檢測？應該由什么人來進行檢測？ 需要進行哪些內(nèi)容的檢測？需要進行哪些內(nèi)容的檢測？生物安全柜的檢測生物安全柜的檢測生物安全柜的檢測的情況發(fā)生在：生物安全柜的檢測的情況發(fā)生在： 最初的購買安裝完畢最初的購買安裝完畢 年檢年檢 移動移動 修理修理生物安全柜的檢測生物安全柜的檢測生物安全柜

23、的檢測應由有資質(zhì)的單位檢測生物安全柜的檢測應由有資質(zhì)的單位檢測 在美國必須有美國在美國必須有美國NSF授權(quán)的單位；沒有授權(quán)的單位；沒有NSF授權(quán)，也得有以下經(jīng)歷的：授權(quán)，也得有以下經(jīng)歷的： 有過檢測經(jīng)驗；參加過技術課程或者廠商有過檢測經(jīng)驗；參加過技術課程或者廠商培訓會；參加過象培訓會；參加過象CETA水平的商業(yè)會議；檢水平的商業(yè)會議；檢測設備擁有的校準證書測設備擁有的校準證書 在我國有檢測資質(zhì)的單位：在我國有檢測資質(zhì)的單位： 國家食品藥品監(jiān)督管理局國家食品藥品監(jiān)督管理局 醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心和軍事醫(yī)學科學院督檢驗中心和軍事醫(yī)學科學院生物安全柜的檢測生物安全柜的檢測安全柜防護效果的評估涉及到以下內(nèi)容：安全柜防護效果的評估涉及到以下內(nèi)容：安全柜的完整性安全柜的完整性 人員、產(chǎn)品及交叉污染保護人員、產(chǎn)品及交叉污染