焦慮抑郁行為學(xué)試驗方法

1、1、 曠場實驗Open field test又稱敞箱實驗,就是評價實驗動物在新異環(huán)境中自主行為、 探究行為與緊張度的一種方法.例如動物對新開闊環(huán)境的恐懼而主要在周邊區(qū)域活動,在中央?yún)^(qū)域活動較少,但動物的探究特性又促使其產(chǎn)生在中央?yún)^(qū)域活動的動機.1 .開口的木盒底部形成16個等大的方格.場地中央置一彩色瓶子以激發(fā)小鼠的好奇心. 照明來自一高出場地中央2、80 m的40 W白熾燈.2 .預(yù)適應(yīng)：每只小鼠放入場地中央自由活動 3min3 .每只小鼠面朝墻放入同一個拐角方格,并讓其自由探索環(huán)境5 min.4 .每只小鼠測試結(jié)束后,濕布洗擦場地并用干布擦干.5 .數(shù)據(jù)分析：跨越方格總數(shù)以雙后肢跨出作為標

2、準,時間也以后肢為算.第一格的潛伏 期、周邊時間、抬腿次數(shù)雙腿離地.2、 高架十字迷宮elevated plus-maze,EPM就是非條件反射模型,以動物自發(fā)的恐懼樣反應(yīng)為行為學(xué)根底.高架十字迷宮實驗就就是由于動物對新環(huán)境的探究與對高懸開放臂的恐 懼而形成的矛盾沖突狀態(tài),從而反映出動物的焦慮情緒,所以高架十字迷宮既可以建立非條 件反射焦慮動物模型,也可以作為測量動物焦慮反響的方法.1 .將實驗動物放入迷宮中央?yún)^(qū),頭朝開臂,并注意此后每只實驗動物均放在同一位置.2 .同時開啟攝像監(jiān)控器記錄5min內(nèi)實驗動物開臂與閉臂的進入次數(shù)及進入各臂的時間.實驗過程中實驗者需距離迷宮1米的距離.3 .記錄結(jié)

3、束后將實驗動物放回飼養(yǎng)籠具內(nèi).同時清理迷宮,并用5%勺醋酸水溶液或75% 的酒精擦拭迷宮,借以消除動物氣味對后繼實驗動物的影響.4 .分析：1開臂進入次數(shù)百分比=開臂進入次數(shù)/開臂進入次數(shù)十閉臂進入次數(shù)2開臂滯留時間百分比= 開臂滯留時間/開臂滯留時間+閉臂滯留時間進入開放臂時間百分比與進入開放臂次數(shù)百分比反映了動物的焦慮狀態(tài)；進入開放臂與封閉臂總次數(shù)反映動物的運動水平晌下探究次數(shù)反映了動物在非保護區(qū)內(nèi)的探索行為,與焦 慮程度有一定相關(guān)性.3、 明暗穿梭實驗：回避實驗就是利用動物的好暗避光明暗穿梭而建立起來的.1 .將小鼠放入明箱,讓小鼠進行自由穿梭,觀察5min.2 .每只小鼠測試結(jié)束后,濕

4、布洗擦場地并用干布擦干.3 、分析：穿梭次數(shù)、潛伏期、明箱活動時間、明箱活動時間百分比、暗想活動時間、暗箱活動時間百分比、總路程、明箱活動路程、暗箱活動路程.四、洞板實驗一根本原理孔板實驗就是Boissiex與Simon1962年首次建立的,此后被廣泛用于藥效研究.該實驗就是利 用新奇curiosity與恐懼fear兩個因素來限制動物在新環(huán)境下的行為,用逃避escapes來反映 這兩個因素的作用結(jié)果.動物反復(fù)鉆頭head dipping反映其新奇感與對逃避的渴望.一般 認為,藥物在不影響動物運動活性的劑量下,增加鉆頭次數(shù)與時間,表現(xiàn)為抗焦慮作用,減少鉆頭 次數(shù)與時間那么為致焦慮作用.二操作步驟

5、大鼠與小鼠的實驗裝置有所不同.大鼠裝置為一個66cm x 56cm x 47cm的木箱,底板有4個直 徑為3、8cm、深1 cm的等大圓孔,其中兩孔離最近壁14cm,另兩孔17cm,孔板水平抬高12em; 小鼠木箱為44cm x 40cm x 27cm , 4個孔的孔徑均為3cm,厚1、8cm,每孔中央離最近壁的距 離為10cm.80年代之后,孔板箱壁及每一孔周邊都裝有紅外光電管,并與微機相聯(lián),這樣可同 時自動記錄動物的鉆頭次數(shù)與鉆頭時間、運動活性及站立數(shù)等多項指標,既提升了工作效率,又增加了實驗的可靠性.實驗用雄性成年的大鼠或小鼠.將動物置于孔板中央,背朝觀察者.動物兩眼消失在洞中為一次鉆頭

6、a head dip,記錄5-10min的鉆頭次數(shù)及鉆頭持續(xù)時間. 三考前須知與評價對孔板箱的形狀與大小沒有統(tǒng)一的標準,但常采用方型,其邊長在大鼠一般60cm,小鼠為40c m左右.孔的數(shù)量早期多為16孔,現(xiàn)在通常采用4孔板.動物在上午的鉆頭數(shù)往往比下午多.因此,應(yīng)盡量在每天固定的時間內(nèi)做實驗.4本實驗對致焦慮藥如BDZ受體反相沖動劑引起探究性鉆頭的特異性降低結(jié)果較為一致, 而某些缺乏抗焦慮作用的藥物如BDZ受體拮抗劑氟馬西尼反可使探究性鉆頭增加.故在篩 選未知藥物時應(yīng)結(jié)合其它焦慮模型進行評價.五、強迫游泳實驗Forced Swimming Test, FST僚統(tǒng)主要用于抗抑郁、鎮(zhèn)靜以及止痛類

7、藥物的 研究.該系統(tǒng)適用于大鼠、小鼠或其她實驗室動物,通過將實驗動物置于一個局限的環(huán)境中如 水中,動物在該環(huán)境中拼命掙扎試圖逃跑又無法逃脫,從而提供了一個無可回避的壓迫環(huán)境,一段時間的實驗后,動物即表現(xiàn)出典型的不動狀態(tài)反映了一種被稱之為行為絕望狀態(tài)記錄 處于該環(huán)境的動物產(chǎn)生絕望的不動狀態(tài)過程中的一系列參數(shù).該系統(tǒng)使用攝像頭對實驗過程 錄像并用相應(yīng)軟件對圖像進行跟蹤分析,減少人為操作,數(shù)據(jù)客觀.強迫游泳的抑郁癥動物模型, 就是研究人類抑郁癥藥理學(xué)及其發(fā)病機理、篩選觀察抗抑郁藥物研究中可靠的實驗?zāi)Ｐ?其主要的特點就是藥物作用的高度特異性,該實驗?zāi)軌蚝芎玫膶⒖挂钟羲幬锱c強安定與抗焦慮藥 加以區(qū)別,而

8、且大多數(shù)抗抑郁藥所產(chǎn)生的效應(yīng)與臨床效價顯著相關(guān),這已為廣闊學(xué)者所接受.焦慮抑郁行為學(xué)實驗方法1977年,P o r s o l t R D首次應(yīng)用強迫游泳實驗檢測抗抑郁藥物的作用.后來強迫游泳實驗 就成為評價藥物抗抑郁作用的動物模型.該實驗方法就是一種行為絕望實驗法,其根本原理就是當大鼠或小鼠放進一個有限的空間使之游泳,開始時拼命游泳力圖逃脫 很快就變成漂浮不 動狀態(tài),僅露出鼻孔保持呼吸,四肢偶爾劃動以保持身體不至于沉下去,實際就是動物放棄逃 脫的希望,屬于行為絕望.經(jīng)典的強迫游泳實驗分兩天進行.第一天讓大鼠或小鼠在2 5 C的深水中強迫游泳 15 m i n ,取出后在犯C溫室烘干,歸籠.第

9、二天,在同樣的條件下進行強迫游泳 5 m i n ,記 錄不動時間.M i r u a H等將強迫游泳的時間改為1 0 3 0 m i n i ' 1 .張中啟 等在實驗第2天直接觀察小鼠強迫游泳6 m i n內(nèi)后4 m i n的不動時間圖.這些都就是對經(jīng) 典實驗方法所做的修改.大鼠或小鼠的不動時間就是判斷抗抑郁藥物作用的指標.不動時間 越短,抗抑郁作用越強.D e t k e等將強迫游泳中的行為分成4類：游泳動物在水中四處游動、攀爬動物前爪劃 動水面,碰觸缸壁、潛水動物整個身體沉于水下與不動動物四肢不動漂浮于水面,僅 頭部露出水面呼吸.經(jīng)實驗證實不同機制的抗抑郁藥影響不同的行

10、為,如地昔帕明與馬普替 林N E再攝取才制劑可選擇性增加大鼠的攀爬行為,而氟西汀5 - H T再攝取抑制劑選 擇性增加大鼠的游泳行為川.六、懸尾實驗Tail suspension test, TSTft是一種經(jīng)典而又能快速評價抗抑郁藥物、興奮藥物、 鎮(zhèn)靜藥物藥效的方法.其原理就是利用小鼠懸尾后企圖逃脫但又無法逃脫,從而放棄掙扎,進入 特有的抑郁不動狀態(tài),實驗過程中記錄動物不動時間來反映抑郁狀態(tài),抗抑郁藥物、興奮藥物能 明顯地縮短改變其狀態(tài).末次給藥1 h后,將小鼠尾部距末端約1 cm處用夾子固定,使其倒吊 于距地面15 cm左右的橫桿上,動物為克服不正常體位而掙扎活動,但活動一段時間后,出現(xiàn)問 斷性不動,顯示失望狀態(tài),累計各組8 min內(nèi)的不動時間七、新環(huán)境進食抑制實驗Novelty suppressed feeding test, NSF:使用邊長50cm、高40cm箱底鋪勻2cm高木削的 試驗箱,箱底中央放置糖丸或小塊食