醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則

1、附件醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則一、臨床基因擴增檢驗實驗室的設計（一）臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設計原則。原則上臨床 基因擴增檢驗實驗室應當設置以下區(qū)域：試劑儲存和準 備區(qū)、標 本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū)。這4個區(qū)域在物理空間上 必須是完全相互獨立的，各區(qū)域無論是在空間上還是在使用中， 應當始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。根據使 用儀器的功能，區(qū)域可適當合并。例如使用實時熒光PCR儀， 擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū)可合并；采用樣本處理、核酸提取及擴 增檢測為一體的自動化分析儀，則標本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產 物分析區(qū)可合并。各區(qū)的功能是：1 試劑儲存和準備區(qū)：貯存試劑的制

2、備、試劑的分裝和擴增 反應混合液的準備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。2. 標本制備區(qū)：核酸（RNA、DNA ）提取、貯存及其加 入至擴增反應管。對于涉及臨床樣本的操作，應符合生物安全二 級實驗室防護設備、個人防護和操作規(guī)范的要求。3. 擴增區(qū)：cDNA合成、DNA擴增及檢測。4. 擴增產物分析區(qū)：擴增片段的進一步分析測定，如雜交、 酶切電泳、變性高效液相分析、測序等。(二) 臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向。臨床基因擴 增檢驗實驗室的空氣流向可按照試劑儲存和準備區(qū)一標本制備區(qū) -擴增區(qū)一擴增產物分析區(qū)進行，防止擴增產物順空氣氣流進入 擴增前的區(qū)域。可按照從試劑儲存和準備區(qū)一標本制備區(qū)

3、一擴增 區(qū)一擴增產物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進行?？赏ㄟ^安裝 排風扇、負壓排風裝置或其他可行的方式實現。(三) 工作區(qū)域儀器設備配置標準。1 試劑儲存和準備區(qū)。(1 ) 28°C和-20 °C以下冰箱。(2) 混勻器。(3) 微量加樣器(覆蓋021000卩1 )。(4) 可移動紫外燈(近工作臺面)。(5 )消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器 吸頭。(6) 專用工作服和工作鞋(套)。(7) 專用辦公用品。2. 標本制備區(qū)。(1) 2-8 °C 冰箱、-20 °C 或-80 °C 冰箱。(2 )高速離心機。(3)混勻器。(4 )水浴

4、箱或加熱模塊。(5) 微量加樣器(覆蓋021000川)。(6) 可移動紫外燈(近工作臺面)。(7 )生物安全柜。(8 )消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器 吸頭(帶濾芯)。(9)專用工作服和工作鞋(套)。(10 )專用辦公用品。(11 )如需處理大分子DNA，應當具有超聲波水浴儀。3. 擴增區(qū)。(1 )核酸擴增儀。(2) 微量加樣器(覆蓋0.2-1000 |11 )，(視情況定)(3) 可移動紫外燈(近工作臺面)。(4 )消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器 吸頭(帶濾芯)。(5) 專用工作服和工作鞋。(6) 專用辦公用品。4. 擴增產物分析區(qū)。視檢驗方法不同而定，基本配

5、置如下：(1) 微量加樣器(覆蓋0.2-1000 |11 )。(2) 可移動紫外燈(近工作臺面)。(3 )消耗品：一次性手套、加樣器吸頭(帶濾芯)。(4) 專用工作服和工作鞋。（5）專用辦公用品。上述各區(qū)域儀器設備配備為基本配 備，實驗室應當根據自己使用的擴增檢測技術或試劑的特點，對 儀器設備進行必要的增減。二、臨床基因擴增檢驗實驗室工作基本原則（一）進入各工作區(qū)域應當嚴格按照單一方向進行，即試劑 儲存和準備區(qū)-標本制備區(qū)一擴增區(qū)-擴增產物分析區(qū)。（二）各工作區(qū)域必須有明確的標記，不同工作區(qū)域內的設 備、物品不得混用。（三）不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏 色）。工作人員離開各工作

6、區(qū)域時，不得將工作服帶出。（四）實驗室的清潔應當按試劑貯存和準備區(qū)一標本制備 區(qū) -擴增區(qū)一擴增產物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應當有 其各自的清潔用具以防止交叉污染。（五）工作結束后，必須立即對工作區(qū)進行清潔。工作區(qū)的 實驗臺表面應當可耐受諸如次氯酸鈉的化學物質的消毒清潔作 用。實驗臺表面的紫外照射應當方便有效。由于紫夕卜照射的距離 和能量對去污染的效果非常尖鍵，因此可使用可移動紫外燈（254nm波長），在工作完成后調至實驗臺上 6090cm內照射。由于擴增產物僅幾百或幾十堿基對（bp），對紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴增片段必須延長 照射時間，最好是照射過夜。（六）實驗室的安全工作制

7、度或安全標準操作程序，所有 操 作符合實驗室生物安全通用要求（GB194891008 ）三、臨床基因擴增檢驗實驗室各區(qū)域工作注意事項（一）試劑儲存和準備區(qū)。貯存試劑和用于標本制備的消耗 品等材料應當直接運送至試劑貯存和準備區(qū)，不能經過擴增檢測 區(qū)，試劑盒中的陽性對照品及質控品不應當保存在該區(qū)，應當保 存在標本處理區(qū)。（二）標本制備區(qū)。由于在樣本混合、核酸純化過程中可能 會發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過在本區(qū)內設立正壓條 件，避免 從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的 交叉污染，加 入待測核酸后，必須蓋好含反應混合液的反應 管。對具有潛在傳 染危險性的材料，必須在生物安全柜內開 蓋，并有明

8、確的樣本處 理和滅活程序。（三）擴增區(qū)。為避免氣溶膠所致的污染，應當盡量減少 在 本區(qū)內的走動。必須注意的是，所有經過檢測的反應管不 得在此 區(qū)域打開。（四）擴增產物分析區(qū)。核酸擴增后產物的分析方法多種 多 樣,如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法（放射性核素標記或 非放射性核素標記）、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰 胺凝膠電泳、Southern轉移、核酸測序方法、質譜分析等。本 區(qū)是最主要的擴增產物污染來源，因此必須注意避免通過本區(qū)的 物品及工作服將擴增產物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴增 產物時'必須使用洗板機洗板'廢液必須收集至1 mol/L HCI 中，并且不能在實驗室內傾倒，而應當