細(xì)胞房工作守則及注意事項(xiàng)

1、細(xì)胞房工作守則及注意事項(xiàng)細(xì)胞房工作守則及注意事項(xiàng)1、 ?常規(guī)操作?1.? 穿著專用實(shí)驗(yàn)服。自己的白大衣或厚外套，可脫在門外的衣帽架上。2 .?穿著專用拖鞋。在緩沖間換下自己的鞋子，盡量避免在緩沖間走動(dòng)、停留。3 .?細(xì)胞房最多可4個(gè)人同時(shí)使用。盡量避免在內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間逗留、交談。2、 ?培養(yǎng)箱使用規(guī)則3、 ?1.?從培養(yǎng)箱取放物品前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開門時(shí)間和減少開門次數(shù)。4、 注：?培養(yǎng)箱中的空氣是經(jīng)過過濾的潔凈空氣。長(zhǎng)時(shí)間敞開或頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱，容易造成污染。5、 2.?培養(yǎng)瓶皿放入培養(yǎng)箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發(fā)后再放入，以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過多乙醇蒸氣。6、 3.?2-

2、3 人共用一層培養(yǎng)箱，按預(yù)定位置擺放培養(yǎng)器皿，方便查找，以免長(zhǎng)時(shí)間敞開培養(yǎng)箱。7、 4.?普通培養(yǎng)中的細(xì)胞，若非實(shí)驗(yàn)需要，每瓶/板細(xì)胞每天只需要觀察生長(zhǎng)狀態(tài)一次， 2 人以上共用的細(xì)胞，可約好時(shí)間一起觀察。8、 注：頻繁將細(xì)胞拿出觀察，容易給培養(yǎng)箱造成污染，同時(shí)也會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)條件的恒定。九、十、 ?顯微鏡使用規(guī)則十一、 ?1.?顯微鏡使用前，用酒精棉從中間至周圍擦拭載物臺(tái)。十二、2.?離開細(xì)胞房時(shí)或較長(zhǎng)時(shí)間不需使用時(shí)，及時(shí)關(guān)上電源，延長(zhǎng)燈泡壽命。盡量避免頻繁開關(guān)顯微鏡電源。十四、 ?超凈臺(tái)相關(guān)操作規(guī)則十五、 ?1.?超凈臺(tái)使用遵循預(yù)約原則。無預(yù)約者若有必要在他人預(yù)約時(shí)段內(nèi)使用，需先征得預(yù)約者

3、的同意，否則應(yīng)無條件讓出工作臺(tái)，以免耽誤他人實(shí)驗(yàn)。十六、 ?2.?超凈臺(tái)使用前用紫外燈照射15分鐘滅菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作區(qū)消毒，所有物品放入超凈臺(tái)內(nèi)使用前均應(yīng)消毒。十七、 ?3.?點(diǎn)燃酒精燈前需檢查瓶中酒精是否足夠，液面應(yīng)占瓶高1/3-2/3 。十八、注： ?消毒用75%的酒精，酒精燈用95%的酒精，向噴壺或燈內(nèi)添加酒精時(shí)請(qǐng)留意。十九、注：?酒精和酒精棉球由值日生負(fù)責(zé)補(bǔ)給，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞房?jī)?nèi)存放量不足時(shí)請(qǐng)及時(shí)通知值日生。二十、 ?4.?超凈臺(tái)中應(yīng)擺放廢液杯和廢品杯各一只，用于暫時(shí)存放廢棄物，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將杯內(nèi)垃圾倒入水池或垃圾桶中，并沖洗晾干備用。二十一、注：?將廢棄的槍頭、管子內(nèi)的殘留

4、液體打（倒） 入廢液杯后再棄入廢品杯中，以免垃圾桶內(nèi)留有大量培養(yǎng)液滋生細(xì)菌。二十二、?5.?可回收的移液管、離心管、培養(yǎng)瓶皿等，放入裝有清水的塑料桶中浸泡，桶內(nèi)需有足量的清水以沒過浸泡物品。二十三、注：?可回收器皿必要時(shí)先初步涮洗后再放入桶內(nèi)，尤其是培養(yǎng)瓶或血清管中有大量高營(yíng)養(yǎng)的液體殘留時(shí)，容易使桶內(nèi)的清水長(zhǎng)菌。二十四、保證浸泡的瓶、管內(nèi)完全被清水充滿，而不是在裝有大量空氣的情況下被壓倒桶底。二十五、塑料桶內(nèi)物品由值日生每天負(fù)責(zé)送去清洗，使用者實(shí)驗(yàn)結(jié)束后若發(fā)現(xiàn)桶已裝滿，請(qǐng)通知值日生或順手將塑料桶帶出細(xì)胞房。二十六、?6.?裝培養(yǎng)液的瓶子、配培養(yǎng)液的器皿勿放入塑料桶內(nèi)浸泡！應(yīng)由使用者本人及時(shí)清洗

5、晾干備用。二十七、注：?因桶內(nèi)物品通常要浸泡幾小時(shí)以上才送去清洗，此時(shí)細(xì)菌可能已在桶中生長(zhǎng)并釋放內(nèi)毒素。細(xì)菌內(nèi)毒素很難通過常規(guī)濕熱滅菌步驟去除干凈，即使干烤也不能保證其完全失活。內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)及多種實(shí)驗(yàn)均有較大影響。二十八、?洗滌程序：洗潔精洗凈，清水沖十次以上去除洗滌劑殘留，然后沖去離子水3 次，再用雙蒸水1 次，倒置于器皿柜中晾干。關(guān)上器皿柜的門防塵。二十九、三十、?培養(yǎng)液、試劑等相關(guān)操作規(guī)則三十一、?1.?從冰箱取放物品動(dòng)作要迅速，關(guān)門時(shí)要檢查門是否關(guān)好。按類別存放試劑。三十二、?2.?培養(yǎng)液母液是公用，由值日生負(fù)責(zé)配制，長(zhǎng)期存放于- 20。使用時(shí)按比例加入血清配成培養(yǎng)液工作液，打開使

6、用后的母液存放于4，要注意避免污染。發(fā)現(xiàn)4存放的培養(yǎng)液量不足時(shí)及時(shí)從- 20中預(yù)解凍，若- 20中已沒有儲(chǔ)備，請(qǐng)及時(shí)通知值日生。三十三、3.? 分裝好的血清長(zhǎng)時(shí)間保存于- 20，使用前放于4預(yù)解凍。從- 20取用血清者需登記，并在血清管上簽上使用者名字，若使用別人解凍的血清需征得同意以免耽誤他人實(shí)驗(yàn)。按需解凍，避免反復(fù)凍融。三十四、4.? 原則上解凍好的血清應(yīng)全部配成含血清的培養(yǎng)基備用，若有剩余，則暫存于 4并盡快使用。盡量不要使用他人開過的血清，以免交叉污染。三十五、三十六、?值日生工作職責(zé)三十七、?1.?每周值日生時(shí)間從周六開始，至下周五結(jié)束。三十八、2.? 值日周開始時(shí)需做的事情：在周六

7、、 日或之前準(zhǔn)備好滅菌的槍頭、離心管、干烤好的玻璃器皿，供未來一周的使用。配制消毒用的75%的酒精，制作酒精棉球，給細(xì)胞房?jī)?nèi)添加足夠的95%乙醇供酒精燈使用。三十九、注：?新離心管滅菌前，先用去離子水過2-3 次，再用雙蒸水沖1 次，烘干后用牛皮紙包好、滅菌。四十、 注：75%勺酒精可用750ml?95%勺酒精加去離子水至950ml配制而成。四十一、3.?值日周內(nèi)每天需做的事情：開大紫外燈消毒細(xì)胞房15-30min；將裝滿浸泡物品的塑料桶拎出細(xì)胞房送洗，并將空桶放回細(xì)胞房；更換垃圾袋；檢查培養(yǎng)箱內(nèi)水量是否足夠；檢查滅菌物品的儲(chǔ)備情況，以便及時(shí)補(bǔ)充；檢查培養(yǎng)液母液、血清、酒精等公用試劑的儲(chǔ)備情況

8、。四十二、4.?值日周結(jié)束前需完成的事情：星期五或前后一天內(nèi)打掃細(xì)胞房。包括拖地，擦桌子、吊柜、清潔和整理抽屜，擦超凈臺(tái)、冰箱及桌上的儀器，給水浴鍋加水或換水，洗細(xì)胞房專用的實(shí)驗(yàn)服和拖鞋，紫外消毒細(xì)胞房。切記給培養(yǎng)箱換MilliQ 水，保證水質(zhì)清潔！四十三、注：若上周值日生及時(shí)給培養(yǎng)箱內(nèi)水槽加足水，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)未來一周內(nèi)培養(yǎng)箱不會(huì)干水，但值日生仍應(yīng)經(jīng)常檢查，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)異常情況。四十四、5.?每 2周清潔一次培養(yǎng)箱：先將培養(yǎng)箱中的物品取出暫存于超凈臺(tái)內(nèi)，對(duì)于比較敏感的細(xì)胞可以暫存于404 細(xì)胞房的培養(yǎng)箱；將培養(yǎng)箱內(nèi)的不銹鋼板取出，包括4 塊橫板和左右2 塊立著的架子，用酒精棉球清潔鋼板和培養(yǎng)箱內(nèi)壁

9、；打開培養(yǎng)箱清潔內(nèi)壁時(shí)動(dòng)作要迅速，避免長(zhǎng)時(shí)間敞開門使得大量不潔凈空氣進(jìn)入，縮短過濾器的壽命；用紫外燈照射培養(yǎng)箱內(nèi)部15min,手提紫外燈放入培養(yǎng)箱前要用酒精棉擦拭干凈。四十五、6.?配制培養(yǎng)液母液：培養(yǎng)液有RPMI164訴口 DMEIW種，配方見404公共配液房；配制培養(yǎng)基要提前干烤量筒、燒杯、250ml 血清瓶，濕熱滅菌濾器、血清瓶瓶蓋，國(guó)產(chǎn)濾膜使用前用MilliQ 水浸泡 15min 以上或過夜。四十六、七、常用溶液的配制?1.?RPMI?164Q 干粉一包,碳酸氫鈉 ？2.0g, Hepes?2.38g,青霉素 100u/ml ,鏈霉素100ug/ml ,攪拌1-2小時(shí)后調(diào)節(jié)pH值至7.2 ,定容至1L,過濾滅菌分裝；2 .?DMEM： 干粉一包，碳酸氫鈉?3.7g， Hepes?2.38g， 丙酮酸鈉110mg， 青霉素 100u/ml，鏈霉素100ug/ml,攪拌1-2小時(shí)后調(diào)節(jié)pH值至7.2,定容至1L,過濾滅菌分裝；3