牛奶中成分分析

1、牛奶中部分成分的分析一、實驗目的（1）學習利用等電點沉淀法從牛奶中制備酪蛋白 （2）掌握雙縮脲法測定蛋白質(zhì)的原理和方法（ 3）熟悉可見光分光光度計的操作（4）加強對沉淀、抽濾、溶液配制等基本操作的鍛煉（5）分析牛奶中蛋白質(zhì)與鈣的含量。（6）掌握配位滴定法測定液體食品中鈣含量的原理和方法（7）通過與牛奶包裝上注明的含量比較，對實驗分析結(jié)果進行客觀評價二、實驗原理牛乳中的主要的蛋白質(zhì)是酪蛋白， 含量約為 35g/L 。酪蛋白是一些含磷蛋白質(zhì)的混合物， 等電點為。利用等電點時溶解度最低的原理，加入醋酸將牛乳的 pH 調(diào)至時，使酪蛋白沉淀 出來。用乙醇洗滌沉淀物，除去脂類雜質(zhì)，抽濾、純化后便可得到純酪

2、蛋白。雙縮脲（NH2C0NHC0NM）在堿性溶液中與硫酸銅反應(yīng)生成紫紅色化合物，稱為雙縮脲反應(yīng)，蛋白質(zhì)分子中含有許多肽鍵在堿性溶液中也能與CiF+反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色化合物。 在一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比。因此，可以利用比色法測定蛋白質(zhì)濃度。雙縮脲 法是測定蛋白質(zhì)濃度的常用方法之一。操作簡便、迅速、受蛋白質(zhì)種類性質(zhì)的影響較小，但靈敏度較差，而且特異性不高。除 -CONH-有此反應(yīng)外，-C0NH2、-CH2NH2、-CS-NH2等基團也 有此反應(yīng)。鈣與身體健康息息相關(guān)， 鈣除成骨以支撐身體外， 還參與人體的代謝活動， 它是細胞的 主要陽離子，還是人體最活躍的元素之一，缺鈣可導致兒童佝僂

3、病，青少年發(fā)育遲緩，孕婦 高血壓，老年人的骨質(zhì)疏松癥。缺鈣還可引起神經(jīng)病，糖尿病，外傷流血不止等多種過敏性 疾病。 補鈣越來越被人們所重視。 牛奶中含有易被人體吸收得鈣， 有些牛奶產(chǎn)品中還特地加 鈣而成為鈣奶。對于液體牛奶中鈣的含量，可采用EDTA法進行直接測定?？紤]到牛奶中含有 F3+、Al3+等干擾離子，可以加入少量三乙醇胺以消除它們的， 調(diào)節(jié)pH- 1213,以鉻藍黑R作指示劑， 指示劑與鈣生成紅色的絡(luò)合物， 當用EDTA滴定至計量點時，游離出指示劑，溶液呈現(xiàn)藍色。三、材料、試劑與儀器（一）材料新鮮牛奶、加鈣牛奶（二）試劑95%乙醇、無水乙醚、醋酸、醋酸鈉、 NaOH、CuS（4 5缶0

4、、酒石酸鉀、碘化鉀、牛血清 蛋白（BSA）、EDTA基準物質(zhì)CaCQ、HCI、三乙醇胺、鉻藍黑 R、鹽酸羥胺、鄰二氮菲（鄰 菲啰啉）、濃硝酸、硫代硫酸鈉、甲基紅、氨水1、 mol L1醋酸-醋酸鈉緩沖液先配A液與B液。A液：L醋酸鈉溶液。B液：L醋酸溶液。取醋酸鈉固體1.64g加水溶解并稀釋至 100ml，取冰醋酸加水稀釋至 120ml，取 A液，B液，混合即得的醋酸一一醋酸鈉緩沖液200mL。2、乙醇一乙醚混合液：乙醇：乙醚=1:1 （V/V）3、 NaOH （6molL-1）：稱取12g氫氧化鈉溶于50mL水中。4、雙縮脲試劑：稱取 CuS0 5H2O 3.0g，酒石酸鉀9.0 g和碘化鉀

5、5.0g，分別溶解后混勻，加6 mol L-1NaOH lOOmL,最后加水至1000mL，貯于棕色瓶中，避光，可長期保存。5、 NaCl6、蛋白質(zhì)標準液（10mgmL-1）,用小燒杯稱取干燥的牛血清蛋白，以少量生理鹽水溶解后倒入 l0mL 容量瓶中,淋洗小燒杯數(shù)次,一并倒入容量瓶中,最后加生理鹽水至刻度線。7、待測蛋白樣本：將牛奶樣品用生理鹽水準確配制成一定濃度的溶液后再測定；將制得的酪蛋白用生理鹽水準確配制成一定濃度的溶液后再測定。（如若不能溶解,滴加幾滴6mol/L NaOH 溶液、分別用 l0mL 容量瓶定容）& EDTAU1）:稱取2.0g EDTA二鈉鹽，用溫熱水溶解后，稀釋至50

6、0mL，儲存于聚乙烯塑料瓶中。9、CaCO標準溶液 mol匸1）：準確稱取基準物質(zhì) CaCQO.Ig左右，先以少量水潤濕，再逐滴小心加入6 mol L-1HCl,至CaCO完全溶解，定量轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中,以水稀釋至刻度,并計算其濃度。10、NaOH ( 5 mol L-1)11、HCl (6 mol L-1)12、三乙醇胺（200g L：1）13、鉻藍黑R（5 gL1）乙醇溶液（三）儀器試管、移液管（1mL、5mL、20 mL）、 l0mL容量瓶、燒杯、表面皿、250mL錐形瓶、1000mL棕色試劑瓶、25mL具塞比色管、試管架、坩堝、60mL分液漏斗水浴箱、可見光分光光度計、離心機、抽

7、濾裝置、精密pH試紙（可測）,酸度計、電爐、溫度計 四、操作步驟（一）牛奶中酪蛋白的提取40 C、的醋酸緩沖液50mL用精密1、酪蛋白的粗提50mL鮮牛奶加熱至40 C。在攪拌下慢慢加入預熱至 pH試紙或酸度計調(diào)pH至。將上述懸浮液冷卻至室溫。離心15分鐘（3000 r min-1）。棄去清液，得酪蛋白粗制品。2、酪蛋白的純化用水洗滌沉淀 3次，離心10分鐘（3000r min-1）,棄去上清液。在沉淀中加入 30mL乙 醇，攪拌片刻，將全部懸濁液轉(zhuǎn)移至布氏漏斗中抽濾。用乙醇一乙醚混合液洗沉淀 2次。最后用乙醚洗沉淀 2次，抽干。將沉淀攤開在表面皿上，風干；得酪蛋白純品。3、準確稱重，計算含量

8、和得率含量：酪蛋白g/（100 mL）牛乳得率提取得到的含量真實含量（二）酪蛋白含量的測定1、標準曲線的繪制與樣品的測定取試管8支，按下表操作。123456測定管1測定管2蛋白質(zhì)標準液（mL）一一一待測蛋白樣品（mL）一一一一一一%NaCI(mL)-一一雙縮脲試劑（mL）吸光度A各管混勻、放置37C水浴中保溫20min。540nm比色，以空白管調(diào)零點，讀取各管吸光 度值。2、計算在電腦上以吸光度值為縱坐標， 以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標繪制標準曲線。 從標準曲線中查 出待測樣本的蛋白質(zhì)濃度 （g/L）,并求出牛奶中蛋白質(zhì)濃度。由此濃度計算出100mL鮮牛奶中酪蛋白的真實含量。（三）鈣含量的測定1、ED

9、TA溶液濃度的標定準確移取CaCO標準溶液3份分別于250mL錐形瓶中，加入2mL NaOH溶液，鉻藍黑 R指示劑34滴，用EDTA溶液滴定至溶液由紅色變?yōu)樗{色即為終點，根據(jù)滴定用去EDTA毫升數(shù)和CaCQ標準溶液的濃度，計算 EDTA溶液的濃度。2、鈣制劑鈣含量的測定準確移取一定量的鮮牛奶和鈣奶，分別轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。準確移取上述試液，加入三乙醇胺溶液 5mL, 5molL-1NaOH 4mL,加入水20mL，搖勻, 加鉻藍黑R34滴，用L-1EDTA標準溶液滴定，接近終點時再補加 23滴鉻藍黑R,當溶液 由紅色變?yōu)樗{色即為終點，根據(jù)消耗 EDTA的體積，計算出鮮奶和鈣奶中鈣的含量( g/100 mL)，并與包裝上注明的含量作比較。3 、注意事項量取鮮奶和鈣奶的量視鈣含量多少而確定，以消耗mo