乳糖微生物限度驗證方案

1、文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 1 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:目 錄1.目的.32.范圍.33.職責.34.參考文件.35.系統(tǒng)概述.46.驗證用儀器、菌種和培養(yǎng)基.46.1 驗證用儀器46.2 驗證用菌種46.3 驗證用培養(yǎng)基47.驗證實施.47.1 驗證文件確認57.2 需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查67.3 需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計數(shù)方法驗證67.4 控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查 67.5 控制菌檢查方法驗證88.偏差清單及報告99.驗證周期910.驗證結(jié)果分析與評價報告911.驗證附表10表 1 驗證方案培訓(xùn)記錄表 1

2、1表 2 文件的確認12表 3 菌液計數(shù)結(jié)果13表 4 需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌培養(yǎng)基的適用性檢查記錄14表 5 需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計數(shù)方法驗證記錄15表 6 控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查記錄16文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 2 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:表 7 控制菌檢查方法驗證17表 8 偏差清單18表 9 偏差報告19表 10 驗證結(jié)果分析與評價報告20文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 3 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:1.1.目的目的依據(jù)中國藥典 （2015 年版四部）,對乳糖新建立的微

3、生物限度檢查方法進行驗證，以確認在目前的檢驗環(huán)境下該方法適合于供試品的需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌、酵母菌測定及控制菌的檢查。2.2.范圍范圍本驗證方案適用于乳糖的微生物限度檢查法的驗證。3.職責職責3.13.1 驗證小組成員及職責驗證小組成員及職責3.23.2 驗證方案培訓(xùn)：驗證方案培訓(xùn)：本驗證方案批準后，根據(jù)人員培訓(xùn)標準操作規(guī)程對確認小組成員和相關(guān)人員進行培訓(xùn)，序號部門姓名職務(wù)驗證小組職務(wù)工作職責1質(zhì)量管理部劉國利質(zhì)量副總組長1. 負責驗證方案、驗證報告的最終批準2. 負責驗證涉及文件、資料的最終審核3. 確保完成驗證項目2質(zhì)量管理部鄧志軍質(zhì)管部長副組長1. 負責驗證方案、驗證報告的審核2. 負責驗證

4、涉及文件、資料的審核3質(zhì)量管理部胡緒勇QA 主任小組成員1. 負責驗證方案的起草、培訓(xùn)2. 負責驗證工作的實施3. 負責驗證實施過程中資料數(shù)據(jù)的收集、整理、歸檔4. 負責難證項目實施中各部門協(xié)調(diào)工作5. 負責驗證報告的撰寫4質(zhì)量管理部饒?zhí)螿C 主任小組成員1. 負責驗證檢驗標準、檢驗方法的起草2. 負責驗證實施過程中檢驗工作的安排5質(zhì)量管理部阮江為QA小組成員1. 負責驗證方案、驗證報告的初審2. 負責協(xié)助驗證過程的實施毛亞瓊6質(zhì)量管理部徐秋紅QC小組成員1. 負責驗證過程實施2. 原始記錄的填寫文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 4 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方

5、案生效日期:使其了解方案的實施程序，明白其職責并能在驗證工作中得到很好的執(zhí)行。見表 1.4.參考文件參考文件本驗證方案參考了以下標準和指南：藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范 （2010 年版）藥品微生物學(xué)檢驗技術(shù)藥品生產(chǎn)驗證指南 （2003 年版）中國藥典 （2015 年版四部）5.系統(tǒng)概述系統(tǒng)概述參照中國藥典 （2015 年版二部及四部）采用的檢測方法對葡萄糖原料新建立的微生物限度檢查法進行驗證，以確認所采用的方法適合于供試品的需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌、酵母菌的測定和控制菌的檢查?？梢哉沾藱z查法和此檢查條件進行供試品的微生物限度檢查。6.驗證用儀器、菌種和培養(yǎng)基驗證用儀器、菌種和培養(yǎng)基6.1 驗證用儀器儀器名稱

6、生產(chǎn)廠家儀器型號壓力蒸汽滅菌器電子天平PH 酸度計電熱恒溫培養(yǎng)箱生化培養(yǎng)箱微生物限度檢驗儀6.2 驗證用菌種菌種名稱菌種編號提供廠家菌種代數(shù)金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003北京三藥科技開發(fā)公司第（ ）代銅綠假單胞菌CMCC（B）10104北京三藥科技開發(fā)公司第（ ）代枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501北京三藥科技開發(fā)公司第（ ）代大腸埃希菌CMCC（B）44102北京三藥科技開發(fā)公司第（ ）代白色念珠菌CMCC（B）98001北京三藥科技開發(fā)公司第（ ）代黑曲霉菌CMCC（B）98003北京三藥科技開發(fā)公司第（ ）代6.3 驗證用對照培養(yǎng)基對照培養(yǎng)基名稱來源批號胰酪大豆胨液體對照培養(yǎng)基

7、中國食品藥品檢定研究院胰酪大豆胨瓊脂對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院沙氏葡萄糖液體對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 5 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:麥康凱液體對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院麥康凱瓊脂對照培養(yǎng)基中國食品藥品檢定研究院6.4 驗證用培養(yǎng)基培養(yǎng)基名稱配制批號培養(yǎng)溫度（）胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基3035胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基3035沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基2025沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基2025麥康凱液體培養(yǎng)基4244麥康凱瓊脂培養(yǎng)基3035PH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液

8、0.9%無菌氯化鈉溶液7.驗證實施驗證實施7.1 驗證文件確認目的驗證支持文件的確認，用來保證驗證的一致性、有效性。程序檢查乳糖糖質(zhì)量標準 、 微生物限度檢查法操作規(guī)程 、 培養(yǎng)基適用性檢查操作程序及相關(guān)記錄是否齊全、是否是現(xiàn)行批準的文件?？山邮諛藴逝c本次驗證相關(guān)的文件及記錄齊全，均為現(xiàn)行版本。確認結(jié)果結(jié)果見“表 1 文件確認” 。7.2 需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查 目的確認使用的需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查符合要求。程序 菌液制備取銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物分別接種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，經(jīng) 3035培養(yǎng) 1824 小時，將培

9、養(yǎng)物 1ml，加入到 9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋制成每 1ml 含菌數(shù)不大于 100 cfu 的菌懸液，備用。文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 6 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，經(jīng) 2025培養(yǎng) 23 天，將培養(yǎng)物 1ml，加入到 9ml0.9%無菌氯化鈉注射液中，10 倍稀釋制成每 1ml 含菌數(shù)不大于 100 cfu的菌懸液，備用。取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基中，經(jīng) 2025培養(yǎng) 57 天，加入 35ml 含 0.05%（ml/ml）的聚山梨酯 80 的 0

10、.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，取此菌原液 1ml，用含 0.05%（ml/ml）的聚山梨酯 80 的 0.9%無菌氯化鈉溶液9ml，10 倍稀釋制成每 1ml 含孢子數(shù)不大于 100 cfu 的孢子懸液，備用。菌液計數(shù)（取 2 個平皿的平均值）：取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌 1ml分別接種至 2 個無菌培養(yǎng)皿中，每皿注入胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基約 20ml，倒置于生化培養(yǎng)箱3035培養(yǎng) 3 天，計數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉菌液 1ml 分別接種至 2 個無菌培養(yǎng)皿中，每皿注入沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基約 20ml，倒置于霉菌培養(yǎng)箱 2025培養(yǎng) 5 天，計數(shù)并

11、取其平均值。計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 取 7 個無菌平皿，分別接種銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各 2 平皿，每皿接種 1ml（含菌不大于 100cfu） ，另一平皿不接種菌作為空白對照，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后置于 3035培養(yǎng) 3 天，計數(shù)。取 4 個無菌平皿，分別接種白色念珠菌、黑曲霉菌各 2 個無菌平皿，傾注胰酪大豆胨瓊脂對照培養(yǎng)基，混勻，凝固后置于3035培養(yǎng) 5 天，計數(shù)；對照培養(yǎng)基同法操作。沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 取 5 個無菌平皿，分別接種白色念珠菌、黑曲霉菌各 2 個平皿，每皿接種 1ml（含菌不大于 100cfu） ，另一平皿不接種菌

12、作為空白對照，傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后置于 2025培養(yǎng) 5 天，計數(shù)；對照培養(yǎng)基同法操作?？山邮軜藴时粰z固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在 0.52 范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)、大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，則判斷該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。確認報告結(jié)果見“表 2 菌液計數(shù)結(jié)果” 、 ”表 3 培養(yǎng)基的適應(yīng)性檢查” 。7.3 需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證目的確認所采用的計數(shù)方法適合于產(chǎn)品的需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌的測定。程序 菌液制備：取銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物分別接種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，經(jīng) 3035培養(yǎng) 18

13、24 小時將培養(yǎng)物 1ml，加入到 9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10 倍稀釋制成每 1ml 含菌數(shù)不大于 100 cfu 的菌懸液，備用。取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，經(jīng) 2025培養(yǎng) 23 天，將培養(yǎng)物 1ml，加入到 9ml0.9%無菌氯化鈉注射液中，10 倍稀釋制成每 1ml 含菌數(shù)不大于 100 cfu的菌懸液，備用。取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 57 天，加入 35ml 含0.05%（ml/ml）的聚山梨酯 80 的 0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，吸出孢子懸液至無菌試管文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號:

14、頁碼: 7 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:內(nèi)，取此菌原液 1ml，用含 0.05%（ml/ml）的聚山梨酯 80 的 0.9%無菌氯化鈉溶液 9ml，稀釋制成每 1ml 含孢子數(shù)不大于 100 cfu 的孢子懸液，備用。驗證步驟：取供試品 1 個批號，每批中驗證試驗包括 3 組進行獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的比值。a.試驗組：取 1：10 的供試液 10ml 加入適量的試驗菌液，混勻，使每 1ml 供試液中含菌量不大于 100cfu，再取 1ml 注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，分別制備 2 個平皿，按平皿法測定其菌數(shù)。b.菌液組：取稀釋液 10ml，同試驗組操

15、作，測定其菌數(shù)。c.供試品對照組：取 1：10 的供試液 1ml，測定供試品菌數(shù)?？山邮軜藴试囼灲M菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值與菌液對照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在 0.52 范圍內(nèi)。稀釋劑對照組菌落數(shù)與菌液對照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在 0.52 范圍內(nèi)。試驗組平均菌落數(shù)供試品對照組平均菌落數(shù) 試驗組菌數(shù)比值=菌液對照組平均菌落數(shù)確認報告結(jié)果見”表 4 需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計數(shù)方法驗證記錄” 。7.4 控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查目的確認使用的控制菌計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查符合要求。程序菌液制取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物分別接種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，經(jīng)3035培養(yǎng) 1824 小時，將培養(yǎng)

16、物 1ml，加入到 9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10 倍稀釋制成每1ml 含菌數(shù)不大于 100 cfu，備用。適用性檢查麥康凱液體培養(yǎng)基 分別接種 1ml（含菌不大于 100cfu）大腸埃希菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在 4244培養(yǎng) 2448 小時，與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗菌應(yīng)生長良好；接種 1ml（含菌大于 100cfu）金黃色葡萄糖菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在 4244培養(yǎng) 48小時，試驗菌應(yīng)不得生長。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基 用涂布法分別接種 1ml（含菌不大于 100cfu）大腸埃希菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平皿上，在 3035培養(yǎng) 18 小時，與對照培養(yǎng)皿比較，被檢培

17、養(yǎng)皿與對照培養(yǎng)皿生長的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。用涂布法分別接種不大于 100cfu 的大腸埃希菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平皿上，在 3035培養(yǎng) 18 小時。被檢培養(yǎng)基上試驗菌生長的菌落大小、形態(tài)特征、文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 8 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)于對照培養(yǎng)基一致RV 沙門增菌液體培養(yǎng)基 分別接種 1ml（含菌不大于 100cfu）沙門菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在 3035培養(yǎng) 24 小時，與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基管試驗菌應(yīng)生長良好；接種 1ml（含菌大于 100cfu）金黃色葡萄糖菌于被檢培養(yǎng)基和對

18、照培養(yǎng)基中，在 3035培養(yǎng) 24小時，試驗菌應(yīng)不得生長。木糖賴氨酸脫養(yǎng)膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基 用涂布法分別接種 1ml（含菌不大于 100cfu）沙門菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平皿上，在 3035培養(yǎng) 18 小時，與對照培養(yǎng)皿比較，被檢培養(yǎng)皿與對照培養(yǎng)皿生長的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。用涂布法分別接種不大于 100cfu 的沙門菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平皿上，在 3035培養(yǎng) 18 小時。被檢培養(yǎng)基上試驗菌生長的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)于對照培養(yǎng)基一致。三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基 用涂布法分別接種不大于 100cfu 的沙門菌于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平皿上，在 3035培養(yǎng) 18 小時。被檢

19、培養(yǎng)基上試驗菌生長的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)于對照培養(yǎng)基一致?？山邮軜藴?促生長能力檢查：被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基生長的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。 抑制能力檢查：試驗菌不得生長。 指示能力檢查：被檢培養(yǎng)基上試驗菌生長的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)于對照培養(yǎng)基一致。確認報告結(jié)果見”表 5 控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查” 。7.5 控制菌檢查方法驗證目的驗證所采用的檢查方法適合于產(chǎn)品的控制菌檢查。程序菌液制備取大腸埃希菌、沙門的新鮮培養(yǎng)物接種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，經(jīng) 3035培養(yǎng) 1824小時，將培養(yǎng)物 1ml，加入到 9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10 倍稀釋制成每

20、 1ml 含菌數(shù)不大于 100 cfu 的菌懸液，備用。1.驗證步驟供試液的配制：取供試品 10g，加入 pH7.0 的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至 100ml，使成1：10 的供試液。試驗組：取 1ml 供試液和不大于 100cfu 試驗菌加入 100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻3035培養(yǎng) 18 小時，取上述培養(yǎng)物 1ml 加入 100ml 麥康凱液體培養(yǎng)基中 4244培養(yǎng) 24 小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于取麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平皿上，3035培養(yǎng) 18 小時。陽性對照組：取 1ml 不大于 100cfu 試驗菌加入 100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻3035培養(yǎng) 1824，

21、取上述培養(yǎng)物 1ml 加入 100ml 麥康凱液體培養(yǎng)基中。4244培養(yǎng) 24 小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于取麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平皿上，3035培養(yǎng) 18 小時陰性對照組：取 pH7.0 氯化鈉-蛋白胨緩沖液 1ml 加入 100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 9 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:3035培養(yǎng) 18 小時，取上述培養(yǎng)物 1ml 加入 100ml 麥康凱液體培養(yǎng)基中 4244培養(yǎng) 24 小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于取麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平皿上，3035培養(yǎng) 18 小時。 試驗組：取 10g 供試品和

22、不大于 100cfu 試驗菌接種至 100 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035培養(yǎng) 18 小時，取上述培養(yǎng)物 0.1ml 接種至 10mlRV 沙門增菌液體培養(yǎng)基 3035培養(yǎng) 18小時取少量 RV 沙門增菌液體培養(yǎng)物接種于木糖賴氨酸脫養(yǎng)膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平皿上，3035培養(yǎng)18 小時，用接種針挑選疑似菌落于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基進行斜面接種 3035培養(yǎng) 18 小時。陽性對照組：取 1ml 不大于 100cfu 試驗菌接種至 100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035培養(yǎng) 18 小時，取上述培養(yǎng)物 0.1ml 接種至 10mlRV 沙門增菌液體培養(yǎng)基 3035培養(yǎng) 18小時取少量 RV

23、沙門增菌液體培養(yǎng)物接種于木糖賴氨酸脫養(yǎng)膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平皿上 3035培養(yǎng) 18小時，用接種針挑選疑似菌落于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基進行斜面接種 3035培養(yǎng) 18 小時。陰性對照組：取 100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 3035培養(yǎng) 18 小時，取上述培養(yǎng)物 0.1ml接種至 10mlRV 沙門增菌液體培養(yǎng)基 3035培養(yǎng) 18 小時取少量 RV 沙門增菌液體培養(yǎng)物接種于木糖賴氨酸脫養(yǎng)膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平皿上 3035培養(yǎng) 18小時?？山邮軜藴赎栃詫φ战M應(yīng)檢出試驗菌，陰性對照組應(yīng)無菌生長。若試驗組檢出試驗菌，則可按此供試液制備法和控制菌檢查法進行供試品的該控制菌檢查；若試驗組未檢出試驗菌，應(yīng)消除供試品

24、的抑菌活性后，重新進行驗證。確認報告結(jié)果見”表 6 控制菌檢查方法驗證記錄” 。8.偏差清單及報告整理所有驗證過程中發(fā)現(xiàn)的偏差，并將清單列在“表 6”中。將驗證過程發(fā)現(xiàn)的所有偏差記錄在“表 7” ，并提出偏差解決方案，審核和批準偏差解決方案及其實施。9.驗證周期每 5 年進行一次再驗證，原測定法的檢驗條件發(fā)生改變時，也需要重新驗證。10.驗證結(jié)果分析與評價報告由驗證小組組長對本方案做驗證結(jié)論及建議，填寫“表 8 驗證結(jié)果分析與評價報告” ，驗證小組成員進行會簽，驗證委員會主任對本方案的結(jié)論進行批準。文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 10 / 21乳糖微生物限度適用性檢

25、查方案生效日期:表 1 驗證方案培訓(xùn)記錄表培訓(xùn)內(nèi)容教師姓名部門職務(wù)培訓(xùn)時間培訓(xùn)地點教師簽名參加培訓(xùn)人員簽名部門姓名部門姓名文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 11 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:表 2 文件的確認文件的確認文件名文件編號存放地點藥用炭質(zhì)量標準微生物限度檢查法操作規(guī)程培養(yǎng)基適用性檢查操作程序結(jié)論檢查人日期復(fù)核人日期文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 12 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:表 3 菌液計數(shù)結(jié)果菌液計數(shù)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果（個/ml） 加菌量菌種培養(yǎng)基平皿號1 天2 天3 天4 天5 天12金黃色葡

26、萄球菌平均值12枯草芽孢桿菌平均值12銅綠假單胞菌平均值12胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基大腸埃希菌平均值12白色念珠菌平均值12沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基黑曲霉菌平均值胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基陰性對照/沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基陰性對照/結(jié)果 合格 不合格結(jié)論檢查人/日期復(fù)核人/日期文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 13 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:表 4 需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌培養(yǎng)基的適用性檢查記錄需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌培養(yǎng)基的適用性檢查記錄被檢培養(yǎng)基對照培養(yǎng)基比值培養(yǎng)結(jié)果（個/ml） 加菌量菌種培養(yǎng)基平皿號1天2 天3天4天5 天1 天2 天3 天4 天5 天1/2

27、/金黃色葡萄球菌平均值1/2/枯草芽孢桿菌平均值1/2/銅綠假單胞菌平均值1/2/白色念珠菌平均值1/2/胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基黑曲霉菌平均值1/2/白色念珠菌平均值1/2/沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基黑曲霉菌平均值胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基陰性對照沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基陰性對照結(jié)果 合格 不合格結(jié)論檢查人日期復(fù)核人日期文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 14 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:表 5 需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計數(shù)方法驗證記錄需養(yǎng)菌總數(shù)、霉菌及酵母菌計數(shù)方法驗證記錄供試品名稱批號生產(chǎn)廠家試驗方法平皿法平均菌落數(shù)菌種加菌量項目123結(jié)果試驗組菌液對照組供試品對照

28、組金黃色葡萄球菌試驗組菌數(shù)比值合格不合格試驗組菌液對照組供試品對照組銅綠假單胞菌試驗組菌數(shù)比值合格不合格試驗組菌液對照組供試品對照組枯草芽孢桿菌試驗組菌數(shù)比值合格不合格試驗組菌液對照組供試品對照組白色念珠菌試驗組菌數(shù)比值合格不合格試驗組菌液對照組供試品對照組黑曲霉菌試驗組菌數(shù)比值合格不合格檢查人日期復(fù)核人日期文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 15 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:表 6 控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查記錄控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查記錄試驗項目促生長能力抑制能力指示能力菌種大腸埃希菌金黃色葡萄球菌大腸埃希菌菌種代數(shù)第（ ）代第（ ）代第

29、（ ）代加菌量（cfu/ml）培養(yǎng)基培養(yǎng)條件結(jié)果麥康凱液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度 培養(yǎng)時間 hr-麥康凱液體培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度 培養(yǎng)時間 hr-試驗結(jié)果麥康凱瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度 培養(yǎng)時間 hr-麥康凱液體培養(yǎng)基陰性對照麥康凱瓊脂培養(yǎng)基陰性對照結(jié)果 合格 不合格結(jié)論檢查人日期復(fù)核人日期文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 16 / 21乳糖微生物限度適用性檢查方案生效日期:表 7 控制菌檢查方法驗證控制菌檢查方法驗證記錄供試品名稱批號生產(chǎn)廠家控制菌驗證：大腸埃希菌供試液制備取供試品 10g，加入 pH7.0 的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至 100ml，使成 1：10 的供試液。取 1：10 的供試液 1ml。培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件試驗組陽性對照組陰性對照組胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基3035培養(yǎng) 18 小時麥康凱液體培養(yǎng)基4244培養(yǎng) 24 小時麥康凱瓊脂培養(yǎng)基3035培養(yǎng) 18 小時結(jié)果 合格 不合格檢查人日期復(fù)核人日期文件編號: VAP-016驗證方案驗證方案版本號: 頁碼: 17 / 21乳糖微生物限