藕節(jié)炭中3表白樺脂酸含量的測定

1、藕節(jié)炭中3-表白樺脂酸含量的測定 作者：劉善新，王萌,靳光乾,郭承軍,蘇本正【摘要】 目的 建立藕節(jié)炭中3-表白樺脂酸含量的測定方法。方法 采用高效液相色譜法。色譜柱：Lichrospher C18 (4.6 mm150 mm,5 m)；流動相：乙腈-0.2%冰醋酸(7525),流速：1 mL/min；柱溫：30 ；檢測波長：207 nm。結(jié)果 3-表白樺脂酸的進(jìn)樣量在0.365 43.654 g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,r0.999 6,平均回收率為98.83%,RSD2.47%。不同地區(qū)市售藕節(jié)炭中3-表白樺脂酸的含量最高為0.575 8%,最低為0.048 3%。結(jié)論 本法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好

2、,可作為藕節(jié)炭中3-表白樺脂酸的含量測定方法。 【關(guān)鍵詞】 藕節(jié)炭；3-表白樺脂酸；高效液相色譜法；含量測定 Abstract：Objective To establish a method for the content determination of 3-epibetulinic acid in Nodus Nelumbinis Rhizomatis Charcoal. Methods HPLC was used on Lichrospher C18 column (4.6 mm150 mm, 5 m) with mobile phase of acetonitrile-0.2% gla

3、cial acetic acid (7525), the flow rate of 1 mL/min, the column temperature of 30 and the detection wavelength of 207 nm. Results 3-epibetulinic acid has a good linearity within 0.365 43.654 0 g (r0.999 6) and the average recovery was 98.83% with RSD2.47%. The content of 3-epibetulinic acid in Nodus

4、Nelumbinis Rhizomatis Charcoal from different region varied from 0.048 3% to 0.575 8%. Conclusion This method is simple, accurate, with good reproducibility, and can be used for the content determination of 3-epibetulinic acid in Nodus Nelumbinis Rhizomatis Charcoal. Key words：Nodus Nelumbinis Rhizo

5、matis Charcoal；3-epibetulinic acid；HPLC；content determination 藕節(jié)為睡蓮科植物蓮(Nelumbo nucifera Gaertn.)的干燥根莖節(jié)部,具有止血、消瘀的作用,用于治療吐血、咯血、尿血、衄血、崩漏。2005年版中華人民共和國藥典(一部)記載藕節(jié)的加工炮制方法為加工制成藕節(jié)炭,但藕節(jié)炭的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較簡單,僅有加工程度的描述1。經(jīng)研究,3-表白樺脂酸為從藕節(jié)炭止血活性部位醋酸乙酯部分中分離得到的主要成分,因此,本試驗參考文獻(xiàn)2,以3-表白樺脂酸為指標(biāo),采用高效液相色譜(HPLC)法,測定了各地市售藕節(jié)炭中的含量,為制定藕節(jié)炭的

6、質(zhì)量控制方法提供參考。1 儀器與試藥 高效液相色譜儀(美國Waters公司),泵Waters 2695,檢測器為Waters2996二極管陣列檢測器,數(shù)據(jù)處理器為Waters empower工作站。超純水(Millipore公司純水器),乙腈為色譜純,其他試劑均為分析純。3-表白樺脂酸對照品由本課題組從藕節(jié)炭中分離制得,高效液相歸一化法測定純度為98.57%。藕節(jié)炭樣品為從全國不同地區(qū)收集的市售藕節(jié)炭,粉碎過50目篩備用。2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件 色譜柱：Lichrospher C18(4.6 mm150 mm,5 m,江蘇漢邦科技有限公司)；流動相：乙腈-0.2%冰醋酸(7525)；流

7、速：1 mL/min；檢測波長：207 nm；進(jìn)樣量：10 L；柱溫：30 。理論塔板數(shù)按3-表白樺脂酸計算為11 012,分離度為2.47。色譜圖見圖1。2.2 供試品溶液的制備 取不同地區(qū)市售藕節(jié)炭樣品1.0 g,精密稱定,精密加入甲醇25 mL,稱定重量,回流提取0.5 h,再稱定重量,以甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液以0.45 m濾膜濾過,作為供試品溶液。2.3 對照品溶液的制備 精密稱取3-表白樺脂酸對照品11.42 mg于25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,濃度為0.456 8 mg/mL,作為對照品儲備液。精密量取4 mL于10 mL的量瓶中,加甲醇至刻度,

8、搖勻,作為對照品溶液,濃度為0.182 7 mg/mL。2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液(0.182 7 mg/mL)2、5、10、15、20 L,按上述色譜條件測定峰面積積分值,對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析,回歸方程為：Y527 405X444 417,r0.999 6。表明3-表白樺脂酸進(jìn)樣量在0.365 43.654 g范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。2.5 精密度試驗 精密吸取建聯(lián)藕節(jié)炭供試品溶液10 L,連續(xù)進(jìn)樣5次,測定峰面積積分值,結(jié)果RSD0.556%。精密度良好。2.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取濟(jì)南建聯(lián)的藕節(jié)炭供試品溶液10 L,每隔2 h進(jìn)樣測定1次,共進(jìn)樣測定5次,結(jié)果RSD

9、0.727%。其峰面積積分值在測定時間8 h內(nèi)基本不變,表明在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.7 重復(fù)性試驗 取同一批濟(jì)南建聯(lián)藕節(jié)炭1.0 g,共取6份,精密稱定,按含量測定項下方法,依法測定并計算3-表白樺脂酸的含量,結(jié)果其含量為(0.420 00.005 52)%,RSD1.31%。表明重復(fù)性良好。2.8 加樣回收率試驗 取同一批濟(jì)南建聯(lián)藕節(jié)炭0.5 g,精密稱定,共取6份,分別加入3-表白樺脂酸2.278 mg,按“2.2”項下方法制得回收率試驗液,依法測定。結(jié)果平均回收率為98.83%,RSD2.47%。結(jié)果見表1。表1 加樣回收率試驗結(jié)果（略）2.9 樣品測定 取不同地區(qū)市售藕節(jié)炭1.0 g

10、,每批取3份,分別精密稱定,按上述色譜條件依法測定3-表白樺脂酸的含量。結(jié)果見表2。表2 含量測定結(jié)果(略)3 討論 試驗中對加入甲醇的量、提取時間進(jìn)行了比較研究,加入甲醇25 mL易于過濾操作,且其測定值在線性范圍考察內(nèi),故選擇了25 mL。對回流提取的時間(0.5、1 h)進(jìn)行比較,結(jié)果測得二者的含量基本接近,因此選擇提取0.5 h。 3-表白樺脂酸為從藕節(jié)炭止血活性部位中分離得到的主要化學(xué)成分,因此,以3-表白樺脂酸為指標(biāo)對藕節(jié)炭的含量測定進(jìn)行了研究,但其是否具有止血作用有待研究。 不同地區(qū)市售藕節(jié)炭從性狀觀察上看有較大差異,收集的樣品中僅福州市藕節(jié)炭為斜片狀,其3-表白樺脂酸的含量最低,其他樣品均為原藥材直接加工炒制而成,這與加工方法及產(chǎn)地是否有關(guān)尚待進(jìn)一步研究。本方法準(zhǔn)確、靈敏、專屬性強、重