雞精對蟾蜍蝌蚪生長發(fā)育的影響

1、雞精對蟾蜍蝌蚪生長發(fā)育的影響馮彩平、王改芳，魏健 （呂梁學(xué)院生命科學(xué)系，山西呂梁 033000）摘 要：為了研究雞精的安全性，本實驗采用處于變態(tài)前幼體階段的蟾蜍蝌蚪，每組12只，放入質(zhì)量濃度分別為0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L、0.32 g/L的雞精培養(yǎng)液中進行飼養(yǎng)。通過7天的體長體重的測量以及對變態(tài)發(fā)育情況的觀察，在培養(yǎng)液濃度為0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L時，雞精對蝌蚪的生長發(fā)育并無明顯影響；當培養(yǎng)液濃度為0.32 g/L時，蝌蚪只有尾長出現(xiàn)了明顯變化，總核異常率略有增高，此時雞精對蝌蚪的生長發(fā)育出現(xiàn)了一定的影響。結(jié)果表明使用小劑量的雞精變態(tài)前幼

2、體階段的蟾蜍蝌蚪影響不大。大劑量的雞精對生物體是否安全還有待進一步的研究。關(guān)鍵詞：雞精；蟾蜍蝌蚪；生長發(fā)育 雞精是一種復(fù)合調(diào)味料，在烹調(diào)菜肴時適量使用，能促進食欲。其主要成分是味精，含量在40%左右。以及大量的鹽分，還有淀粉（作用是使其形成顆粒狀），增味核苷酸、糖及其他香料。由于“協(xié)同作用”，自身也能產(chǎn)生鮮味的增味核苷酸在和味精混合之后，會得到更加獨特的鮮味。隨著人民生活水平的提高，食品安全日益成為人們關(guān)注的熱點問題。食品問題的頻發(fā)令人們恐慌，那么食用雞精是否安全？本文通過在不同濃度的培養(yǎng)液中飼養(yǎng)蟾蜍蝌蚪，研究蟾蜍蝌蚪的體長體重變化和紅細胞微核變異情況，從而反映雞精對蟾蜍蝌蚪生長發(fā)育的影響，為

3、雞精的安全性提供參考。1 材料1.1 實驗動物實驗的開始時間是2015年4月末，筆者于山西省呂梁學(xué)院新校區(qū)的湖中進行捕撈。待湖內(nèi)蟾蜍蝌蚪處于變態(tài)前幼體階段時，挑選體色正常、反應(yīng)迅速、體質(zhì)健康、大小一致的健康蝌蚪進行實驗。所有蝌蚪均在經(jīng)過曝氣處理的自來水中飼養(yǎng)，定時喂食適量飼料(白面饅頭碎屑)，同時觀察蝌蚪的適應(yīng)狀況。蝌蚪在實驗室內(nèi)飼養(yǎng)1周之后方可用于實驗。1.2 實驗器材膠頭滴管、燒杯(1000 mL,100 mL,10 mL)、量筒(1000 mL)、移液管(10 mL)、玻璃棒、藥匙、稱量紙、吸水紙、塑料杯(高約15 cm、半徑約3 cm)、蒸餾水、剪刀、一次性手套、鑷子、毛細吸管、NaC

4、l、Na2SO4、HgCl2、解剖刀、解剖針、血細胞計數(shù)板、蓋玻片、電子天平、光學(xué)顯微鏡、擦鏡紙等。雞精(太太樂雞精調(diào)味料100 g裝)，成分：味精、食用鹽、大米、白砂糖、雞肉、食品添加劑(5-呈味核苷酸二鈉、核黃素)、雞蛋全蛋液、食用香精、咖喱粉、小蔥、大蒜。表1-1 包裝袋上注明的營養(yǎng)成分表項目每份營養(yǎng)素參考值%能量值47千焦(kJ)1%蛋白質(zhì)1.1克(g)2%脂肪0.2克(g)0%碳水化合物1.2克(g)0%鈉1000毫克(mg)50%注：每份為5克(g)紅細胞稀釋液(Hayem稀釋液)的配制：取NaCl(維持細胞滲透壓)0.5 g，Na2SO4(使溶液的密度增加，使紅細胞分布均勻并且不

5、易下沉)2.5 g，HgCl2(固定紅細胞，防腐)0.25 g，加入蒸餾水至100 ml，攪拌均勻。2 方法2.1 預(yù)實驗預(yù)先設(shè)置雞精的質(zhì)量濃度為0.10 g/L、0.20 g/L、0.40 g/L、0.60 g/L的培養(yǎng)液，每組12只進行飼養(yǎng)。7天后0.10 g/L組的實驗蝌蚪正常存活，0.20 g/L組的實驗蝌蚪存活11只，0.40 g/L組的實驗蝌蚪存活6只，0.60 g/L組的實驗蝌蚪全部死亡。因此，正式實驗的培養(yǎng)液濃度定為0.40 g/L以下。2.2 正式實驗根據(jù)預(yù)實結(jié)果，分別設(shè)置1個對照組和4個不同濃度梯度的培養(yǎng)組，每組溶液均為500 mL，對照組的培養(yǎng)液為曝氣后的自來水，其余4組

6、配制的培養(yǎng)液中的雞精的質(zhì)量濃度分別為0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L、0.32 g/L。2.3 觀察測定選取體長與體重差異不顯著的蝌蚪，在每組培養(yǎng)液放入12只進行飼養(yǎng)。每天記錄蝌蚪的體長體重及變態(tài)發(fā)育狀況，共觀測7天。2.4 蝌蚪紅細胞的檢測與計數(shù)在實驗的第7天，每組記錄完體長體重數(shù)據(jù)之后，進行紅細胞微核實驗。每組取5只蝌蚪，用紗布將其體表擦干，在頭部和尾部連接處用剪刀剪斷并置于燒杯中，然后用玻璃棒搗碎，之后向燒杯中加入少量的紅細胞稀釋液，接著用玻璃棒攪拌均勻，靜置15 min，最后使用雙層紗布對燒杯里的的混合液體進行過濾，獲得的濾液即為實驗所需的血細胞溶液。將蓋玻片（與計

7、數(shù)板同時配套購置）放入計數(shù)板中央，用潔凈玻璃棒蘸取少量已稀釋混勻后的血細胞懸浮液，于蓋玻片邊緣一次性滴入計數(shù)室內(nèi)，使之灌滿，多余的液體用濾紙吸掉，靜置23 min后，待細胞下沉后進行計數(shù)1。將制作好的裝片使用光學(xué)顯微鏡進行觀察，先在10倍鏡下調(diào)整找到要觀察的計數(shù)室，之后轉(zhuǎn)到40倍鏡，調(diào)整好視野，觀察計數(shù)室內(nèi)的蝌蚪的紅細胞，記錄紅細胞的形態(tài)和核異常的情況。觀察時需要用到軟件DigiLabII-Client進行拍照，之后統(tǒng)計紅細胞異常的類型及數(shù)目。2.5 數(shù)據(jù)通信統(tǒng)計與分析將之前觀察到的細胞數(shù)據(jù)進行整理分析，計算出蟾蜍蝌蚪的紅細胞數(shù)、微核細胞數(shù)和核異常細胞數(shù)。公式如下：紅細胞數(shù) = 5個中方格所數(shù)

8、得的紅細胞的個數(shù) × 5 × 10 000 × 稀釋倍數(shù)微核細胞率() = 含有微核的細胞數(shù)/實驗觀察到的紅細胞總數(shù) × 1 000核異常細胞率() = 出現(xiàn)核異常(除去微核)的細胞總數(shù)/實驗觀察到的紅細胞總數(shù) × 1 000總核異常率 = 微核細胞率 + 核異常細胞率在將實驗得到的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計并計算結(jié)果后，采取片方檢驗的方法對數(shù)據(jù)進行進一步的處理，最后一步對處理所得的數(shù)據(jù)和拍攝到的圖片中出現(xiàn)的現(xiàn)象進行綜合分析。3 結(jié)果與分析3.1 體長體重變化實驗第一天，對照組和0.08 g/L、0.16 g/L的實驗組的蝌蚪正常存活，0.24 g/L的實驗

9、組死亡1只，0.32 g/L的實驗組死亡2只；第二天對照組和0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L的實驗組的蝌蚪正常存活，0.32 g/L的實驗組死亡一只；之后的五天不再有死亡情況出現(xiàn)。表3-1 各組蝌蚪的存活情況(單位：只)0 d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 d對照組12121212121212120.08 g/L12121212121212120.16 g/L12121212121212120.24 g/L12111111111111110.32 g/L1210999999 對每天記錄的蝌蚪的體長和體重數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，得到表3-2。表3-2反映了蝌蚪平均體長的變化，表

10、3-3反映了蝌蚪平均尾長的變化，表3-4反映了蝌蚪平均體重的變化。實驗各組的蝌蚪均無出現(xiàn)變態(tài)發(fā)育的狀況。從表3-2可以看出，在不同濃度的培養(yǎng)溶液中，蝌蚪的體長并無明顯變化。從表3-3可以看出，隨著培養(yǎng)液濃度的增高，蝌蚪的尾長出現(xiàn)明顯變化，蝌蚪尾長隨濃度的增加增長速度變快。從表3-4可以看出，在不同濃度的培養(yǎng)溶液中，蝌蚪的體重并無明顯變化。表3-2 各組蝌蚪的平均體長(單位：cm)0 d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 d對照組0.800.800.800.800.800.810.810.810.08 g/L0.790.790.790.790.800.800.800.800.16 g/L0.

11、810.810.810.810.810.810.810.810.24 g/L0.800.810.830.830.830.830.830.830.32 g/L0.820.820.830.830.830.830.830.83表3-3 各組蝌蚪的平均尾長(單位：cm)0 d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 d對照組1.141.151.151.151.151.151.161.160.08 g/L1.151.151.151.151.161.161.161.170.16 g/L1.161.161.171.171.171.191.191.200.24 g/L1.151.161.171.171.191.

12、191.201.210.32 g/L1.161.181.181.191.191.201.221.22表3-4 各組蝌蚪的平均體重(單位：g)0 d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 d對照組0.0990.0990.1010.1020.0970.0980.1030.0980.08 g/L0.1000.1020.1010.1000.1000.1000.1010.1000.16 g/L0.1000.1010.1020.1010.0990.1020.1020.1010.24 g/L0.1100.1110.1090.1100.1110.1080.1100.1110.32 g/L0.1110.1120

13、.1100.1110.1130.1120.1110.1113.2 紅細胞異常正常的紅細胞形狀呈橢圓形，其細胞核為圓形，居于整個細胞中央。微核同樣為圓形，而且還觀察到雙核、三核、核變性、核破裂、核空泡、核質(zhì)內(nèi)凹和核質(zhì)外凸等核異?，F(xiàn)象的出現(xiàn)。 圖3-1為觀測中正常的紅細胞和出現(xiàn)的微核及核異常（×40）對數(shù)據(jù)整理和卡方檢驗后分別得到表3-5，3-6，3-7。由表3-5可知，當培養(yǎng)液的濃度為0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L時，蝌蚪的紅細胞微核細胞率相比于對照組差異不顯著(P>0.05)；當培養(yǎng)液的濃度為0.36 g/L時，蝌蚪的紅細胞微核細胞率相比于對照組差異顯著(

14、P<0.05)。表3-5 對蟾蜍蝌蚪紅細胞微核細胞率的影響蝌蚪總個數(shù)紅細胞總個數(shù)微核細胞個數(shù)微核細胞率/對照組51262070.550.08 g/L51194050.420.16 g/L51302080.610.24 g/L512370181.460.36 g/L511880332.78 由表3-6可知，當培養(yǎng)液的濃度為0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L時，蝌蚪的紅細胞核異常細胞率相比于對照組差異不顯著(P>0.05)；當培養(yǎng)液的濃度在0.36 g/L以下時，蝌蚪的紅細胞核異常細胞率相比于對照組差異顯著(P<0.05)。表3-6 對蟾蜍蝌蚪紅細胞核異常細胞率

15、的影響蝌蚪總個數(shù)紅細胞總個數(shù)核異常細胞個數(shù)核異常細胞率/對照組512620282.210.08 g/L511940282.350.16 g/L513020332.530.24 g/L512370342.750.36 g/L511880373.11由表3-7可知，當培養(yǎng)液的濃度為0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L時，蝌蚪的紅細胞總核異常率相比于對照組差異不顯著(P>0.05)；當培養(yǎng)液的濃度為0.36 g/L時，蝌蚪的紅細胞總核異常率相比于對照組差異顯著(P<0.05)。表3-7 對蟾蜍蝌蚪紅細胞總核異常率的影響蝌蚪總個數(shù)紅細胞總個數(shù)總核異常細胞個數(shù)總核異常率/對照

16、組512620352.770.08 g/L511940332.760.16 g/L513020413.150.24 g/L512370524.200.36 g/L511880705.89 4、結(jié)論當培養(yǎng)液濃度為0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L時，雞精對蝌蚪的生長發(fā)育并無明顯影響；當培養(yǎng)液濃度為0.32 g/L時，蝌蚪只有尾長出現(xiàn)了明顯變化，總核異常率略有增高，此時雞精對蝌蚪的生長發(fā)育出現(xiàn)了一定影響。微核產(chǎn)生的原因是由于作用因子的錯誤誘導(dǎo)作用，細胞在進行有絲分裂的后期，染色體斷片會喪失著絲粒，不能正常地移動到細胞的兩極而游離于細胞質(zhì)中，沒有著絲粒的染色體和染色體斷片就會落后而形成微核2。對于核異常產(chǎn)生的原因，可能是溶液中的作用因子誘發(fā)并導(dǎo)致蝌蚪紅細胞的染色體損傷，致使紅細胞染色體斷裂、丟失、結(jié)構(gòu)破壞3。通過結(jié)果與分析，我們可知相比于實驗所用的量，我們每日攝入的雞精的量并不多。所以在燒菜做飯時正常的雞精用量對正常人身體健康并不會出現(xiàn)影響。大劑量的雞精對生物體的安全性還有待進一步的研究。另外，大家都知道吃鹽多不利健康，卻忽視了攝取谷氨酸鈉過量。雞精中同時含有大量的氯化