實(shí)驗(yàn)五血紅蛋白含量的測定、血型鑒定ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)五 血紅蛋白含量的測定、血型鑒定實(shí)驗(yàn)?zāi)康膌掌握血紅蛋白的測定方法；l學(xué)習(xí)鑒定血型的根本方法，察看紅細(xì)胞凝集景象，掌握ABO血型鑒定的原理。測定血紅蛋白的意義n人血紅蛋白參考值 成年男性：13-15克/dl ；成年女性：11-14克/dl ；兒童：依年齡而異12-14克/dl。n臨床意義：大致與紅細(xì)胞增減類似。高原地域居民的血紅蛋白濃度普通比平原居民為高，這是機(jī)體對低氣壓環(huán)境的一種順應(yīng)景象。普通來說，在疾病情況下，血紅蛋白的增減是與紅細(xì)胞的改動相平行的，即引起紅細(xì)胞增多的疾病，也會使血紅蛋白含量添加。使紅細(xì)胞減少的疾病，也使血紅蛋白含量減少。在貧血時(shí)，血液中的紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白濃度都有不同

2、程度的下降，但不一定按一樣的比例變化。有時(shí)紅細(xì)胞數(shù)量可以減少很多，而血紅蛋白的濃度的降低卻相對地不那么顯著，見于大細(xì)胞性貧血，由于單個(gè)紅細(xì)胞所含的血紅蛋白量較正常者為多。相反，也有的紅細(xì)胞減少得不很多，而血紅蛋白濃度卻顯著降低，例如缺鐵性貧血，這是由于每個(gè)紅細(xì)胞的血紅蛋白含量比正常明顯減少，故血紅蛋白減低的程度較紅細(xì)胞減少更為顯著。 根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果，分析病因，做到準(zhǔn)確的診斷和治療都是很必要的。 根本原理根本原理 n血紅蛋白是紅細(xì)胞的主要成分，在正常情況下，每個(gè)紅細(xì)胞均含有一定量的血紅蛋白。血紅蛋白是由珠蛋白和亞鐵血紅素組成的結(jié)合蛋白質(zhì)。血紅蛋白除能與氧結(jié)合構(gòu)成氧合血紅蛋白外，尚能與某些物質(zhì)作用構(gòu)

3、成多種血紅蛋白衍生物。它們具有特定的色澤和吸光譜，在臨床上，可用以診斷某些變性血紅蛋白血癥和血紅蛋白的定量測定。n測定血紅蛋白含量的方法很多，實(shí)驗(yàn)常用比色法。其原理是在一定量的血液中，血紅蛋白經(jīng)少量鹽酸的作用，使亞鐵血紅素變成高鐵血紅素，呈現(xiàn)較穩(wěn)定的棕色。用水稀釋后與規(guī)范色比較，求出每100ml血液中所含的血紅蛋白克數(shù)。正常成年男子每100ml血液平均含14.4g，女子為13.1g。 實(shí)驗(yàn)原理-血型鑒定n血型普通指紅細(xì)胞的血型，是根據(jù)紅細(xì)胞膜外外表存在的特異性抗原鑲嵌于紅細(xì)胞膜上的糖蛋白和糖脂來確定的，這種抗原或凝集原是由遺傳決議的。n抗體或凝集素存在于血清中，與紅細(xì)胞的不同抗原起反響，產(chǎn)生凝

4、集，最后溶解，由于這種景象，臨床上在輸血前必需留意鑒定血型，以確保平安輸血。ABO血型鑒定實(shí)驗(yàn)原理n抗原抗體反響在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。A抗原加抗A抗體或B抗原加抗B抗體，那么產(chǎn)生凝集景象從而測知受試者紅細(xì)胞膜上有無A或/和B抗原判別血型n抗體在相鄰的紅細(xì)胞外表抗原決議簇之間搭橋構(gòu)成肉眼可見的顆粒狀凝集團(tuán)塊.見圖IgM抗體凝集紅細(xì)胞表示圖IgM抗體凝集紅細(xì)胞表示圖 IgGM在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集實(shí)驗(yàn)資料n血紅蛋白計(jì)、血紅蛋白計(jì)、0.1mol/L0.1mol/L鹽酸溶液；鹽酸溶液；n載玻片、刺血針、牙簽、一次性采血管、載玻片、刺血針、牙簽

5、、一次性采血管、A A型和型和B B型規(guī)范血清、生理鹽水、酒精棉型規(guī)范血清、生理鹽水、酒精棉球等。球等。方法與步驟-血紅蛋白測定n于測定管內(nèi)參與0.1mol/L鹽酸溶液至百分刻度20處。n取20l被檢血液, 迅速將吸血管插入測定管底部鹽酸液中，緩慢擠出血液，再汲取上部清液，反復(fù)沖洗吸血管23次，并混勻，靜置10min。n沿著管壁參與蒸餾水，逐漸稀釋至與規(guī)范色柱顏色一致后，讀取分量或百分刻度值報(bào)告結(jié)果。v 規(guī)范制換算：血紅蛋白規(guī)范制換算：血紅蛋白(g/L)=血紅蛋白血紅蛋白(g/dl)10方法與步驟方法與步驟- -血紅蛋白測定血紅蛋白測定 n血紅蛋白計(jì)包括n 規(guī)范比色架，架的兩側(cè)鑲有兩個(gè)棕色規(guī)范

6、玻璃色柱。n 血紅蛋白稀釋管，有方形也有圓形的。兩側(cè)有刻度，一側(cè)以g為計(jì)數(shù)單位，對側(cè)以百分率計(jì)，按我國情況，是以每100ml血液內(nèi)含血紅蛋白14.5g為100%。20mm3血紅蛋白吸管，還有玻璃棒、滴管。n用滴管加0.1mol/LHCl于血紅蛋白稀釋管內(nèi)，到刻度10處。n用刺血針刺破指尖采血，血滴宜大些。用血紅蛋白吸管的尖端接觸血滴，吸血至刻度20ul處0.02ml。方法與步驟方法與步驟- -血紅蛋白測定血紅蛋白測定 n用濾紙片或棉球擦凈吸管口周圍的血液，將吸管插入血紅蛋白稀釋管的鹽酸內(nèi)，悄然吹出血液至管底部，反復(fù)吸入并吹出稀釋管內(nèi)上層的鹽酸，洗滌吸管多次，使吸管內(nèi)的血液完全洗入稀釋管內(nèi)。搖勻

7、或用小玻璃棒攪勻后，放置10min，使鹽酸與血紅蛋白充分作用。n把稀釋管插入規(guī)范比色架兩色柱中央的空格中，使無刻度的兩側(cè)面位于空格的前后方，便于透光和比色。n用滴管向稀釋管內(nèi)逐滴參與蒸餾水每加一滴要攪拌，邊滴邊察看顏色，直至顏色與規(guī)范玻璃色柱一樣為止。稀釋管上液面的刻度讀數(shù)即為每100ml血液血紅蛋白的克數(shù)。n從指尖或耳垂取血一滴，參與含1ml生理鹽水的小試管內(nèi)，混勻，即得約5紅細(xì)胞懸液。采血時(shí)應(yīng)留意先用75酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受檢者紅細(xì)胞約0.20.5 ml用生理鹽水洗滌3次，然后參與適量生理鹽水調(diào)配成5%濃度。方法與步驟-血型鑒定方法與步驟-血型鑒定n1 取雙凹玻片一塊，用干凈紗

8、布輕拭使之干凈，在玻片兩端用記號筆標(biāo)明A及B，并分別各滴入A及B規(guī)范血清一滴。n2 用滴管汲取紅細(xì)胞懸液，分別各滴一滴于玻片兩端的血清上，留意勿使滴管與血清相接觸。n3 竹簽兩頭分別混合，攪勻。用兩根 分別用來混合A型和B型規(guī)范n 4察看結(jié)果。如有凝集反響可見到呈紅色點(diǎn)狀或小片狀凝集塊浮起。先用肉眼看有無凝集景象，肉眼不易分辨時(shí)，那么在低倍顯微鏡下察看，如有凝集反響，可見紅細(xì)胞聚集成團(tuán)。n5 判別血型 根據(jù)被試者紅細(xì)胞能否被A，B型規(guī)范血清所凝集，判別其血型。 血型斷定正定型正定型反定型反定型 結(jié)果結(jié)果抗抗A A 抗抗B BA A型型RBC BRBC B型型RBC ORBC O型型RBCRBC

9、- -+ + - O + - + - A- + + - - B+ +- - - AB本卷須知本卷須知 n吹血液入稀釋管及洗凈吸管時(shí)，不宜用力過猛。n蒸餾水需逐滴參與，多做幾次比色，以免稀釋過量。每次比色時(shí)，應(yīng)將攪拌用的玻璃棒取出，以免影響比色。n由于操作過程過長而呵斥吸管內(nèi)血液凝固，堵塞管孔時(shí)，那么要按以下溶液的順序反復(fù)沖洗吸管，即用水95%酒精乙醚或丙酮。五 本卷須知n玻片、試管都要標(biāo)志！，玻片、試管都要標(biāo)志！， A A及及B B規(guī)范血清絕對不能相混規(guī)范血清絕對不能相混, ,不不要依托用染料顏色標(biāo)志血清。任務(wù)中要構(gòu)本錢人的習(xí)慣！要依托用染料顏色標(biāo)志血清。任務(wù)中要構(gòu)本錢人的習(xí)慣！n所用玻片、試管實(shí)驗(yàn)前必需清洗干凈，以免出現(xiàn)假凝集景象。所用玻片、試管實(shí)驗(yàn)前必需清洗干凈，以免出現(xiàn)假凝集景象。n紅細(xì)胞懸液滴管頭不能接觸規(guī)范血清液面，竹簽一端去混勻一紅細(xì)胞懸液滴管頭不能接觸規(guī)范血清液面，竹簽一端去混勻一側(cè)就不能去接觸另一側(cè)。側(cè)就不能去接觸另一側(cè)。n普通先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，便于核實(shí)能否漏加血清。普通先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，便于核實(shí)能否漏加血清。n離心時(shí)間、速度嚴(yán)厲要求，以防假陽離心時(shí)間、速度嚴(yán)厲要求，以防假陽 性或假陰性結(jié)果。性或假陰性結(jié)果。n實(shí)驗(yàn)用血清和