兒茶酚胺的分離檢測(cè)方法概述

1、兒茶酚胺的分離檢測(cè)方法概述佳木斯大學(xué)藥學(xué)院藥學(xué)專業(yè)班級(jí):一班姓名：姜亭亭學(xué)號(hào)：0911074124兒茶酚胺類物質(zhì)分離分析方法概述（姜亭亭 佳木斯大學(xué)藥學(xué)院藥學(xué)一班）摘要兒茶酚胺類物質(zhì)是一種內(nèi)源性物質(zhì)，當(dāng)其的含量發(fā)生顯著變化時(shí)，就代表人 體出現(xiàn)了一些病變，如巴金森氏病、高血壓等，著要對(duì)這些疾病進(jìn)行診斷和治療，兒茶酚 胺類物質(zhì)的檢出和定量是不可缺少的手段，本文通過引用一些文獻(xiàn)對(duì)兒茶酚胺類物質(zhì)的一 些分離分析方法進(jìn)行了概述。關(guān)鍵詞兒茶酚胺；分離；檢測(cè)兒茶酚胺類物質(zhì)作為交感腎上腺素能神經(jīng)元和腎上腺髓質(zhì)合成與釋放的單胺類神經(jīng)遞 質(zhì)，是生物體內(nèi)具有較強(qiáng)生理學(xué)效應(yīng)的內(nèi)源性活性物質(zhì)，它包括去甲腎上腺素（NE）

2、、5- 羥色胺（5-HT）、腎上腺素（E）和多巴胺（DA）,這一類物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是都含有一 個(gè)雙羥基苯核和一個(gè)帶氨基的側(cè)鏈。此類物質(zhì)在腦和神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)中起著重要的作用并且 與多種生理、病理現(xiàn)象密切相關(guān)，參與心率呼吸和睡眠等植物神經(jīng)功能調(diào)控，是一類重 要的神經(jīng)遞質(zhì)，與人們的健康有密切關(guān)系。在醫(yī)學(xué)方面其含量測(cè)定不僅可作為神經(jīng)母細(xì)胞 瘤、嗜銘細(xì)胞瘤和原發(fā)性高血壓的診斷依據(jù)，而且可應(yīng)用于其他兒茶酚胺相關(guān)的疾病研究, 如傳統(tǒng)兒茶酚胺類物質(zhì)活動(dòng)癥、憂郁癥及神經(jīng)系統(tǒng)變性病變?nèi)缗两鹕暇C合癥，還與心血 管疾病等的出現(xiàn)有關(guān)。因此兒茶酚胺的分析在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)方面有著重要意義，此類物質(zhì) 的分離分析就更為關(guān)鍵，然

3、而使用正確的方法是得到正確的結(jié)論前提5。早在20世紀(jì)40年代人們已經(jīng)開始對(duì)兒茶酚胺類物質(zhì)的檢測(cè)分析4,早期的測(cè)定方法主要是三羥基口引喋法和乙二胺縮合法.隨著分析科學(xué)的蓬勃發(fā)展人們對(duì)兒茶酚胺研究己經(jīng)更加深入，目前主要的分離檢測(cè)方法主要有高 效液相色譜法(HPLC)、毛細(xì)管電泳法(CE)、化學(xué)修飾電極法、氣相色譜法(GC)、離 子交換色譜(IEC)、能催化動(dòng)力學(xué)光度法以及與質(zhì)譜、電化學(xué)檢測(cè)法、熒光檢測(cè)法、化 學(xué)發(fā)光檢測(cè)法之間的聯(lián)用等1-5, 7, 8, 1076, 18, 21-22。1化學(xué)修飾電極法兒茶酚胺在固體電極上的電子傳遞速率非常緩慢，旦其本身或反應(yīng)產(chǎn)物易在電極表面 吸附，導(dǎo)致電極表面鈍化

4、。利用具有特定功能的化學(xué)修飾電極可避免電極表面的污染，提 供三維空間反應(yīng)場(chǎng)，從而進(jìn)行電催化測(cè)定。莫金垣等24人研究了血紅素修飾電極上兒茶 酚胺的電催化測(cè)定，DA和E的線性范圍達(dá)L0*10-7l*10-4mol/L和8*10-8 4*10-5 mol/Lo餓配位聚合物因其獨(dú)特的電子轉(zhuǎn)移特性，己被廣泛地應(yīng)用于化學(xué)修飾電極的制備。 倪靜安等25人用碳及石墨作基底,討論了 0s(bpy)2(PVP)10Cl Cl (OsP)修飾碳基電的 制備及電化學(xué)性質(zhì)，研究了三種神經(jīng)遞質(zhì)在OsP電極上的電催化行為，測(cè)得DA、E和NE 的線性范圍分別為(TO. Immol/L、600. Immol/L和00. 13m

5、mol/La實(shí)驗(yàn)證明化學(xué)修飾電極 法十一中高選擇性的，可連續(xù)測(cè)定的方法3。2高效液相色譜法(HPLC)高效液相色譜法是在經(jīng)典液相色譜發(fā)的基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜法的理論和實(shí)驗(yàn)技術(shù), 以高壓輸送流動(dòng)相，采用高靈敏度檢測(cè)器，發(fā)展而成的現(xiàn)代液相色譜分析方法。其中高效 液相色譜與電化學(xué)檢測(cè)法、熒光檢測(cè)法、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法、紫外檢測(cè)的聯(lián)用應(yīng)用比較廣泛。 2.1高效液相色譜-紫外檢測(cè)(HPLC- UV)法梁秋云等2在高效液相色譜-紫外檢測(cè)(HPLC- UV)法測(cè)定自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)血 漿中去甲腎上腺素(NA)的含量實(shí)驗(yàn)中，他們以C18為色譜柱，以甲醇- 0. 15 mol* L-1磷 酸二氫鉀緩沖液(

6、1： 9, V/V, PH6.0)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為280nm,柱溫為室溫，流速為 1.0 mL *min-lo結(jié)果顯示NA檢測(cè)濃度線性范圍為0. 540微克每升(廠0. 999 9),最 低檢測(cè)濃度為0.05微克每升。平均回收率為97. 49%, RSD小于3.81%。本方法線性、 精密度、回收率良好，靈敏度高，操作簡便，可用于NA的藥動(dòng)學(xué)及相關(guān)研窕。2. 2高效 液相色譜-熒光檢測(cè)(HPLC-FD )法此方法為高效液相色譜與熒光檢測(cè)法的聯(lián)用。鄧向軍6在高效液相-熒光檢測(cè)法測(cè)定 尿液中兒茶酚胺類化合物的含量中就是運(yùn)用了此方法，他采用真空濃縮和真空干燥法對(duì)樣 品進(jìn)行預(yù)處理，H PLC-FD測(cè)

7、定結(jié)果線性關(guān)系良好，回收率較高，得出此方法準(zhǔn)確性好、 離效率高、操作簡單、易于控制操作條件、CA s具有高靈敏度和高對(duì)選擇性等眾多優(yōu)點(diǎn)。方蘭云等13在測(cè)定血漿中的兒茶酚胺及其代謝產(chǎn)物中乂加入了 固相萃取，他們采取采用固相萃取方法對(duì)血漿樣品進(jìn)行預(yù)處理,利用高效液相色譜分離待測(cè)物，最后使用熒光檢測(cè)器檢測(cè)兒茶酚胺及其代謝產(chǎn)物。C18小柱處理加標(biāo)血漿樣品，在優(yōu) 化的最佳洗脫條件下，加標(biāo)回收率在85. 6% 106. 3%范圍內(nèi)。方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD ) 為2 3 % 6 7 %。各被測(cè)物質(zhì)線性關(guān)系良好，方法準(zhǔn)確和精密，但熒光粉光光度法前 處理復(fù)雜，不能把集中成分完全分開8。2. 3高效液相色譜-串

8、聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS)法此方法是高效液相色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用，王賢親等21液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定人血 漿中兒茶酚胺的含量中就是運(yùn)用的此方法進(jìn)行定量分析。腎上腺素、去甲腎上腺素和多巴 胺的最小檢測(cè)限(L0D)在4. 3, 2.4和6. 6ng/mL之間，濃度在0 500 ng/ mL范圍內(nèi) 線性良好(r=0. 9921),平均回收率在85. 8% 93. 4%之間，日內(nèi)、日間精密度 RSD為9與 ( n=5) 結(jié)果表明該方法專屬性強(qiáng)、靈敏及準(zhǔn)確，具有二次分離作用、專屬 性強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，分析時(shí)間短的優(yōu)勢(shì)，適用r-人血漿中兒茶酚胺快速分析的需要，可以適用于 人血漿兒茶酚胺的快速分析。還可以有HPLC- F