凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程

1、凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程(SOP文件)1目的作為介質(zhì)輔助用于完全抗體及不完全抗體的臨床篩選檢測(cè)及輔 助用于臨床交叉配血實(shí)驗(yàn)。2檢驗(yàn)原理 紅細(xì)胞表面帶有大量的負(fù)電荷，以避免其產(chǎn)生自發(fā)性聚 集，當(dāng)紅細(xì)胞懸浮在電解質(zhì)時(shí)，陽離子會(huì)被紅細(xì)胞的負(fù)電荷 所吸 引，此時(shí)紅細(xì)胞則被擴(kuò)散的雙層離子云所圍繞，而形成Zeta電 位，Zeta電位決定紅細(xì)胞之間的排斥作用。凝聚胺技術(shù)首先利用低離子溶液(LIM)，降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，以促進(jìn)紅細(xì)胞和血清(血 漿)中 的抗體結(jié)合。其后，加入凝聚胺(Polybrene)溶液，它是一種高價(jià)陽離子多 聚物、肝素中和劑，溶

2、解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細(xì)胞表 面帶有的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞Zeta電位降低，縮 短紅細(xì)胞之間的距 離，使紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性的凝聚。最后，加入懸浮液(Resuspending),Resuspending 具有中和凝聚胺(Polybrene)陽 離子的作用，使正常的紅細(xì)胞非特異性凝聚散開，試驗(yàn)結(jié)果為陰 性旦如果紅細(xì)胞被相應(yīng)的抗體致敏，則會(huì)被凝聚胺凝結(jié)，凝集就 不會(huì)散開，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。3儲(chǔ)存條件及有效期未開封試劑應(yīng)貯存于2cs 25C、相對(duì)濕度不大于80%無腐蝕 性氣體的室內(nèi)；已開封試劑應(yīng)貯存于相對(duì)濕度不大于80%，無腐蝕 性氣體和通風(fēng)良好的室溫環(huán)境，試劑用后應(yīng)及時(shí)擰緊瓶蓋保存；未 開封試劑

3、的有效期為二年，在有效期內(nèi)的已開封試劑應(yīng)在開封后的 6個(gè)月內(nèi)使用完。4樣本要求4.1 新鮮血清，含EDTA抗凝血漿、3%5 （的紅細(xì)胞懸液。4.2 不能使用溶血標(biāo)本及含枸檬酸鈉、肝素抗凝血漿標(biāo)本。5檢驗(yàn)方法輔助交叉配血試驗(yàn)5.1 取試管二支，標(biāo)主次側(cè)，主側(cè)管加病人血清（血漿）2滴，加 供血者3%5%紅細(xì)胞懸液（洗滌或不洗滌均可）1滴，次側(cè)管 反之。5.2 各加LIMO.65ml,混合均勻后，再各加Polybrene溶液2滴， 并混合均勻。5.3 用離心機(jī)3400轉(zhuǎn)/min （相當(dāng)于1000g離心力）離心10秒，然 后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。5.4 輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)

4、紅細(xì)胞有無凝集，如無凝集，則必須要重 做。5.5 最后加入Resuspending 2滴，輕輕搖動(dòng)試管混合并同時(shí) 觀察結(jié)果。如果在60秒內(nèi)凝集散開，代表是由Polybrene引起的非特 異性聚集，配血結(jié)果相合；如凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不相合。如反應(yīng)可 疑，可進(jìn)一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。6注意事項(xiàng)6.1 可以用含EDTA之血漿代替血清使用。6.2 若病人血清（血漿）含肝素，如洗腎患者，須多加46滴 Polybrene溶液以中和肝素。6.3 本試劑盒的操作方法也適用于抗體鑒定。6.4 若試劑使用前為低溫貯存，請(qǐng)回復(fù)室溫再行操作。6.5 加做輔助性抗人球蛋白試驗(yàn)，

5、目的是增加檢測(cè)抗-K的敏感 性。6.6 在冬天室溫極低的情況下，操作交叉配血試驗(yàn)，某些病人血清中可能含有冷凝集素等因素，而導(dǎo)致假陽性的結(jié)果出現(xiàn)。若 有此懷疑，建議在最后滴入Resuspending時(shí)，將試 管立即置入 37C水浴中，輕輕搖動(dòng)試管混合，并在60秒內(nèi)觀察結(jié)果。6.7 紅細(xì)胞抗原檢測(cè)步驟同抗體篩檢試驗(yàn)，其檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)血清用已 知標(biāo)準(zhǔn)血清。3 /28凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程6.8 用戶可使用IgG抗D抗體（效價(jià)64）與RhD陽性紅細(xì) 胞反 應(yīng)做陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，測(cè)試本試劑的有效性。#/28凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程ABO血型定型操作規(guī)程（SOP文件）1目的用于鑒定人ABO血型2檢驗(yàn)原

6、理本品系用產(chǎn)生抗A或抗B血型抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液 （或在上清液中加入少量同型腹水）配制而成，采用凝集試驗(yàn)原 理，專供鑒定人ABO血型用。3樣本要求本試劑適用于全血或10%、5 %紅細(xì)胞懸液。4檢驗(yàn)方法平板法（玻片法）：本品與受檢者全血或10%紅細(xì)胞生理 氯化鈉懸液按1:1攪勻，不必再稀釋，按照有無凝集判定結(jié)果5結(jié)果判斷血型抗A試劑抗B試劑A+BMB+O.AB+注：“+”有凝集反應(yīng)無凝集反應(yīng)6檢驗(yàn)結(jié)果的解釋將已知的抗A、抗B血型定型試劑與受檢者的紅細(xì)胞混合時(shí)，與抗A血型定型試劑發(fā)生凝集者即為A型血型，與抗B血型定型ABO血型反定型操作規(guī)程（SOP文件）試劑發(fā)生凝集者即為B型血型，與抗A、抗

7、B血型定型試劑均發(fā) 生凝集者即為AB型血型，與抗A、抗B血型定 型試劑均不發(fā)生凝 集者即為0型血型。7注意事項(xiàng)7.1 對(duì)含有較多自身冷凝集的受檢者，在鑒定血型時(shí)往往被誤 認(rèn)為AB血型，遇到此種情況，需用37生理氯化鈉溶液洗滌受 檢者細(xì)胞2-3次，以去除吸附在紅細(xì)胞上的凝集素，然后再鑒定 血型。7.2 在做配型試驗(yàn)時(shí)，如發(fā)現(xiàn)有不配合現(xiàn)象，則取受檢者血 清，用已知A血型或B血型細(xì)胞進(jìn)行反定型試驗(yàn)，以核實(shí)原鑒定 的血型是否正確。7.3 用立即試管法不能測(cè)出亞型（如 Ax），需延長作用時(shí) 間。7.4 本品如出現(xiàn)渾濁或變色則不能使用，若開瓶使用時(shí)間較長 后，最好用已知ABO血型紅細(xì)胞檢查結(jié)果是否與已知血

8、型相符， 以防制品污染，變質(zhì)失效，而造成鑒定錯(cuò)誤。7.5 在有效期內(nèi)使用。5/28凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程1目的用于ABO血型的反定型檢測(cè)，該產(chǎn)品不用于血源篩查。2檢驗(yàn)原理本品系采用三人份同型混合的A1型、B型和。型合格人紅細(xì)胞經(jīng)洗滌后懸浮于紅細(xì)胞保存液中配制而成。采用凝集試驗(yàn)原 理，用已知的A1，B，O型紅細(xì)胞測(cè)定被檢者血清/血漿中有無相 應(yīng)的抗A或抗B抗體（反定型試驗(yàn)），結(jié)合正定型結(jié)果判定 ABO血型。3檢驗(yàn)方法試管法3.1 取被檢者血清/血漿各503分別加入3支標(biāo)記好的試管中；3.2 分別各加50ulA1、B、O試劑紅細(xì)胞；3.3 搖動(dòng)試管，混勻。于900g離心15s，或室溫靜止1

9、h;3.4 首先檢查是否溶血，（溶血可能是陽性結(jié)果，或是細(xì)菌污 染。）輕輕搖動(dòng)懸浮紅細(xì)胞。3.5 觀察凝集情況，并立即記錄結(jié)果。必要時(shí)可借助顯微鏡觀測(cè)。 4檢驗(yàn)結(jié)果的解釋ABO血型正反定型反應(yīng)格局表正定型反定型血型抗A試劑|抗B試劑A1細(xì)胞B細(xì)胞|。細(xì)胞ABO仰型于定型操作熱程 （SOP文件）.+一.B+.0+一一AB注：“+”有凝集反應(yīng)，“丁無凝集反應(yīng)5注意事項(xiàng)5.1 如果在反定型試驗(yàn)中，受檢者的血清/血漿與。血型紅細(xì)胞試 劑產(chǎn)生陽性反應(yīng)，貝懦要添加自身對(duì)照試驗(yàn)。如果自身對(duì)照為陽 性，表明是冷凝集素導(dǎo)致。如果自身對(duì)照為陰性，則表明被檢者血 清或血漿中可能存在ABO系統(tǒng)以外的其他血型系統(tǒng)的抗體

10、干擾定型。請(qǐng)按照相關(guān)的試驗(yàn)方法解決上述定型問 題。5.2 本品如出現(xiàn)紅細(xì)胞顏色變成暗紫色或紅細(xì)胞自發(fā)凝集，出現(xiàn)菌 落或溶血，則不能使用。若開瓶使用時(shí)間較長后，最好用注冊(cè)上市 的抗A、抗B血型定型試劑檢查結(jié)果是否與已知血型相符，以防 制品污染、變質(zhì)失效、而造成檢定錯(cuò)誤。5.3 為了便于鑒別，A1血型紅細(xì)胞試劑標(biāo)簽為藍(lán)色，B血型紅細(xì)胞試劑標(biāo)簽為黃色，0血型紅細(xì)胞試劑標(biāo)簽為紅色。9/28凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程乙型肝炎病毒表面抗原操作規(guī)程（SOP文件）1 .目的用于血液的篩查和臨床乙型肝炎病毒感染的輔助診斷。2 .檢驗(yàn)原理本品系用乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）包被的微孔板和酶標(biāo) 記抗-HBs及

11、其他試劑制成，應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法原理檢 測(cè)人血清和血漿中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）3 .適用儀器微量移液器；37 C恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機(jī)或洗瓶；計(jì)時(shí) 器；酶標(biāo)儀，檢測(cè)波長450nmT,參考波長630nmo4 .樣本要求4.1 樣本采集不需要特殊準(zhǔn)備，按照正常的采血技術(shù)收集血液，全血樣本最好先放置37C處理2小時(shí)，再將血樣本充分離 心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不含有或極 少含有血細(xì)胞。如果為抗凝血樣本，應(yīng)將血樣本充分離心后，最好 再放置室溫2小時(shí)以上。4.2 樣本中含有疊氮鈉會(huì)影響試驗(yàn)的結(jié)果，高度溶血的樣本、沒 完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本可

12、能會(huì)引起錯(cuò)誤的結(jié) 果。4.3 新鮮的樣本在2 s 8c無菌條件下可保存一周，新鮮樣本可長期 貯存在-20 C或以下,避免反復(fù)凍融。1.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時(shí)將洗滌液進(jìn)行1 ：40倍稀釋。1.2 設(shè)陽性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照3孔，空白對(duì)照1孔。1.3 力口樣：在陽性對(duì)照、陰性對(duì)照孔內(nèi)分別加入陽性對(duì)照、 陰性對(duì)照50ul，其余每孔加待測(cè)血清或血漿50ul。蓋上封孔膠 片，置37c水浴孵育60分鐘。1.4 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后， 拍干孔內(nèi)液體。1.5 加酶結(jié)合物：空白孔除外，每孔各加酶結(jié)合物50ul。蓋上 封孔膠片，置37 c水浴孵

13、育30分鐘。1.6 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后， 拍干孔內(nèi)液體。1.7 加底物液：每孔先加底物液A50ul，再加底物液B50ul,混 勻，蓋上封孔膠片，置37C條件下避光顯色30分鐘后，加終止 液50ul，混勻，終止反應(yīng)。6 .參考值（參考范圍）終止后盡快測(cè)定，波長450nm，先用空白孔校零，測(cè)0D值。如果選用雙波長測(cè)定，不必設(shè)置空白對(duì)照空。按下列公式計(jì)算：COV=陰性對(duì)照平均0D值X 2.1倍陰性對(duì)照平均0D值低于或等于0.05，按0.05計(jì)算；高于0.05時(shí)，按照實(shí)際OD值計(jì)算。7 .檢驗(yàn)結(jié)果的解釋樣品OD值S/COV 1時(shí)，待測(cè)樣本HBsAg為陽性；樣品0D值S/

14、COVk 1時(shí)，待測(cè)樣本HBsAg為陰性。8 .注意事項(xiàng)8.1 本品僅用于體外診斷，僅限檢測(cè)人體血清或血漿；檢測(cè)結(jié) 果作為診斷指標(biāo)之一。8.2 使用時(shí)，從冷藏環(huán)境取出試劑盒，置室溫平衡30分鐘 后，方可進(jìn)行測(cè)試。剩余試劑應(yīng)及時(shí)封存于冰箱內(nèi)保存，備 用。8.3 結(jié)果判定需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。8.4 封孔膠片不得重復(fù)使用。8.5 在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試驗(yàn)結(jié) 果。試劑盒在有效期內(nèi)使用，不同批號(hào)不得混用。8.6 陽性對(duì)照應(yīng)呈陽性，否則全部試驗(yàn)無效。8.7 確保樣本加樣量的準(zhǔn)確，如果加樣不準(zhǔn)確可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤 的試驗(yàn)結(jié)果。8.8 使用微量移液器加樣時(shí)，每次應(yīng)更換吸頭吸取樣本

15、。8.9 在操作過程中應(yīng)盡量避免反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。8.10 準(zhǔn)確控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間。8.11 洗板：1用洗板機(jī)洗板時(shí)，洗板機(jī)的加液量應(yīng)注意控制， 既避免洗液過量而溢出，又能充滿反應(yīng)微孔，并經(jīng)常檢查加液頭是 否堵塞；2洗板機(jī)最好每次使用前、后沖洗干凈，防止管路堵塞 或腐蝕；3洗板時(shí)所用的吸水紙請(qǐng)勿反復(fù)使用。13/28凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程8.12 本試劑盒及臨床樣本均應(yīng)視為傳染性物質(zhì)或潛在傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按相關(guān)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。9 .參考文獻(xiàn)中國藥典2010年版三部；體外診斷試劑說明書編寫指 導(dǎo)原則（國食藥監(jiān)械2007 240 號(hào)）# /凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程梅毒螺旋

16、抗體操作規(guī)程（SOP文件）1 .目的本試劑盒定性檢測(cè)人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體。適用于血 液的篩查及臨床梅毒螺旋體感染的輔助診斷。2 .檢驗(yàn)原理本試劑盒采用雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理。在微 孔條上 預(yù)包被梅毒螺旋抗體的基因重組抗原，配以酶標(biāo)記抗原及TMB顯 色劑等其他試劑，檢測(cè)人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體。3 .適用儀器加樣器、溫箱、洗板機(jī)、含波長450nm的酶標(biāo)儀。4 .樣本要求4.1 本試劑使用樣品為人血清或血漿，含有EDTA檸檬酸鈉或肝素等抗凝劑的樣品可用于本實(shí)驗(yàn)。4.2 不能檢測(cè)含懸浮纖維蛋白或聚集物、重度溶血的樣品。4.3 樣品中應(yīng)無微生物，可在2s8c儲(chǔ)存1周，長期儲(chǔ)存

17、應(yīng)低溫 凍存，避免反復(fù)凍融。4.4 使用前請(qǐng)將樣品室溫平衡30分鐘以上，冷凍樣品實(shí)驗(yàn)前需 混勻。5 .檢驗(yàn)方法5.1 配液：將濃縮洗滌液用蒸儲(chǔ)水或去離子水20倍稀釋。5.2 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔板按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照3孔，陽性對(duì)照2孔和空白對(duì)照1孔。（用雙波長檢測(cè)，可不設(shè) 空白對(duì)照孔）。5.3 加樣：分別在相應(yīng)孔中加入待測(cè)樣品或陰性、陽性對(duì)照 100ul。5.4 溫育：用封板膜封板后，置 37+ 1C溫育60 2分鐘。5.5 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板機(jī)洗滌5遍，最后一次盡量 扣干。5.6 加酶：酶孔加入酶標(biāo)試劑1003，空白孔除外。5.7 溫育：用封板膜封板后，置 37+ 1C溫育3

18、0 1分鐘。5.8 洗板：操作同步驟5.55.9 顯色：沒孔加入顯色劑A.B液各50ul，輕輕震蕩混勻，37+ 1C避光顯色30 1分鐘。臨界值（CUTOFF計(jì)算臨界值二陰性對(duì)照孔A均值NC+0.18.7 .檢驗(yàn)結(jié)果的解釋7.1 陰性對(duì)照孔A值W 0.10，陽性對(duì)照孔A值0.80.否則實(shí)驗(yàn) 無效。7.2 若有1孔陰性對(duì)照A值大于0.1應(yīng)舍棄，若兩孔或兩孔以上陰 性對(duì)照A值大于0.1，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。7.3 陰性判定：樣品A值V臨界值（CUTOFF）者為TP陰性。7.4 陽性判定：樣品A值臨界值（CUTOFF者為TP陽性（注 意：初試陽性應(yīng)重新取樣雙孔復(fù)試）。8 .注意事項(xiàng)8.1 本品僅用于體外診斷

19、，操作應(yīng)按說明書嚴(yán)格進(jìn)行。封板膜 不能重復(fù)使用，不同批號(hào)酶標(biāo)板。酶標(biāo)試劑和陰性、陽性對(duì)照不可 混用，不能與其他廠家試劑混用。8.2 避免在有揮發(fā)性物質(zhì)及次氯酸類消毒劑（如84消毒劑）的 環(huán)境下操作。8.3 使用前請(qǐng)將試劑平衡至室溫（平衡30分鐘以上），實(shí)驗(yàn)前 將試劑輕輕振蕩混勻，使用后立即放回2s 8C。未用完的微孔板條與干燥劑儀器用自封袋密封28 C保存。過期試劑請(qǐng)勿使用。8.4 加液時(shí)必須用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)加樣器的準(zhǔn)確性。加入 不同樣品或不同試劑組分時(shí)，應(yīng)更換加樣器吸頭和加樣槽，以防出 現(xiàn)交叉污染。8.5 洗滌時(shí)各孔均需加滿洗液，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。使 用洗板機(jī)應(yīng)設(shè)定30s60秒侵

20、泡時(shí)間。在洗板結(jié)束后，必須立即 進(jìn)行下一步，不可使酶標(biāo)板干燥。避免長時(shí)間的中斷實(shí)驗(yàn)步驟，以 確保每孔實(shí)驗(yàn)條件的均一。8.6 結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。讀取結(jié)果時(shí)，應(yīng)擦干酶 標(biāo)板底部，且孔內(nèi)不能有氣泡。不要觸碰孔底部的外壁，指印或劃 痕都可能影響板孔的讀值。8.7 所用樣品、廢液和廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 硫酸，使用時(shí)必須注意安全。8.8 顯色時(shí)必須加顯色劑A液后再加顯色劑B液，以免顯色過 低。8.9 由于ELISA反應(yīng)原理的限制，本試劑檢測(cè)陰性并不排除TP 感染的可能。檢測(cè)的陽性結(jié)果必須結(jié)合臨床信息進(jìn)行分析。21/甲型肝炎病毒igM抗體操作規(guī)程（SOP文件）1 .目的用本試劑盒檢測(cè)

21、人血清或血漿中的抗-HAV IgM,用于甲型肝炎的 早期診斷。2 .檢驗(yàn)原理本品系用抗人IgM （u鏈）包被的微孔板、甲型肝炎病毒（HAV）抗原和酶標(biāo)記抗甲型肝炎病毒（抗-HAV）及其他試劑制 成，應(yīng)用捕獲法原理檢測(cè)人血清或血漿中的抗-HAV IgM，用于甲型肝炎的早期診斷。3 .適用儀器微量移液器；37 C恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機(jī)或洗瓶； 計(jì)時(shí)器；酶標(biāo)儀，檢測(cè)波長450nmT,參考波長630nmo 4.樣本要求1.1 樣本采集不需要特殊準(zhǔn)備，按照正常的采血技術(shù)收集血液，全血樣本最好先放置37C處理2小時(shí)，再將血樣本充分離 心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不含有或極 少含有

22、血細(xì)胞。如果為抗凝血樣本，應(yīng)將血樣本充分離心后，最好 再放置室溫2小時(shí)以上。1.2 樣本中含有疊氮鈉會(huì)影響試驗(yàn)的結(jié)果，高度溶血的樣本、沒完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本可能會(huì)引起錯(cuò)誤的結(jié) 果。1.3 新鮮的樣本在2 s 8c無菌條件下可保存一周，新鮮樣本 可長期貯存在-20 C或以下，避免反復(fù)凍融。5 .檢驗(yàn)方法二步法5.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時(shí)將洗滌液進(jìn)行1:40倍稀釋。5.2 設(shè)陽性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照3孔，空白對(duì)照1孔。5.3 力口樣：在陽性對(duì)照、陰性對(duì)照孔內(nèi)分別加入陽性對(duì)照、陰 性對(duì)照50ul，其余每孔加待測(cè)血清或血漿50ul （或?qū)⒋郎y(cè)血清

23、 或血漿用生理鹽水1：1000稀釋后，加入到反應(yīng)孔內(nèi)），蓋上封 孔膠片，置37 c水浴孵育30分鐘。5.4 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后， 拍干孔內(nèi)液體。5.5 加酶結(jié)合物：取出酶結(jié)合物，充分混勻，每孔加50ul（空白孔除外），蓋上封孔膠片，置37 c水浴孵育30分鐘。5.6 洗板：同5.45.7 加底物液：每孔先加底物液A50ul，再加底物液B50ul,混 勻，蓋上封孔膠片，置37C條件下避光顯色15分鐘后，加終止液 50ul 混勻，終止反應(yīng)。6 .參考值（參考范圍）終止后盡快測(cè)定，波長450nm，空白孔調(diào)零，測(cè)0D值。如果選 用雙波長測(cè)定，不必設(shè)置空白對(duì)照空。按下列公

24、式計(jì)算：COV=陰性對(duì)照平均0D值X 2.1倍樣品OD值SICOV 1時(shí)為陽性樣品OD值SICOV 1時(shí)為陰性注：陰性對(duì)照平均OD值低于或等于0.05,按0.05計(jì)算；高于0.05時(shí)，按照實(shí)際OD值計(jì)算。7 .檢驗(yàn)結(jié)果的解釋7.1 陰性結(jié)果表明樣本中不含有抗-HAV IgM或抗-HAV IgM含量低 于試劑盒的檢測(cè)范圍。7.2 陽性結(jié)果表明樣本中含有抗-HAV IgM或產(chǎn)生非特異反 應(yīng)。7.3 樣本的檢驗(yàn)結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符或存在疑問時(shí)應(yīng)采用適當(dāng)?shù)?方法進(jìn)行確認(rèn)。7.4 對(duì)于待檢血清或血漿直接進(jìn)行50ul加樣，結(jié)果判為陽性的標(biāo) 本，應(yīng)對(duì)其用生理鹽水1:1000稀釋后重復(fù)實(shí)驗(yàn)并判定結(jié)果。8 .注意

25、事項(xiàng)8.1 本品僅用于體外診斷，僅限檢測(cè)人體血清或血漿；檢測(cè)結(jié)果 作為診斷指標(biāo)之一。8.2 使用時(shí)，從冷藏環(huán)境取出試劑盒，置室溫平衡30分鐘后，方 可進(jìn)行測(cè)試。剩余試劑應(yīng)及時(shí)封存于冰箱內(nèi)保存，備用。8.3 結(jié)果判定需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。8.4 封孔膠片不得重復(fù)使用。8.5 在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試驗(yàn)結(jié)果。8.6 試劑盒在有效期內(nèi)使用，不同批號(hào)不得混用。8.7 確保樣本加樣量的準(zhǔn)確，如果加樣不準(zhǔn)確可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的 試驗(yàn)結(jié)果。8.8 使用微量移液器加樣時(shí)，每次應(yīng)更換吸頭吸取樣本；如果采用滴瓶滴加時(shí)，請(qǐng)將滴瓶中液體搖勻，并棄去2滴后垂直均速滴 加，要避免組分中的液體觸到

26、或?yàn)R到微孔邊緣上，特別是酶結(jié)合 物。8.9 在操作過程中應(yīng)盡量避免反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。8.10 準(zhǔn)確控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間。8.11 洗板：1用洗板機(jī)洗板時(shí)，洗板機(jī)的加液量應(yīng)注意控制， 既避免洗液過量而溢出，又能充滿反應(yīng)微孔，并經(jīng)常檢查加液頭是 否堵塞；2洗板機(jī)最好每次使用前、后沖洗干凈，防止管路堵塞 或腐蝕；3洗板時(shí)所用的吸水紙請(qǐng)勿反復(fù)使用。8.12 本試劑盒及臨床樣本均應(yīng)視為傳染性物質(zhì)或潛在傳染性物 質(zhì)，請(qǐng)按相關(guān)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。9 .參考文獻(xiàn)中國生物制品規(guī)程2000年版凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程 丙型肝炎病毒抗體操作規(guī)程（SOP文件） 1.目的用于血液的篩查和臨床丙型肝炎病毒

27、感染的輔助診斷2 .檢驗(yàn)原理本品系用丙型肝炎病毒（HCV抗原包被的微孔板和酶標(biāo)記 抗人igG及其他試劑制成，應(yīng)用簡(jiǎn)接酶聯(lián)免疫法原理檢測(cè)人血清 或血漿樣品中的HCV抗體。3 .適用儀器微量移液器；37 C恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機(jī)或洗瓶；計(jì)時(shí) 器；酶標(biāo)儀，檢測(cè)波長450nmT,參考波長630nmo4 .樣本要求4.1 樣本采集不需要特殊準(zhǔn)備，按照正常的采血技術(shù)收集血 液，全血樣本最好先放置37 C處理2小時(shí)，再將血樣本充分離 心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不含有或極 少含有血細(xì)胞。如果為抗凝血樣本，應(yīng)將血樣本充分離心后，最好 再放置室溫2小時(shí)以上。4.2 樣本中含有疊氮鈉會(huì)影

28、響試驗(yàn)的結(jié)果，高度溶血的樣本、沒 完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本可能會(huì)引起錯(cuò)誤的結(jié) 果。4.3 新鮮的樣本在2 s 8c無菌條件下可保存一周，新鮮樣本可長期23/28凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程貯存在-20 C或以下，避免反復(fù)凍融。5 .檢驗(yàn)方法5.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時(shí)將洗滌液進(jìn)行1:40倍稀釋。5.2 設(shè)陽性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照3孔，不加樣品稀釋液，直接 加入陽性對(duì)照。陰性對(duì)照100 ul，另設(shè)空白對(duì)照1孔（只加底 物液及終止液）。5.3 加樣：在其余每孔加先加樣品稀釋液10Oul,再加待檢血清 或血漿10ul （空白孔除外），充分混勻，蓋

29、上封孔膠片，置37 C水浴孵育60分鐘。5.4 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后， 拍干孔內(nèi)液體。5.5 加酶結(jié)合物：空白孔除外，每孔各加酶結(jié)合物1003。蓋 上封孔膠片，置37 c水浴孵育30分鐘。5.6 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后， 拍干孔內(nèi)液體。5.7 加底物液：每孔先加底物液A50ul，再加底物液B503,混 勻，蓋上封孔膠片，置37C條件下避光顯色30分鐘后，加終止 液50ul，混勻，終止反應(yīng)。6/-ztr-參考（E終止后盡快測(cè)定,波長450nm，空白孔調(diào)零，測(cè)0D值。如 果選用雙波長測(cè)定，不必設(shè)置空白對(duì)照空。按下列公式計(jì)算：COV=陰性對(duì)照

30、平均0D值X 2.1倍陰性對(duì)照平均0D值低于或等于0.1，按0.1計(jì)算；高于0.1 ,按照 實(shí)際0D值計(jì)算。7結(jié)果判斷樣品0D值SICOV 1時(shí)，待測(cè)樣本為陽性；樣品0D值SICOV 1時(shí)，待測(cè)樣本為陰性。8 .注意事項(xiàng)8.1 本品僅用于體外診斷，僅限檢測(cè)人體血清或血漿；檢測(cè)結(jié) 果作為診斷指標(biāo)之一。8.2 使用時(shí)，從冷藏環(huán)境取出試劑盒，置室溫平衡30分鐘 后，方可進(jìn)行測(cè)試。剩余試劑應(yīng)及時(shí)封存于冰箱內(nèi)保存，備用。8.3 結(jié)果判定需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。8.4 封孔膠片不得重復(fù)使用。8.5 在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試驗(yàn)結(jié) 果。8.6 試劑盒在有效期內(nèi)使用，不同批號(hào)不得混用

31、。8.7 確保樣本加樣量的準(zhǔn)確，如果加樣不準(zhǔn)確可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的 試驗(yàn)結(jié)果。8.8 使用微量移液器加樣時(shí)，每次應(yīng)更換吸頭吸取樣本。8.9 在操作過程中應(yīng)盡量避免反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。8.10 準(zhǔn)確控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間。8.11 洗板：1用洗板機(jī)洗板時(shí)，洗板機(jī)的加液量應(yīng)注意控制， 既避免洗液過量而溢出，又能充滿反應(yīng)微孔，并經(jīng)常檢查加液頭是 否堵塞；2洗板機(jī)最好每次使用前、后沖洗干凈，防止管路堵塞 或腐蝕；3洗板時(shí)所用的吸水紙請(qǐng)勿反復(fù)使用。8.12 本試劑盒及臨床樣本均應(yīng)視為傳染性物質(zhì)或潛在傳染性物 質(zhì)，請(qǐng)按相關(guān)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。9 .參考文獻(xiàn)中國藥典2010年版三部體外診斷試劑說明書編寫指

32、導(dǎo)原則（國食藥監(jiān)械【2007240 號(hào)）31/HIV抗體初篩實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程（SOP文件）1 .檢驗(yàn)?zāi)康臋z驗(yàn)人體血清中是否感染HIV病毒2 .檢驗(yàn)原理本產(chǎn)品系用純化基因工程人類免疫缺陷病毒“1”型和“2”（HIV-1和HIV-2）抗原包被的微孔板和酶聯(lián)記的HIV-1和HIV-2 抗原及其它試劑組成試劑盒，應(yīng)用雙原夾心法原理檢測(cè)人血清或血 漿中的人類免疫缺陷病毒抗體，用于獻(xiàn)血員及高危人群中人類免疫 缺陷病毒的篩查。3 .檢驗(yàn)條件3.1 操作人員對(duì)本實(shí)驗(yàn)應(yīng)心中有數(shù)，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程。3.2 洗板機(jī)，酶標(biāo)儀，加樣器必須定期校正。試劑按規(guī)定保 存。4 .標(biāo)本采集4.1 門診病人由檢驗(yàn)科人員無菌抽取靜脈血

33、2ml分離血清備 用。4.2 住院病人由護(hù)士采血送檢驗(yàn)科。4.3 要避免溶血。5 .設(shè)備和試劑5.1 設(shè)備全自動(dòng)ZDM）型酶標(biāo)洗板機(jī)，MR-96A酶標(biāo)儀。5.2 試劑珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)的抗HIV診斷試劑6 .操作方法6.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備從冷環(huán)境中取出試劑盒，室溫平衡半小時(shí)，同 時(shí)將濃縮洗液用蒸儲(chǔ)水作1：20稀釋備用。6.2 編號(hào)每板應(yīng)設(shè)空白對(duì)照1孔，陽性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照 2孔，質(zhì)控1孔。6.3 加樣每孔加入50ul樣品稀釋液，并分別在相應(yīng)孔中加入 待測(cè)樣品或陰、陽對(duì)照、質(zhì)控品50ul?？瞻卓變?nèi)只加稀釋液。6.4 溫育用封板膜封板后置37 C溫育60分鐘。6.5 加酶除空白對(duì)照孔外，每孔加50ul酶標(biāo)記物，輕輕震動(dòng) 混勻，用封板膜將板孔封好，置37c溫育30分鐘。6.6 洗板小心將封板膜揭