蠶豆多倍體植物的誘導及其鑒定實驗方案

1、蠶豆多倍體植物的誘導及其鑒定實驗方案實驗組成員：姚燕兵李水琴劉保兵郭歡指導老師：許東風王安萍一、實驗目的：通過實驗掌握植物多倍體的方法和技術，掌握誘發(fā)多倍體的一般方法和觀 察植物染色體數目的變化引起植物和其他器官的變異。了解人工誘導多倍體的 原理，方法及其在植物育種上的意義二、實驗原理：生物體的細胞核中都有相對穩(wěn)定的染色體數目，這是物種的基本特征之 一。多倍體是細胞中具有 3個或 3個以上的染色體組的生物體。自然界中有許多植物是多倍體，也是變異發(fā)生的重要途徑之一。多倍體在 形態(tài)較二倍體植物個體大，葉片上的氣孔也很大，較易辯認。多倍體研究在育 種具有重要的意義。利用一些誘發(fā)因素可以人工誘導植物產

2、生多倍體。這些因 素包括物理的因素、化學因素等。其中最為有效是化學藥品是秋水仙素。秋水 仙素能夠抑制細胞有絲分裂時形成的紡錘體，染色體雖然完成了復制，但是不 能形成兩個子細胞，因而使染色體的數目加倍。含加倍的染色體的體細胞再分 裂出來的子細胞，染色體數目都比原來的體細胞增加了一倍，就形成了一個多 倍體植株。鑒定多倍體可分為直接和間接鑒定：直接鑒定是將經過秋水仙素溶 液處理的根尖，莖尖進行染色體計數。間接鑒定是根據多倍體植物外部形態(tài)變 化的主要特征是巨大性這一點提出的?；ǚ哿：蜌饪椎脑龃蟪Ｗ鳛槿旧w數目 加倍的輔助性指標。三、實驗試劑和用具：秋水仙素： 0.05%-0.1%濃度。卡諾固定液： 3

3、份95酒精與 1份冰醋酸配制而成。龍膽紫溶液：將 0.5克龍膽紫溶解在 100 毫升， 2醋酸溶液中配制成 0.5龍膽紫溶液。醋酸洋紅溶液：將 1 克洋紅與 100毫升冰醋酸混合后煮沸，煮時可加銹鐵 釘一枚，略具鐵質的 1醋酸洋紅染液能增強染色效果。搪瓷盤、鑷子、剪刀、燒杯、培養(yǎng)皿、恒溫水浴鍋、紗布、試管，載玻 片，蓋玻片，顯微鏡，吸水紙。四、實驗材料：發(fā)芽的蠶豆，蠶豆幼苗五、實驗方法及步驟：（一）蠶豆種子的處理和多倍體直接鑒定 :1、種子的萌發(fā)先將種子用清水洗凈，浸種。待露白后置于培養(yǎng)皿中發(fā)芽；2、預處理當根長 1cm 左右時，取出洗凈用吸水紙吸干，再用0.05-0.1%秋水仙素溶液浸泡處理

4、 24-36 小時，然后用蒸餾水沖洗三次，繼 續(xù)用培養(yǎng)皿培養(yǎng)一周；3、多倍體檢測剪取根尖（或胚芽）2-3mm,投入盛有10%HCL的培養(yǎng)皿中解 離10min，再清水漂洗2次。將漂洗后的根尖（或胚芽）放入 0.5%龍膽紫溶液 或1%醋酸洋紅溶液中染色3-5mi n,制片，然后鏡檢觀察染色體的倍性。（二）蠶豆幼苗的處理和多倍體間接鑒定 :（ 1 ）蠶豆幼兒苗的處理：在蠶豆幼苗的幼芽長到 3-5mm 時,用解剖刀在芽上作一縱切,然后用一浸 有秋水仙素 （0.05%濃度）溶液的紗布條包在切口處 ,紗布條的另端浸在一個盛有秋 水仙素水溶液的小燒杯內，燒杯的口用封口膜封好以防處理液蒸發(fā)，處理12h.隔天 后再處理 1 次,然后將幼苗洗干凈 ,種到花盆內或地里。同時種植沒有處理過的幼 苗作為對照。2）形態(tài)觀察和細胞學鑒定：比較處理與對照的外部形態(tài)有什么差異，將葉面的表皮撕下，在顯微鏡下 觀察，多倍體植物的氣孔和花粉粒比二倍體大很多，葉片也比較肥厚。用根尖 壓片法制成染色體載玻片標本，在顯微鏡下認真觀察和計數，與對照進行對 比。六、注意事項：1、本實驗所用的秋水仙素溶液具有強致癌性，請在使用過程中務 必注意安全，尤其是不能亂倒廢液。2、由于本實驗涉及