流式細(xì)胞術(shù)的基本原理

1、流式細(xì)胞術(shù)的基本原理 流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometer，F(xiàn)CM）： 利用流式細(xì)胞儀對(duì)處于快速直線流動(dòng)狀態(tài)中的單列細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行逐個(gè)、多參數(shù)、快速的定性、定量分析或分選的技術(shù)。流式細(xì)胞儀：是集現(xiàn)代物理電子技術(shù)、激光技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)以及細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)于一體的先進(jìn)科學(xué)技術(shù)設(shè)備流式細(xì)胞儀分為四部分：1）流動(dòng)室與液流系統(tǒng)2）光源與光學(xué)系統(tǒng)3）信號(hào)收集、轉(zhuǎn)換與分析系統(tǒng)4）細(xì)胞分選系統(tǒng)1）流動(dòng)室與液流系統(tǒng)2）光源與光學(xué)系統(tǒng)激光（單色性、單向性）前向散射（FSC）側(cè)向散射（SSC）激發(fā)波長(zhǎng)發(fā)射波長(zhǎng)3）信號(hào)收集、轉(zhuǎn)換與分析系統(tǒng) 激發(fā)波長(zhǎng)經(jīng)過(guò)濾光片分離不同波長(zhǎng)的光信號(hào)分

2、別到達(dá)不同的光電倍增管(PMT)，PMT將光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，電信號(hào)輸入到放大器放大。 放大器分兩類：線性放大和對(duì)數(shù)放大。 細(xì)胞DNA含量、RNA含量、總蛋白質(zhì)含量等的測(cè)量一般選用線性放大測(cè)量。 細(xì)胞膜表面抗原等的檢測(cè)，由于表面抗原的分布有時(shí)要相差幾十倍，甚至幾萬(wàn)倍，故取對(duì)數(shù)放大。光譜重疊與熒光補(bǔ)償 實(shí)際中激發(fā)波長(zhǎng)是正態(tài)或偏態(tài)曲線，熒光素之間的波譜常有重疊，故流式細(xì)胞儀加入了電子補(bǔ)償系統(tǒng)，去除因光譜重疊而進(jìn)入其他熒光探測(cè)器的熒光信號(hào)，即熒光補(bǔ)償。流式細(xì)胞術(shù)的對(duì)照設(shè)置陰性對(duì)照：調(diào)節(jié)熒光探測(cè)器合適的放大倍 數(shù)，將儀器歸零，確定樣本的基礎(chǔ)熒光域值陽(yáng)性對(duì)照：檢測(cè)抗體是否有問(wèn)題或確定實(shí)驗(yàn)方法的穩(wěn)定性、準(zhǔn)

3、確性空白對(duì)照：不標(biāo)記，自發(fā)熒光PS：補(bǔ)償對(duì)照：多色分析樣本時(shí)為熒光光譜 重疊進(jìn)行的的補(bǔ)償調(diào)節(jié)4）細(xì)胞分選系統(tǒng) 根據(jù)某參數(shù)決定細(xì)胞液滴是否被分選，然后由充電電路對(duì)其充電，帶電液滴通過(guò)靜電場(chǎng)發(fā)生偏轉(zhuǎn)而分離488 nm laser+-Charged PlatesSingle cells sortedinto test tubesFALS SensorFluorescence detector流式細(xì)胞術(shù)流程應(yīng)用 細(xì)胞膜：流動(dòng)性、膜電位、膜通透性 細(xì)胞內(nèi)離子濃度：H+、Na+、K+和Ca2+ 細(xì)胞周期：全周期分析、S期分析、M期分析 細(xì)胞表面蛋白質(zhì)分析：免疫細(xì)胞分型、其他表面蛋白分析 細(xì)胞功能：如凋亡、抗藥性 基因表達(dá)：內(nèi)源及外源基因表達(dá) 細(xì)胞分選 細(xì)胞克隆流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometer，F(xiàn)CM）： 利用流式細(xì)胞儀對(duì)處于快速直線流動(dòng)狀態(tài)中的單列細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行逐個(gè)、多參數(shù)、快速的定性、定量分析或分選的技術(shù)。流式細(xì)胞儀分為四部分：1）流動(dòng)室與液流系統(tǒng)2）光源與光學(xué)系統(tǒng)3）信號(hào)收集、轉(zhuǎn)換與分析系統(tǒng)4）細(xì)胞分選系統(tǒng)光譜重疊與熒光補(bǔ)償 實(shí)際中激發(fā)波長(zhǎng)是正態(tài)或偏態(tài)曲線，熒