微生物檢驗(yàn)試驗(yàn)室致病性大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室致病性大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1 .概述致病性大腸埃希菌包括腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌、腸致病型 大腸埃希菌、腸侵襲型大腸埃希菌、腸由血型大腸埃希菌和 腸凝聚型大腸埃希菌 5群。與普通大腸埃希菌的生化反應(yīng)相 似，應(yīng)結(jié)合血清反應(yīng)（O、H和K抗原）、毒性試驗(yàn)（ST和 LT腸毒素）和臨床癥狀，分別鑒定5型致病性大腸埃希菌。2 .標(biāo)本類型糞便標(biāo)本。3 .鑒定3.1 形態(tài)染色與一般大腸埃希菌相同。3.2 培養(yǎng)特性在麥康凱瓊脂平板上形成不透明、粉紅色或無色菌落。3.3 生化反應(yīng)與普通大腸埃希菌相似。3.4 鑒別要點(diǎn)在山梨醇麥康凱瓊脂平板上形成無色菌 落。IMViC+-,3.5 不發(fā)醉或遲發(fā)醉山梨醇，

2、為本菌的主要特征。3.6 操作步驟3.6.1 氧化酶試驗(yàn)參見氧化酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。3.6.2 致病型大腸埃希菌的鑒定腸致病型大腸埃希菌（EPEC）嬰幼兒水樣或蛋花湯樣便，鑒定為大腸埃希菌后用EPEC分型血清作O:H分型。腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌（ETEC）水樣便，鑒定為大腸埃希菌后需要測定 ST和LT兩種腸毒素及血清分型。ST的 檢查可用兔腸段結(jié)扎試驗(yàn)，免疫學(xué)或分子生物學(xué)方法（ DNA 探針）檢測。腸侵襲型大腸埃希菌（EIEC） 細(xì)菌性痢疾樣便，生化 特性與志賀菌相似，不發(fā)醉或遲發(fā)醉乳糖，賴氨酸脫竣酶陰 性，無動力，符合 EIECO:H血清分型，豚鼠眼結(jié)膜試驗(yàn)、 HELA細(xì)胞侵入試驗(yàn)陽性。腸由血型

3、大腸埃希菌 （EHEC）早期為水樣便后為血便，有50多個血清型，最具代表性的是 O157: H7不發(fā)醉或 遲發(fā)醉山梨醇，在山梨醇麥康凱瓊脂平板上形成無色菌落， 可用EHECO:H診斷血清進(jìn)行分型。4 .藥敏參見藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程及CLSI M100-S20最新版本文件。5 .質(zhì)量控制參見質(zhì)量管理程序。6 .檢驗(yàn)結(jié)果解釋與分析疑似致病性大腸埃希菌感染，分離菌應(yīng)先鑒定為大腸埃 希菌，再通過不同的方法鑒定到種型，如分離到上述4種腹瀉病原菌，應(yīng)立即向臨床發(fā)生報告。7 .臨床意義7.1 EHEC主要引起嚴(yán)重的由血性腸炎，臨床表現(xiàn)為低熱、痙攣性腹痛，開始水樣便，繼而血樣便。7.2 EPEC主要引起嬰兒腹瀉，伴有低熱、嘔吐和腹瀉， 黏液便不帶血。輕者不用抗生素治療，嚴(yán)重者需用抗生素治療。7.3 ETCC引起旅游者和嬰幼兒腹瀉的主要病原菌，臨 床表現(xiàn)為水樣腹瀉、惡心、嘔吐、寒戰(zhàn)，有時發(fā)生脫水及中 毒癥狀。輕者不用抗生素治療，嚴(yán)重者需用抗生素治療。7.4 EIEC要侵入結(jié)腸粘膜上皮，引起志賀菌樣腹瀉（粘 液膿血便），引起痢疾樣腹瀉，發(fā)熱和腸炎，黏液血便，便 中有紅、白細(xì)胞。8 .鑒定流程參 考 文 獻(xiàn)1中國合格評定國家認(rèn)可委員會.CNAS-CL23:2008醫(yī)學(xué)