豬藍(lán)耳病發(fā)病機(jī)理及提高非特異性免疫重要性

1、豬藍(lán)耳病發(fā)病機(jī)理及提高非特異性免疫重要性圖一 藍(lán)耳病病毒（PRRSV）1 豬藍(lán)耳?。≒RRS）的發(fā)病機(jī)理藍(lán)耳病病毒（PRRSV）進(jìn)入豬機(jī)體后，侵入肺泡巨噬細(xì)胞，造成嚴(yán)重的間質(zhì)性肺炎，入侵的第二天即可造成肺的損害，7天后損傷整個(gè)肺尖葉,呈多中心病狀，病毒侵入細(xì)胞后在細(xì)胞內(nèi)增殖，使巨噬細(xì)胞破裂，溶解崩 潰，造成巨噬細(xì)胞數(shù)量減少，肺泡壁增厚，淋巴組織呈衰竭狀態(tài)，同時(shí)降 低了肺泡巨噬細(xì)胞對(duì)其他細(xì)菌和病毒免疫力。另外，因?yàn)槎局甑淖儺悾瑢?dǎo) 致免疫細(xì)胞識(shí)別能力降低，從而逃避抗體的作用，極易繼發(fā)或并發(fā)其它疾 病，使病情非常復(fù)雜。圖二正常巨噬細(xì)胞（Healthy macrophage ）圖三 巨噬細(xì)胞被PRRS

2、V攻擊破裂（Unhealthy macrophage ） 2非特異性免疫與巨噬細(xì)胞2.1 非特異性免疫豬在進(jìn)化過(guò)程中形成的、天生即有、相對(duì)穩(wěn)定、無(wú)特殊針對(duì)性的對(duì)病 原微生物的天然抵抗力，稱為非特異性免疫或先天免疫。非特異性免疫主 要由豬體的屏障結(jié)構(gòu)（血腦屏障、胎盤(pán)屏障）、吞噬細(xì)胞的吞噬功能、正 常組織和體液中的抗菌物質(zhì)以及炎癥反應(yīng)等所組成。其中吞噬細(xì)胞包括大 吞噬細(xì)胞（即單核巨噬細(xì)胞）和小吞噬細(xì)胞（即中性粒細(xì)胞）。2.2 巨噬細(xì)胞及其特點(diǎn)2.2.1 巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞（Macrophage , M（|）由單核細(xì)胞發(fā)育而成，成熟后的體 積較大。游離于血液中與固定在不同組織中的巨噬細(xì)胞其形態(tài)與名稱不

3、同。 在光學(xué)顯微鏡下，可見(jiàn)有圓形或其他形狀的核，染色質(zhì)較濃縮，經(jīng)特殊染 色還可見(jiàn)到線粒體、高爾基體和中心體等。在電子顯微鏡下，還可進(jìn)一步 看到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體、微絲、微管和吞噬體等。巨噬細(xì)胞在機(jī)體免疫中有著極其重要的作用。最初只知道它有吞噬外 來(lái)異物的作用，因此只認(rèn)為是一種非特異性的免疫作用。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)其在協(xié)同T、B淋巴細(xì)胞參與特異性免疫反應(yīng)及在抗感染方面都有著 重要的作用。2.2.2 巨噬細(xì)胞特點(diǎn)巨噬細(xì)胞具有多種免疫功能， 它可吞噬消滅入侵的病原體、 有害異物， 清除損傷、衰老、死亡和突變細(xì)胞及代謝廢物，能加工、提呈抗原給淋巴 細(xì)胞。所以特異性免疫功能是建立在非特異性免疫功能基礎(chǔ)之上

4、，使機(jī)體 免疫功能進(jìn)一步完善。巨噬細(xì)胞之所以能完成這些功能是由于它具有三個(gè) 特點(diǎn)：（1）巨噬細(xì)胞是機(jī)體最早識(shí)別外來(lái)異物的細(xì)胞。人們驚異地發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞可以識(shí)別和吞噬各種各樣的外來(lái)的或“自身”的物質(zhì)，沒(méi)有這種廣 泛而有效的識(shí)別，也就談不上免疫系統(tǒng)對(duì)抗原物質(zhì)的免疫應(yīng)答和有效保護(hù)。研究表明這種識(shí)別的基礎(chǔ)是在巨噬細(xì)胞膜上存在很多的受體（表1）,這種能力是在物種系統(tǒng)發(fā)生中逐漸形成的。表1單核巨噬細(xì)胞膜上的受體性能受體名稱結(jié)合對(duì)象對(duì)胰酶敏感性主要功能Fc 受體 I ( FcRIgG 2a敏感ADCC、調(diào)理、吞Fc 受祿 力 ( FcR m聚合 IgG、IgG 1、IgG 2b不敏感ADCC、端理、吞噬Fc

5、受體田（FcRIgG 3ADCC、調(diào)理、吞田）噬IgM 受體(Fc單體或完整ADCC、調(diào)理、吞補(bǔ)體R3b受體 (C3bR)IgMC3b、C3cADCC、手連、吞 噬補(bǔ)體C3d受體 (C3bR)C3b、 C4ADCC、粘連、吞 噬各種淋巴因子受體MIF、CSF、見(jiàn)注(1)淋巴細(xì)胞受體LDCF T、B細(xì)胞細(xì)胞間相互激活聚合蛋白受體聚合的蛋白轉(zhuǎn)接異物，加速吞連接蛋白受體(FNR)連接蛋白(FN)促進(jìn)內(nèi)看消除病 原高密度脂蛋白受體高密度脂蛋白乳鐵傳遞蛋白受體乳鐵蛋白唾液糖蛋白受體唾液糖蛋白胰島素受體胰島素纖維蛋白原受體纖維蛋白質(zhì)其他各種受體見(jiàn)注(2)見(jiàn)注(2)注：(1) MIF可阻止巨噬細(xì)胞游動(dòng)。CS

6、F可促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)， LDCF (淋巴細(xì)胞衍生的趨化因子)招引單核巨噬細(xì)胞趨向異物；(2)包括對(duì)各種激素、神經(jīng)肽、多糖質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白及脂 多糖的受體，可調(diào)控單核巨噬細(xì)胞功能。(2)巨噬細(xì)胞具有多種胞內(nèi)酶和胞外酶 (表2),使之有效地消化、殺 滅被吞噬進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的病原體及異物。表2 單核巨噬細(xì)胞的酶類及其功用酶系名稱主要功能溶酶體水解酶組織蛋白酶B (cathepsin B1細(xì)胞內(nèi)水解消除吞噬的異物及病原透明質(zhì)酸酶(hyaluronidase ?體細(xì)胞外破壞炎癥組織糖甘酶(gucosidase )脫氧-/核糖核酸酶促進(jìn)創(chuàng)傷愈合降解彈性蛋白促進(jìn)溶解血塊促進(jìn)降低血壓降解脂質(zhì)及磷脂、消除內(nèi)毒

7、素脂多 糖氧化及催化Cl-水解殺菌(DNase/RNase )溶酶源中性蛋白酶膠原蛋白酶(collagenase )彈性蛋白酶(elastase )血纖維蛋白溶酶原激活劑(PA)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 (angiotensin C se)溶酶體脂酶脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase j-)磷月旨酶(phospholipase )溶菌酶(lysozyme )髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase )胞外酶核甘酸酶(nucleotidase )在細(xì)胞外進(jìn)行物質(zhì)代謝，供給養(yǎng)分及能量亮氨酸氨肽酶(leucine / aminopepto dase )堿性磷酸酯酶(alk.phophoes

8、terase )精氨酸酶(arginase )脫氨酶(deaminase )其他酶類3)巨噬細(xì)胞還可以分泌很多活性物質(zhì)，其分泌產(chǎn)物之多，可與肝細(xì)胞相比擬。這些分泌產(chǎn)物對(duì)組織、細(xì)胞起著重要調(diào)節(jié)作用(表 3)。表3 巨噬細(xì)胞的分泌產(chǎn)物1 .單核因子(mo nokines )5 .細(xì)胞外基質(zhì)及連接蛋白IL-1 =LAF纖維連接素(Fibronectin )IL-3 =CSFIL-6 = BCDF干擾素(IFN- a/y ) = MAF腫瘤壞死因子(TNF)2 .激素(normones )樣物 前列腺素(PGE2, PGF2a) 凝血嗯烷(thromboxane ) 白三烯(leukotriene )

9、 花生四烯酸(eicosatetraenoicacid促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH )胰島素樣物(insuline-like )胸腺素 B4 (thymosine B4 )為內(nèi)啡肽(為endorphin )二羥基維生素D3 .補(bǔ)體(comlement, C )成分C1、C2、C3、C4 及 C5備解素(P)、B因子、D因子抑制物：C3b抑制物、B 1H補(bǔ)體裂解成分(由M小蛋白酶裂解)：C3a、 C3b、 C5a、 Bb4 ,凝血因子凝血因子V、V11、1X及X凝血酶原、凝血酶原酶組織因子、血纖維蛋白溶酶95000明膠結(jié)合蛋白凝血揚(yáng)升素 (thrombospodin )6 .反應(yīng)性中間物超氧化物(

10、superxide )過(guò)氧化氫(H2O2)羥基(hydroxylradical )亞硝酸鹽、硝酸鹽7 .生長(zhǎng)因子及活化因子粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)中性粒細(xì)胞活化因子(NAF )單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子(G/M-CSF )促紅細(xì)胞生成素細(xì)胞集落增強(qiáng)因子成纖維細(xì)胞生成因子、活化因子及轉(zhuǎn)化因子漿細(xì)胞瘤生長(zhǎng)因子血小板衍生的生長(zhǎng)因子谷胱甘肽(glutathione )8 .酶及細(xì)胞抑制物蛋白酶抑制物a1抗胰蛋白酶a2巨球蛋白(a2M )膠原蛋白酶抑制物磷脂酶抑制物月旨調(diào)節(jié)素(lipomodulin )抑制物、血纖維蛋白溶酶原激活劑及抑制物9 .喋吟及喀咤產(chǎn)物胸腺嚅咤脫氧核昔（dT）脫氧胸音

11、（deoxycytidine ）尿（uracil ）尿酸新蝶吟（neopterin ）10 .其他結(jié)合蛋白3特異性免疫與藍(lán)耳病疫苗3.1 特異性免疫1L-1抑制物轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrin )同族鐵蛋白(isoferrin )轉(zhuǎn)鉆胺素 II (rtanscobalamine II) 脫輔基月旨蛋白 E (apolipopreoteinE)脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白(lipid transferpreotein )親和素 (avidin )特異性免疫又稱獲得性免疫或適應(yīng)性免疫， 是經(jīng)后天感染（病愈或無(wú)癥 狀的感染）或人工預(yù)防接種（菌苗、疫苗、類毒素、免疫球蛋白等 ）而使機(jī)體 獲得抵抗感染能力。一般是在微

12、生物等抗原物質(zhì)刺激后才形成的（免疫球蛋 白、免疫淋巴細(xì)胞），弁能與該抗原起特異性反應(yīng)。主要參與細(xì)胞是 T、B 細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞。在抗原刺激下，機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答（體液免疫或細(xì)胞免疫）， 般可分為感應(yīng)階段、反應(yīng)階段和效應(yīng)階段。感應(yīng)階段是對(duì)抗原的識(shí)別及處理階段。絕大多數(shù)抗原物質(zhì)第一次進(jìn)入 機(jī)體后，須經(jīng)巨噬細(xì)胞處理后將抗原信息傳遞給免疫活性細(xì)胞（T細(xì)胞、B細(xì)胞）。反應(yīng)階段是免疫活性細(xì)胞接受抗原刺激后，進(jìn)行分化、增殖，產(chǎn)生大 量致敏T細(xì)胞和B細(xì)胞，由B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的階段。此階段尚有少量細(xì)胞 停止分化、增殖，成為保留抗原信息的記憶細(xì)胞。效應(yīng)階段是致敏T細(xì)胞及抗體發(fā)揮免疫功能的階段。當(dāng)再次遇到相同 抗

13、原時(shí)，致敏T細(xì)胞直接作用于抗原，同時(shí)釋放出多種淋巴因子，消滅抗 原，發(fā)揮細(xì)胞免疫的作用。而抗體可直接作用于抗原，或與巨噬細(xì)胞、補(bǔ) 體等協(xié)同作用，殺滅或破壞抗原異物，發(fā)揮體液免疫的功能。圖四巨噬細(xì)胞加工、處理和遞呈抗原3.2 豬藍(lán)耳病疫苗隨著PRRS的發(fā)現(xiàn)，PRRS的疫苗研究也就隨之開(kāi)展，對(duì)于藍(lán)耳病的 免疫現(xiàn)在養(yǎng)豬界的說(shuō)法很多，到底應(yīng)不應(yīng)該注射疫苗，在疫苗的選擇上是 應(yīng)用弱毒苗還是滅活苗，每個(gè)人都有自己的看法。目前，世界上商品化的 PRRS疫苗有弱毒苗和滅活苗兩類。弱毒苗的缺點(diǎn)是：把它注射入體內(nèi)的效果與感染野毒沒(méi)有多大差別。對(duì)完全藍(lán)耳病陰性的場(chǎng)或已經(jīng)是藍(lán)耳病陽(yáng)性的豬，當(dāng)注入另外一種毒株的 的PR

14、RS疫苗后，它會(huì)同野毒一樣照樣穿過(guò)胎盤(pán)侵害胎兒。有時(shí)，如果我 們所使用的疫苗的基因序列與某一群體存在的PRRS病毒基因序列相似性達(dá)到70%80%時(shí)，疫苗會(huì)比較有效。如果我們所使用的疫苗的基因序列 與我們本場(chǎng)存在的PRRS病毒基因序列不同時(shí)，則意味著可能會(huì)有一場(chǎng)新 的藍(lán)耳病到來(lái)。Botner等報(bào)道，在丹麥，對(duì)1000多頭PRRS血清學(xué)陰性 豬使用了弱毒疫苗，可是不久后豬群發(fā)生了PRRS,而且從流產(chǎn)胎兒和死胎中分離到了疫苗病毒，發(fā)現(xiàn)疫苗病毒可經(jīng)胎盤(pán)感染胎兒，并向未接種的 母豬傳播，有些豬群則表現(xiàn)出急性 PRRS樣綜合癥狀。Opriessnig報(bào)道從 一個(gè)多次接種 Ingelvac PRRS MLV

15、 的豬場(chǎng)發(fā)生 PRRS后分離到一株 PRRSV 98-38803，并證實(shí)該毒株來(lái)自于 Ingelvac PRRS MLV。所以 PRRS 弱毒疫苗的毒力返強(qiáng)的可能性是存在的。從以上結(jié)果來(lái)看，PRRS弱毒疫 苗免疫產(chǎn)生期快，在控制 PRRS臨床癥狀上明顯好于 PRRS滅活疫苗。但PRRS強(qiáng)毒和弱毒在豬體內(nèi)的反應(yīng)過(guò)程是一致的，所以長(zhǎng)期使用PRRS弱毒疫苗所帶來(lái)的安全問(wèn)題仍是目前 PRRS免疫中最大的爭(zhēng)議。滅活苗的缺點(diǎn)是：免疫劑量大、免疫次數(shù)多、免疫力產(chǎn)生期較長(zhǎng)，誘 導(dǎo)有效免疫力的能力比較差。 但毫無(wú)疑問(wèn)，滅活苗在使用上是比較安全的， 可以誘導(dǎo)一定的抗體產(chǎn)生，如果抗體與野毒的基因序列比較相似，同樣還

16、 會(huì)產(chǎn)生保護(hù)；如果基因序列不相似，則保護(hù)力比較差。這就是這兩種疫苗的不同之處，了解到他們的缺點(diǎn)后我們?cè)谏a(chǎn)實(shí)踐 中就要避免它。所以要根據(jù)每個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)不同的情況來(lái)選擇疫苗。滅活苗的 安全性大大高于弱毒苗，而且不存在散毒的危險(xiǎn)，然而再好的滅活苗的效 果也不能和弱毒苗的效果相比較的。所以對(duì)于種豬和陰性場(chǎng)應(yīng)該選用滅活 苗，而陽(yáng)性場(chǎng)為了凈化藍(lán)耳病最好選用免疫效果好的弱毒疫苗。專家之音南方農(nóng)村報(bào)：當(dāng)前，不少地方養(yǎng)殖場(chǎng)出現(xiàn)接種藍(lán)耳病疫苗 （尤其是弱毒 苗）后大量死豬的現(xiàn)象，這是否意味著弱毒苗有很大的危險(xiǎn)性？樊福好：我個(gè)人覺(jué)得，接種疫苗只是防控高致病性豬藍(lán)耳病的權(quán)宜之 計(jì)，市場(chǎng)上個(gè)別廠家的產(chǎn)品也存在著滅活疫苗滅

17、活不完全、弱毒疫苗混有 強(qiáng)毒的情況，建議養(yǎng)殖戶在選用疫苗產(chǎn)品時(shí)，一定要慎重。從理論上說(shuō)，弱毒苗雖然在實(shí)際效果上會(huì)好于滅活疫苗，但是在目前 的情況下，藍(lán)耳病的免疫還存在著許許多多的問(wèn)題尚未解決，匆匆忙忙推 薦某些疫苗（弱毒或滅活疫苗）的做法值得商榷。目前針對(duì)所謂新變異毒株的疫苗主要是滅活疫苗，具免疫效果，我個(gè) 人不太了解。減少養(yǎng)豬生產(chǎn)中抗生素的使用，減少過(guò)多種類的疫苗接種，反而是當(dāng) 前提高豬群免疫水平的有效途徑之一。袁世山：這種打苗（尤其是應(yīng)急免疫）后發(fā)病的情況可能會(huì)出現(xiàn)。主要 原因包括：第一，免疫程序（亦即打苗時(shí)機(jī)及疫苗劑量）不當(dāng)：嚴(yán)格來(lái)說(shuō)， 應(yīng)急免疫對(duì)藍(lán)耳病效果不好，但如果進(jìn)行，建議越早越好

18、；注苗前已感染 的豬肯定是要發(fā)病乃至死亡的；另外，因?yàn)樗{(lán)耳病疫苗保護(hù)性免疫應(yīng)答遲緩，一般需要3-4周才能起作用，在此期間內(nèi)感染豬也會(huì)發(fā)病或死亡。第 二，慎選疫苗，正規(guī)疫苗質(zhì)量較好，一般無(wú)毒力過(guò)高或返強(qiáng)問(wèn)題。楊漢春：關(guān)于藍(lán)耳病活疫苗的使用在生產(chǎn)上應(yīng)慎重，從國(guó)家相關(guān)單位 的試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，現(xiàn)有的活疫苗對(duì)流行的變異毒株的免疫保護(hù)率不好；至 于變異毒株的滅活苗，已有的數(shù)據(jù)表明，對(duì)變異毒株具有較高的免疫保護(hù) 率，但在實(shí)際生產(chǎn)中的免疫效果如何還需要進(jìn)一步驗(yàn)證，對(duì)其他藍(lán)耳病病 毒毒株的免疫效果如何還缺乏實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)，因藍(lán)耳病病毒本身就容易變異，不同毒株之間的交叉的免疫保護(hù)效果就不是很好，這也是防治藍(lán)耳病的難 題

19、所在。至于自家組織苗，我認(rèn)為規(guī)?；i場(chǎng)可以采用這一措施，用采自 豬場(chǎng)本身發(fā)病死亡豬的組織制成滅活苗（但要滅活徹底）用于本場(chǎng)豬的免疫，也不失為一種有效的方法，但最好不要用于其他豬場(chǎng)。（樊福好：現(xiàn)任廣東省養(yǎng)豬行業(yè)協(xié)會(huì)技術(shù)部部長(zhǎng)、農(nóng)業(yè)部種豬質(zhì)量監(jiān)督檢 驗(yàn)測(cè)試中心基因分析室負(fù)責(zé)人。）（袁世山：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所動(dòng)物傳染病學(xué)研究室教授，主 持藍(lán)耳病基因工程疫苗研制。）（楊漢春：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院教授，對(duì)豬豬藍(lán)耳病和豬圓環(huán)病毒病 研究方面有很高的造詣。）（摘自：南方農(nóng)村報(bào)）圖五藍(lán)耳病導(dǎo)致豬耳朵發(fā)綃，母豬流產(chǎn)4非特異性免疫與特異性免疫的比較非特異性免疫與特異性免疫之間有著極為密切的聯(lián)系。以抗病

20、原體來(lái) 說(shuō)，非特異性免疫是基礎(chǔ)，它的特點(diǎn)是出現(xiàn)快，作用范圍廣，但強(qiáng)度較弱， 尤其是對(duì)某些致病性較強(qiáng)的病原體難以一時(shí)消滅，這就需要特異性免疫來(lái) 發(fā)揮作用。特異性免疫的特點(diǎn)是出現(xiàn)較慢，但是針對(duì)性強(qiáng)，在作用的強(qiáng)度 上也遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了沒(méi)有針對(duì)性的非特異性免疫。由于機(jī)體在任何時(shí)間、任何 地點(diǎn)，都有可能接觸到各種各樣的異物， 如果全部都以特異性免疫來(lái)對(duì)付， 機(jī)體的消耗就會(huì)過(guò)大，因此先以非特異性免疫來(lái)處理，對(duì)機(jī)體更為有利。特異性免疫是在非特異性免疫的基礎(chǔ)上形成的。例如，進(jìn)入機(jī)體的抗 原，如果不經(jīng)過(guò)吞噬細(xì)胞的加工處理，多數(shù)抗原將無(wú)法對(duì)免疫系統(tǒng)起到刺 激作用，相應(yīng)的特異性免疫也就不會(huì)發(fā)生。止匕外，特異性免疫的形成過(guò)程,又反過(guò)來(lái)增強(qiáng)了機(jī)體的非特異性免疫。非特異性免疫與特異性免疫區(qū)別見(jiàn) 表4。表4非特異性免疫與特異性免疫區(qū)別范圍細(xì)胞組成作用時(shí)間作用特點(diǎn)作用時(shí)間非特異性免疫特異性免疫機(jī)體僅對(duì)某