微生物學(xué)試驗原理及思考題答案

1、微生物學(xué)實驗原理及思考題答案 .txt鐵飯碗的真實含義不是在一個地方吃一輩子飯，而是輩子到哪兒都有飯吃。就算是一坨屎，也有遇見屎殼郎的那天。所以你大可不必為今天的自 己有太多擔(dān)憂。油鏡便于觀察的原理是什么？用油鏡觀察時在油鏡與載玻片之間加入了和玻璃折射率相近的香柏油，使進(jìn)入透鏡的光線增多，視野亮度增強(qiáng)，使物象明亮清晰。1.細(xì)調(diào)節(jié)器每旋轉(zhuǎn)一周使鏡筒上升或下降.一。培養(yǎng)基的配制原理：微生物的生長發(fā)育都有一定的營養(yǎng)需要，培養(yǎng)基即人工培養(yǎng)物，為其生長發(fā)育提供所 需營養(yǎng)的基質(zhì)。培養(yǎng)基配制好以后必須經(jīng)過滅菌方能用于分離培養(yǎng)微生物實驗。一次培養(yǎng)基 的配制和滅菌是微生物實驗室中最基本的操作，通過本次實驗學(xué)習(xí)微

2、生物實驗室中常用培養(yǎng) 基的配制方法和滅菌方法。1.稱藥品的鑰匙不要混用稱完藥品應(yīng)及時蓋緊瓶蓋，因為某些成分如蛋白月東極易吸水潮解調(diào)PH時要小心操作，避免回調(diào)。配制培養(yǎng)基應(yīng)注意哪些問題？要選定合適的培養(yǎng)基；培養(yǎng)基成分要稱量準(zhǔn)確；PH要適宜；滅菌要嚴(yán)格。培養(yǎng)基配制完成后為什么要立即滅菌？已滅菌的培養(yǎng)基如何進(jìn)行無菌檢查？防止細(xì)菌污染培養(yǎng)基一旦細(xì)菌污染了培養(yǎng)基，由于培養(yǎng)基有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，細(xì)菌會段時間內(nèi)大量產(chǎn)生這樣子就會跟培養(yǎng)物爭奪營養(yǎng)物質(zhì)，另一方面，細(xì)菌生長過程中會產(chǎn)生有毒物質(zhì)致使培養(yǎng)物死亡。放在37 c的恒溫箱中一兩天后，培養(yǎng)基上沒有生長任何微生物的就可以使用（若有微生物則是以菌落出現(xiàn)的 肉眼可以

3、看見）二。細(xì)菌的單染色技術(shù)原理：單染色法師利用單一染料對細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法。在中性，堿性或弱酸性溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，所以常用堿性染料進(jìn)行染色。堿性 染料并不是堿，和其他染料一樣是一種鹽，電離時染料離子帶正電，易于帶負(fù)電荷的細(xì)菌結(jié) 合而使細(xì)菌著色。制備染色標(biāo)本時的注意事項？選擇合適菌齡的細(xì)菌；固定時避免火焰直接烘烤破壞細(xì)菌形態(tài)；染色時間要適宜；水洗時水不能直接沖在涂片處。制片為什么要完全干燥后才能用油鏡觀察？油和水之間會分層，油就不能與標(biāo)本接觸還有光會發(fā)生折射等等原因，這樣不利于油鏡觀察三。細(xì)菌的革蘭氏染色法原理：細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色，而經(jīng)碘液媒染后用酒精脫色，在一定條件下有

4、的細(xì)菌紫色不被脫去，為 G+,有的可被月去，為 G-.1.革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是乙醇脫色。脫色過度，陽性細(xì)菌被染成陰性細(xì)菌，脫色不足，陰性細(xì)菌被染成陽性細(xì)菌涂片務(wù)必均勻，切忌過厚，以免脫色不徹底造成假陽性要用活躍生長期的適齡菌，老齡菌因體內(nèi)核算減少或菌體死亡，會使陽性菌被染成陰性菌，故不建議使用。為什么革蘭氏染色所用細(xì)菌的菌齡一般不超過24h ?若菌齡太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應(yīng)，關(guān)鍵在于細(xì)胞壁的通透性的改變，使結(jié)晶紫染液可以脫色透出。當(dāng)你對一株未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時，怎樣才能保證你的操作正確，結(jié)果可靠？找事先已知的且和未知菌形態(tài)明顯不同的G拜口 G-分別做混合涂片，當(dāng)

5、和 G+故日G+E確顯紫色和當(dāng)和G-做時G-正確顯紅色，看這個未知菌分別顯什么色，若一致，則可確定此菌為G+或G-o再回過頭單做此未知菌的革蘭氏染色，顯現(xiàn)正確那就證明此染色技術(shù)操作正確。四。細(xì)菌的鞭毛染色法原理：染色前先用媒染劑處理，讓他沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進(jìn)行染色。1.鍍銀法染色染色液必須現(xiàn)配先用，不能存放。Leifson染色法受菌種，菌齡和室溫等因素的影響，且染色液須經(jīng)1520次過濾，要掌握好染色條件細(xì)菌鞭毛極細(xì)，很易脫落，在整個操作過程中藥小心，防止鞭毛脫落。染色用玻片干凈無油污是鞭毛染色成功的先決條件。哪些因素能影響鞭毛染色結(jié)果？如何控制？選取的細(xì)菌菌種及菌齡要適宜；鍍

6、銀法染色液必須現(xiàn)配先用；操作要小心，防止鞭毛脫落；染色用玻片干凈無油污鞭毛染色的菌種為什么要連續(xù)傳種幾代，并且要采用幼齡菌種？ 因為菌齡較老的細(xì)菌容易失落鞭毛。五。細(xì)菌數(shù)量的測定原理：鏡檢計數(shù)法適用于各種含單細(xì)胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如有雜質(zhì)或雜菌常不易分辨。菌體較大的酵母菌或霉菌抱子可采用血球計數(shù)板。血球計數(shù)板較厚，不能使用油鏡，故細(xì)菌 不易看清。1.有壓線的菌體，每格只統(tǒng)計上方及右方線上的細(xì)胞因菌液在血球計數(shù)板上處于不同的空間，要在不同的焦距下才能看全，所以觀察時必須不斷調(diào)節(jié)細(xì)螺旋方可找全。每個樣品重復(fù)23次，若兩次差別太大應(yīng)重測。哪些因素會造成血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)誤差，應(yīng)如何避免？儀器的準(zhǔn)確

7、度和操作的規(guī)范性所用器材均應(yīng)清潔干燥，計數(shù)板的規(guī)格應(yīng)符合要求或經(jīng)過校正；必須一次性充滿計數(shù)室，防 止產(chǎn)生氣泡。六。放線菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)觀察原理：放線菌細(xì)胞一般呈分枝無隔的絲狀，纖細(xì)的菌絲體分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲.采用插片法觀察放線菌。將蓋玻片傾斜約45。角插入瓊脂表面，然后將放線菌接種于蓋玻片與培養(yǎng)基 接縫處，經(jīng)培養(yǎng)使放線菌生長在蓋玻片上。觀察時將蓋玻片取下，貼放在載玻片上，直接鏡 檢。1.用玻璃紙法接種時，注意玻璃紙與培養(yǎng)基之間不能有氣泡，以免影響其表面放線菌的生長。操作過程，切勿動玻璃紙菌面上的培養(yǎng)物。玻璃紙培養(yǎng)和觀察法是否可以應(yīng)用于其他微生物類群的培養(yǎng)和觀察？為什么？ 可以應(yīng)用于霉菌。鏡檢

8、時，如何區(qū)別放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲？基內(nèi)菌絲分枝繁茂，無色或產(chǎn)生水溶性或脂溶性色素而呈現(xiàn)黃、綠、橙、紅、紫、藍(lán)、褐、黑等各種顏色。氣生菌絲顏色較深且較基內(nèi)菌絲粗，直徑為1科m直形或彎曲狀，有分枝，有的產(chǎn)生色素七。酵母菌形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒別原理：酵母菌是多行的，不運(yùn)動的單細(xì)胞微生物，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)已有明顯分化，菌體比細(xì) 菌大。美藍(lán)是一種無毒性染料，他的氧化型呈藍(lán)色，還原型無色。用美藍(lán)對酵母的活細(xì)胞進(jìn) 行染色時，由于活細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能是美藍(lán)由藍(lán)色的氧 化型變成無色的還原型。因此，具有還原能力的酵母細(xì)胞是無色的，而死細(xì)胞或代謝作用微 弱的衰老細(xì)胞則呈藍(lán)色或淡藍(lán)

9、色。1.染液不宜過多或過少，否則再蓋上蓋片時菌液會溢出或出現(xiàn)大量氣泡而影響觀察。蓋玻片不宜平著放下，以免產(chǎn)生氣泡影響觀察。美藍(lán)染色法對酵母細(xì)胞進(jìn)行死活鑒別時為什么要控制染液濃度和染色時間。美藍(lán)濃度高和染色時間過長都會增加酵母菌的死亡，美蘭有氧化性，濃度太高會使活菌很快 致死，濃度低老齡細(xì)胞與活細(xì)胞不易區(qū)分；染色時間短，活細(xì)胞還沒從藍(lán)變無色，觀察到的 活細(xì)胞數(shù)量會比預(yù)計的少，染色時間長，活細(xì)胞數(shù)量也會減少顯微鏡下，酵母菌有哪些特征區(qū)別于一般細(xì)菌？酵母菌菌體呈圓形、卵形或橢圓形不同于一般細(xì)菌的形狀；酵母菌菌體比一般細(xì)菌大。八。霉菌形態(tài)的觀察原理：霉菌營養(yǎng)體是分支的絲狀體，分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲。

10、氣生菌絲又可分化出繁殖絲。不同霉菌的繁殖絲可形成不同的抱子。霉菌的個體比細(xì)菌和放線菌大的多，故用低倍鏡即可 觀察，常用的觀察方法有直接制片觀察，載波濕室培養(yǎng)觀察法和玻璃紙透析培養(yǎng)法三種。霉 菌菌絲體較粗大，細(xì)胞易收縮變形，且抱子絲易飛散，故在直接制片觀察時常用乳酸石碳酸 棉蘭染色液。其優(yōu)點(diǎn)是：細(xì)胞既不變形，又具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長時 間，還能防止抱子飛散。染液的藍(lán)色能增強(qiáng)反差，使物象更清楚。1.瓊脂塊的制作應(yīng)注意無菌操作載玻片培養(yǎng)時，盡可能將分散的抱子接種在瓊脂塊邊緣，且量要少，以免培養(yǎng)后菌絲過于稠 密影響觀察。制片時，盡可能保持霉菌自然生長狀態(tài)，加蓋時勿入氣泡和移位。顯微鏡

11、下，細(xì)菌，放線菌，酵母菌，和霉菌的主要區(qū)別？放線菌與細(xì)菌需要在油鏡下才能觀察清楚，而霉菌和酵母菌在低倍鏡下即可看到。細(xì)菌：為細(xì)而短的單細(xì)胞微生物（個體微?。饕螒B(tài)有：球、桿、螺旋狀等。（部分桿菌還可形成芽抱）放線菌：存在分枝絲狀體和菌絲體，革蘭氏陽性菌，有抱子絲和抱子（球形、橢圓形、桿狀、 柱狀）。酵母菌：單細(xì)胞，菌體呈圓球、卵形或橢圓形，少數(shù)呈檸檬形、尖形等。菌體比細(xì)菌大幾倍 到幾十倍，部分處于出芽繁殖過程中菌體還可觀察到芽體，大多數(shù)菌體上還有芽痕。霉菌：菌絲和抱子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多，常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍到幾十倍，在低倍鏡下即可看到，并還可看到抱子囊梗、囊軸、抱子囊、包囊抱子等。九。酸奶的制備和乳酸菌的分離原理：乳酸菌將牛奶中的乳糖發(fā)教程乳酸使其PH降至酪蛋白等電點(diǎn)附近從而使牛奶形成凝膠狀；其次，乳酸菌還會促使部分酪蛋白降解，形成乳酸鈣和產(chǎn)生一些脂肪，乙醛，雙乙酰和 丁二酮等風(fēng)味物質(zhì)。發(fā)酵過程通過雙菌或多菌的混合培養(yǎng)實現(xiàn)。其中桿菌先分解酪蛋白為氨 基酸和小肽，由此促進(jìn)了球菌的生長，而球菌產(chǎn)生的甲酸又刺激了桿菌產(chǎn)生大量乳酸和部分 乙醛，此外球菌還產(chǎn)生了雙乙酰這類風(fēng)味物質(zhì)，達(dá)到了穩(wěn)定狀態(tài)的混合發(fā)酵。酸奶制作為什么混菌發(fā)酵？為了發(fā)酵均勻和完全十。質(zhì)粒DNA的小量制備原理：在pH堿性環(huán)境中，線性的大分子量細(xì)菌染色體DNA變