關(guān)于生物技術(shù)綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、精品文檔關(guān)于生物技術(shù)綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告生物技術(shù)綜合實(shí)驗(yàn)甘薯丫 -谷氨酰半胱氨酸合成酶 (丫 -GCS)基因的克隆和 原核表達(dá)學(xué)生：學(xué)號(hào)：同實(shí)驗(yàn)者：谷胱甘肽(glutathione,GSH)GSHM有多種重要生理功能,抗自由基和抗氧化應(yīng)激作用,保護(hù)細(xì)胞膜的完整性等. 丫-GCS是植物細(xì)胞中 GSHfe物合成白W艮速酶,可以調(diào)控GSH 的生物合成量.GSH在生物體抵御冷害、干旱、重金屬、真 菌等脅迫過(guò)程中起著重要作用,說(shuō)明丫 -GCS也與植物抗逆過(guò)程密切相關(guān).實(shí)驗(yàn)一甘薯葉片RNAfel取一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 了解真核生物 RN砸取的原理；2,掌握Trizol提取的方法和步驟.二、實(shí)驗(yàn)原理Trizol試劑是由

2、苯酚和硫匐酸月瓜配制而成的單相的快 速抽提總RNA勺試劑,在勻漿和裂解過(guò)程中,能在破碎細(xì)胞、 降解細(xì)胞其它成分的同時(shí)保持RNA勺完整性.TRIzol的主要成分是苯酚.苯酚的主要作用是裂解細(xì)胞,使細(xì)胞中的蛋白,2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)1 / 19精品文檔核酸物質(zhì)解聚得到釋放.苯酚雖可有效地變性蛋白質(zhì),但不 能完全抑制 RNA酶活性,因此TRIzol中還參加了 8 羥基唾 咻、異硫匐酸月瓜、B -航基乙醇等來(lái)抑制內(nèi)源和外源RNase %的8-羥基唾咻可以抑制RNase,與氯仿聯(lián)合使用可增強(qiáng)抑制作用.異硫匐酸服屬于解偶劑,是一類強(qiáng)力的蛋白質(zhì)變性 劑,可溶解蛋白質(zhì)并使蛋

3、白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)消失,導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu) 降解,核蛋白迅速與核酸別離.B -疏基乙醇的主要作用是 破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵.在氯仿抽提、離心別離后, RNA處于水相中,將水相轉(zhuǎn)管后用異丙醇沉淀RNA用這種方法得到的總 RNA中蛋白質(zhì)和DNA污染很少.三、實(shí)驗(yàn)材料1 .材料甘薯葉片,品種為徐薯 182 .試齊J 無(wú)RNAB滅菌水：參加%勺DEPC處理過(guò)夜后高壓滅 菌；Trizol 試齊1J;氯仿；異丙醇、75%乙醇；TBE緩沖液；上樣緩沖液3 .儀器2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)2 / 19精品文檔高壓滅菌鍋、微量移液器、臺(tái)式離心機(jī)、超凈工作臺(tái)、電泳儀、電泳槽、凝膠成像系統(tǒng)

4、、塑料離心管、槍頭和 EP 管架四、實(shí)驗(yàn)方法1 .將葉片取由放入研缽中,參加適量液氮,迅速研磨 成粉末,每 50-100 mg植物葉片參加 1 mL Trizol 試齊L室 溫放置5 min ,使樣品充分裂解；2 .每1 mL Trizol試劑參加200以L氯仿,用手劇烈振蕩混勻后室溫放置 3-5 min使其自然分相；3 . 4c 12,000 rpm 離心15 min,吸取上層水相轉(zhuǎn)移到新管中；在上清中參加等體積冰冷的異丙醇,室溫放置 15 min;4 . 4 C 12,000 rpm 離心 10 min ,棄上清,RNAM淀于 管底；5 . RNA沉淀中參加1 mL 75%的乙醇,溫和震蕩

5、離心管, 懸浮沉淀；4 8,000 rpm 離心2 min ,棄上清；6 .室溫放置10 min晾干沉淀；7 .沉淀中參加 20以L RNase-free ddH2O ,輕彈管壁,以充分溶解 RNA -70 C保存；8 .用1%勺瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè),用 EB染色并照 相.五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)3 / 19精品文檔1. RNA提取結(jié)果依照Trizol試劑盒方法,提由的 RNA少,此局部未 以圖或數(shù)據(jù)顯示.2. RNA后電泳結(jié)果如圖1.其中9a為本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果.由圖可知RNA條帶非 常模糊,拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重,幾乎無(wú)法分清具體條帶, 亮度較大. 點(diǎn)樣孔附近

6、的紅色局部為雜質(zhì),在提取過(guò)程中并未很好除 去.圖1. RNA提取跑膠結(jié)果.其中 1泳道為樣品Marker , 9a泳道為本小組RNA樣品.與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照可見(jiàn)條帶模糊, 拖尾 現(xiàn)象嚴(yán)重.六、分析與討論1. RNA的提取產(chǎn)量并不多,可能是因裂解樣品不充分或RNAM淀未完全溶解所致.在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,由于對(duì)操作時(shí)間的掌握不熟練、 操作技巧不完善,留上清與棄上清時(shí)令RNA損失了局部,使最終RNA量不理想.2. RNA電泳結(jié)果有EB存在時(shí),電泳后 28S rRNA和18S rRNA在紫外燈 下應(yīng)看得很清楚,另由現(xiàn)條由 tRNA, rRNA和5S rRNA組成 的較模糊、遷移較快的帶.如果RNA沒(méi)有降解,那么 2

7、8S rRNA的亮度應(yīng)為18S rRNA的22021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)4 / 19精品文檔倍,且這兩條帶都無(wú)彌散現(xiàn)象發(fā)生.由圖1.9a可知,RNA拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重,說(shuō)明 RNA已大局部被降解；此外點(diǎn)樣孔附近 由現(xiàn)紅色局部雜質(zhì),分析可能有并未除盡的蛋白質(zhì),同樣影 響RNA電泳結(jié)果.在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),本小組成員未嚴(yán)格戴上口罩并勤換手套,這可能使外源RNAase進(jìn)入樣品,導(dǎo)致其降解嚴(yán)重.另外,提取由 RNA 后本小組未立即將樣品放入 -70 C保存,也為導(dǎo)致結(jié)果不理 想的重要原因之一.在最初用氯仿萃取分層的過(guò)程中,由于 水相吸取過(guò)多,摻雜入局部蛋白質(zhì)雜質(zhì)而未于后續(xù)純化步驟 除盡

8、,RN既帶拖尾嚴(yán)重可能還受該蛋白質(zhì)影響.七、總結(jié)：本次試驗(yàn)RNAfel取非常失敗,從跑膠結(jié)果可見(jiàn)其降解嚴(yán) 重.雖然大實(shí)驗(yàn)無(wú)法防止試劑交叉污染的可能性,且電泳用 膠的質(zhì)量也會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,但從圖1.2a , 3a, 2b等條帶較為清楚的小組實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,瓊脂糖凝膠質(zhì)量以及試劑對(duì)結(jié)果干擾不大.那么本小組成員在提取過(guò)程中的操作一定由現(xiàn)了很大失誤.首先口罩、手套 應(yīng)該嚴(yán)格按規(guī)定佩戴,提取過(guò)程對(duì)移液槍等儀器使用需謹(jǐn)慎 仔細(xì),盡量防止混入雜質(zhì).其次為排除局部雜質(zhì)影響可對(duì)RNA樣品用紫外線分光光度計(jì)測(cè)定吸光值檢驗(yàn),將有助于結(jié)果分析.最后,細(xì)節(jié)決定成敗,我們應(yīng)汲取教訓(xùn)防止接下來(lái)的實(shí)2021全新精品資料-全新公

9、文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)5 / 19精品文檔驗(yàn)由現(xiàn)類似問(wèn)題.實(shí)驗(yàn)二 第1鏈cDNA的合成和模板的驗(yàn)證一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,掌握第1鏈cDNA的合成方法和步驟二、實(shí)驗(yàn)原理真核生物基因多為斷裂基因,編碼區(qū)不連續(xù),需經(jīng)轉(zhuǎn)錄后加工才能成為成熟mRNA以真核成熟 mRNA為模板合成cDNA進(jìn)而獲得有連續(xù)氨基酸編碼的DNAff列,無(wú)需轉(zhuǎn)錄后加工,即可在原核細(xì)胞中表達(dá).真核生物的 mRNATB有PolyA尾巴.引物：Oligo dT. 莫洛尼氏鼠白血病毒逆轉(zhuǎn)錄酶以單鏈RNM模板,在引物的引發(fā)下合成與模板互補(bǔ)的 DNAomRNAS轉(zhuǎn)錄生成的cDNA可作為PCR勺模板進(jìn)行擴(kuò)增稱 為RT-PCR RT-PCR比No

10、rthern 雜交更靈敏,對(duì) RNA勺質(zhì)量 要求較低,操作簡(jiǎn)便,它是在轉(zhuǎn)錄水平上檢測(cè)基因時(shí)空表達(dá) 的常用方法.三、實(shí)驗(yàn)材料1 .材料徐薯18葉片RNA羊品2 .試齊J dNTP mixture ;2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)6 / 19精品文檔 Oligo (dT) Primer (10 以 M); Total RNA ; RNase free ddH2O ;M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶； 5 x First-strand Buffer ; M DTT; Ribonuclease Inhibitor (40 U/ 以 L)3 .儀器10以L和100以L的移液槍、的 EP管、P

11、C做等四、實(shí)驗(yàn)方法1 .在RNase free Microtube管中配制以下混合液：dNTP mixture1 以 L*Oligo (dT) Primer (10 以 M) 4 以 LTotal RNA2 以 L生物技術(shù)綜合實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)一 工作液的配制、培養(yǎng)基配制、器皿洗滌及滅菌一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆崭鞣N工作液配制方法；了解植物培養(yǎng)基的構(gòu)成及配 制方法；掌握高溫高壓滅菌的方法.二、原理培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)的根本條件,同時(shí)也是關(guān)鍵因2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)7 / 19精品文檔濕熱條件121 C的蒸汽,10分鐘能夠有效地殺滅附著 在玻璃器皿、器具以及溶液和培養(yǎng)基中的微生

12、物到達(dá)滅菌的 目的.三、器具和試劑滅菌鍋,天平,電爐,微波爐,三角瓶,封口膜,移液 管,移液器,量筒,燒杯,pH試紙,培養(yǎng)皿,濾紙,Parafilm 封口膜.瓊脂,MSW養(yǎng)基大量元素,無(wú)菌水,葡萄糖,2, 4-D ,舊A, KT , 1M NaOH及HCl,卡那霉素,頭抱霉素,乙酰丁 香酮.四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容PH調(diào)節(jié)劑的配制、培養(yǎng)基母液的配制、培養(yǎng)基的配制、 各種相關(guān)物品的準(zhǔn)備培養(yǎng)基的配制步驟1、取個(gè)干凈燒杯,參加 1/3-2/3 左右的蒸儲(chǔ)水,用移 液管取所需的母液參加燒杯.2、稱取定量的蔗糖參加燒杯中并不斷攪拌,直到完全 溶解,定容.3、用NaOHg者稀HCL調(diào)劑酸堿值.4、稱取定量瓊脂糖參加燒

13、杯中,加熱煮沸攪拌,待瓊 脂完全溶解,分裝.5、高壓滅菌棉花無(wú)菌苗培養(yǎng)基的制備2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)8 / 19精品文檔1、取25 ml MS大量元素母液,稱取葡萄糖15g、于1升的燒杯中,定容后調(diào) pH值為,參加/I瓊脂煮沸.2、然后將其分裝到100毫升的三角瓶中,每瓶40毫升.3、用封口膜封口后在滅菌鍋中滅菌15分鐘.4、滅菌后珞于水平的工作臺(tái)上冷卻即可.要求：配制1L擬南芥無(wú)菌苗培養(yǎng)基的制備1、擬南芥無(wú)菌苗培養(yǎng)基：1/2 MS大量元素+蔗糖10g/L , PH值；參加瓊脂高溫高壓滅菌.2、%瓊脂糖：瓊脂糖/100ml蒸播水；無(wú)菌苗培養(yǎng)基和 % 瓊脂糖均1

14、21高壓滅菌15分鐘.3、另準(zhǔn)備20套9cm培養(yǎng)皿,滅菌.要求：配制,裝1瓶滅菌,滅菌后培養(yǎng)基倒皿.五、考前須知1、為了盡量減少人為的誤差,必須嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn) 行操作,嚴(yán)格根據(jù)要求的量來(lái)配制工作液、母液及培養(yǎng)基.2、應(yīng)當(dāng)把培養(yǎng)基中的各種成分都寫在紙上,加進(jìn)去一 個(gè)以后即劃掉一個(gè).3、所有裝著培養(yǎng)基的試管、玻璃罐、玻璃瓶和培養(yǎng)皿 等都應(yīng)當(dāng)清楚地做上標(biāo)記.4、每小組的操作的具體事項(xiàng)請(qǐng)參照黑板上貼的任務(wù)分2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)9 / 19精品文檔5、保護(hù)實(shí)驗(yàn)儀器及耗材,小心使用玻璃器皿,合理滅 菌,由于滅菌耗時(shí)較長(zhǎng).實(shí)驗(yàn)二無(wú)菌苗的制備一、原理化學(xué)滅菌：%b汞Hgc

15、l2溶液浸泡10分鐘可以對(duì)棉花 種子等外植體進(jìn)行滅菌,84消毒液浸泡3分鐘可以對(duì)擬南芥 等小種子外植體進(jìn)行消毒.物理消毒：紫外燈消毒、酒精燈火焰或高溫?zé)?5min左右可有效殺死銀子、剪刀等不銹 鋼操作器具的菌類到達(dá)消毒的目的.二、實(shí)驗(yàn)材料、器具和試劑棉花品種YZ1;擬南芥col-0野生型 滅菌鍋,天平,電 爐,三角瓶,封口膜,銀子,酒精燈,剪刀,移液管,超凈 工作臺(tái).初汞溶液,84消毒液,75%酉精三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容擬南芥無(wú)菌苗培養(yǎng)基倒皿1 .取上次滅菌好的擬南芥培養(yǎng)基,稍微擰松瓶蓋,微 波爐煮沸,邊煮邊搖動(dòng),至全部融化.2 .將上次滅菌好的9cm培養(yǎng)皿分開放珞超凈工作臺(tái)上.3 .將融化好的培養(yǎng)基

16、分裝于培養(yǎng)皿中,將皿至于超凈 臺(tái)上吹干.O共培養(yǎng)培養(yǎng)基的配制2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)10 / 19精品文檔成分?jǐn)?shù)量成分?jǐn)?shù)量MS±量元素20 倍50 ml 2,4-D / ml1 mlNH4NO3 20倍50 ml 甘氨酸1000 倍1 ml微量元素100 倍10 ml KT/ml1 ml鐵鹽100倍10 ml 葡萄糖30g/L微生素1000倍1 mlPH 值 肌醇100倍1 ml依次參加上述物質(zhì),調(diào)PH值,然后分裝至 2個(gè)500ml藍(lán)蓋瓶,每瓶參加 4g瓊脂,滅菌,滅菌后倒皿.選擇培養(yǎng)基的配制共培養(yǎng)培養(yǎng)基 +卡那霉素50mg/L +頭施霉素400 mg

17、/L滅菌后,待培養(yǎng)基涼至 60度左右參加,混勻,倒皿.棉花無(wú)菌苗的制備1、將棉籽用手術(shù)剪刀去殼.2、用%勺升汞滅菌13分鐘.3、無(wú)菌水沖洗三遍,接種于無(wú)菌苗培養(yǎng)基中.4、28 c條件下暗培養(yǎng) 7天.擬南芥無(wú)菌苗的制備大量法滅菌：將擬南芥種子放入離心管中,參加 84消 毒液：無(wú)菌水=1:1的混合液1ml,上下?lián)u晃滅菌2min ,棄消 毒液；參加1ml 75%勺酒精混勻1min,然后無(wú)菌水清洗 4次; 參加%C脂糖溶液懸浮種子,用移液槍涂布于擬南芥無(wú)菌苗 培養(yǎng)基,2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)11 / 19精品文檔吹干,封口.弱光培養(yǎng)兩天至種子萌發(fā),轉(zhuǎn)至光照培養(yǎng) 室培養(yǎng)兩

18、周.五、考前須知所有操作均在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行.六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果一周后觀察無(wú)菌苗的生長(zhǎng)狀況1、六瓶接種的棉花無(wú)菌苗中有一瓶被輕度污染,其余 五瓶生長(zhǎng)狀況良好.2、擬南芥的無(wú)菌苗因涂布不均勻長(zhǎng)勢(shì) 一般,幼苗較其他小組要弱小,葉片顏色較深.實(shí)驗(yàn)三愈傷組織的誘導(dǎo)及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棉花遺傳轉(zhuǎn)化一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆罩参矬w細(xì)胞胚胎發(fā)生的根本理論；了解植物愈傷組織在誘導(dǎo)和分化過(guò)程中的形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)特征；進(jìn)一步穩(wěn)固 植物離體培養(yǎng)和無(wú)菌操作的步驟；掌握植物遺傳轉(zhuǎn)化的方 法、理論；掌握根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù).二、實(shí)驗(yàn)原理植物細(xì)胞全能性：植物的每個(gè)細(xì)胞都包含著該物種的全 部遺傳信息,從而具備發(fā)育成完整植株的遺傳水平.愈

19、傷組織：胚性愈傷：呈淡黃色或者黃綠色,質(zhì)地較均勻；細(xì)胞球 狀或近球狀,細(xì)胞核大,細(xì)胞質(zhì)濃非胚性愈傷：呈褐色、白色粉末狀或白色、綠色堅(jiān)硬塊2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)12 / 19精品文檔狀；細(xì)胞一般為長(zhǎng)柱狀等非規(guī)那么形狀,細(xì)胞核小,細(xì)胞質(zhì) 較稀.農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因的原理：植物細(xì)胞在受傷后,創(chuàng)傷分 子誘導(dǎo)農(nóng)桿菌 Vir區(qū)各種基因的激活和表達(dá),導(dǎo)致T-DNA被剪切,加工,形成T-鏈蛋白復(fù)合體,通過(guò)農(nóng)桿菌和植物細(xì)胞 的細(xì)胞膜,細(xì)胞壁進(jìn)入植胞內(nèi),T-復(fù)合體上的核靶向序列可引導(dǎo)T-DNA整合到植物基因組.三、材料與用品1、實(shí)驗(yàn)材料：棉花材料 YZ1、農(nóng)桿菌菌株 LBA44042

20、、用具： 超凈工作臺(tái),顯微鏡,載玻片,天平,三角瓶,封口膜,橡皮筋,銀子,酒精燈,培養(yǎng)皿,濾紙,剪 刀,醫(yī)用手術(shù)刀,搖床.3、藥品：誘導(dǎo)、共培養(yǎng)培養(yǎng)基,卡寶品紅染色液,MGL活化培養(yǎng)基,LB培養(yǎng)基,乙酰丁香酮.四、實(shí)驗(yàn)步驟棉花愈傷組織的誘導(dǎo)及觀察1、愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制2、無(wú)菌苗的制備3、無(wú)菌苗的切取：選取培養(yǎng)7天左右健壯的無(wú)菌苗珞于墊有濾紙的培養(yǎng)皿上,用解剖刀切掉子葉及生長(zhǎng)點(diǎn),切掉 胚根及相連的約1/4的下胚軸,余下的下胚軸用作愈傷組織 誘導(dǎo)的外植體,用解剖刀將下胚軸切成小段.2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)13 / 19精品文檔4、外植體接種及離體培養(yǎng)：將切離好的外

21、植體接種于 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,平行放珞,28 c光照培養(yǎng),每天 14小時(shí)光照,進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng).5、愈傷組織繼代：待培養(yǎng)一個(gè)月左右,將增殖后的愈 傷組織連同下胚軸切斷繼代到分化培養(yǎng)基上,進(jìn)行胚性愈傷組織的分化.6、愈傷組織形態(tài)觀察：分別挑取少量非胚性愈傷和胚 性愈傷組織,珞于載玻片上,滴幾滴清水用銀子搗碎愈傷組 織,然后滴加一滴卡寶品紅染色數(shù)秒鐘后,在顯微鏡下觀察 比擬兩者細(xì)胞學(xué)特征.農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棉花下胚軸的遺傳轉(zhuǎn)化1、共培養(yǎng)及選擇培培養(yǎng)基的配制2、無(wú)菌苗的制備3、農(nóng)桿菌的活化：從超低溫冰箱內(nèi)取由保存菌株的甘油管在冰上融化；按 1:100的體積參加20ml LB液體培養(yǎng)基 里搖菌,2

22、8c暗培養(yǎng)36-48hr ;將渾濁的農(nóng)桿菌液涂布于 LB 平皿上,28 c暗培養(yǎng)36-48hr ;把培養(yǎng)基外表菌落刮入裝有 20ml MGL培養(yǎng)基的三角瓶中,28 C、200rpm搖30min ; OD值在之間即可用于侵染.4、下胚軸與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)：把無(wú)菌苗切成7mmg段,用銀子夾到經(jīng)活化的菌液中進(jìn)行侵染,搖勻,侵染 10分鐘； 倒掉菌液,將下胚軸轉(zhuǎn)入裝有濾紙的滅菌培養(yǎng)皿中,吹 5分2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)14 / 19精品文檔鐘使外表稍為枯燥；再將下胚軸分散布于墊有濾紙的共培養(yǎng) 培養(yǎng)基中,19-21 C ,暗培養(yǎng)48-60小時(shí)結(jié)束共培養(yǎng).5、選擇培養(yǎng)：把經(jīng)過(guò)共

23、培養(yǎng)的下胚軸用銀子轉(zhuǎn)入選擇 培養(yǎng)基中,培養(yǎng) 30天左右繼代一次轉(zhuǎn)入相同的選擇培養(yǎng)基 中.五、考前須知1、在切無(wú)菌苗時(shí),一定要使用鋒利的刀片,盡量做到一刀能切斷,防止擠壓莖段.2、無(wú)菌苗培養(yǎng)時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng).3、從超低溫冰箱內(nèi)取由的甘油管,應(yīng)盡量減少其在冰 箱外的時(shí)間,用完后盡快放回冰箱.4、侵染時(shí)下胚軸稍為枯燥可以增加農(nóng)桿菌的吸附.5、共培養(yǎng)后第一次進(jìn)行選擇培養(yǎng)時(shí)應(yīng)盡量使培養(yǎng)的環(huán) 境保持枯燥,可以減少農(nóng)桿菌的污染.6、整個(gè)過(guò)程均為無(wú)菌操作環(huán)境.六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1 .錐形瓶與平皿中的下胚軸生長(zhǎng)狀況均良好,觀察到 平皿中農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的下胚軸有發(fā)黑的現(xiàn)象,而錐形瓶中誘導(dǎo)的愈傷組織那么無(wú)發(fā)黑現(xiàn)象.2 .兩

24、個(gè)平皿中的擬南芥均生長(zhǎng)緩慢且幼葉發(fā)黃,推測(cè) 原因可能與雜菌感染有關(guān).生物技術(shù)制藥實(shí)驗(yàn)報(bào)告2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)15 / 19精品文檔人表皮生長(zhǎng)因子在大腸桿菌中的表達(dá)與純第一節(jié)引言表皮生長(zhǎng)因子EGF概述生長(zhǎng)因子在人體中的信號(hào)傳導(dǎo)局部起著關(guān)鍵的作用,它可通過(guò)與細(xì)胞外表的蛋白質(zhì)受體結(jié)合,參與細(xì)胞的各種生命活動(dòng).生長(zhǎng)因子可以是維生素,堿基,多肽等.所研究的表 皮生長(zhǎng)因子,就是一種人機(jī)體細(xì)胞合成的一種多肽.在生物 體內(nèi),每個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)不同,在不同組織中的細(xì)胞的表 皮生長(zhǎng)因子參與生長(zhǎng)、增值、死亡等過(guò)程.目前,表皮生長(zhǎng)因子已得到廣泛應(yīng)用.在許多公司已經(jīng) 開始研發(fā)甚至是生

25、產(chǎn)由 EGF多種疾病的誘發(fā)原因很多,我 們可以用EGF來(lái)進(jìn)行詳細(xì)的診斷.之后致病的查生原因,給 病人減少心理的壓力,帶來(lái)一線生機(jī).在經(jīng)過(guò)強(qiáng)烈的光刺激 后,尤其是激光,人們的眼部會(huì)有很大的損傷,最嚴(yán)重的就 是眼角膜損傷,無(wú)法修復(fù).人體在經(jīng)過(guò)紫外線的照射下皮膚 的損傷以及高溫、蒸氣、火等造成的皮膚大面積與原來(lái)的不 一樣的皮膚.對(duì)于這些傷害,我們可使用含有可促進(jìn)人體表 皮細(xì)胞的新陳代謝EGF的藥膏或者是化裝品,使皮膚變得如 初.在最早研究表皮生長(zhǎng)因子的時(shí)候就只是證實(shí)是多肽,還沒(méi)有命名.是由 Cohen在1960年,在提取神經(jīng)生長(zhǎng)因子時(shí),2021全新精品資料-全新公文范文-全程指導(dǎo)寫作法家原創(chuàng)16 /

26、 19精品文檔意外發(fā)現(xiàn)除此種物質(zhì)以外的一種多肽.多個(gè)科學(xué)家對(duì)其充滿好奇心,在之后的十年內(nèi),Savage真正的研究清楚,命名此 種多肽為表皮生長(zhǎng)因子.表皮生長(zhǎng)因子EGF的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)不同的生物中,表皮生長(zhǎng)因子的蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)不同.研 究說(shuō)明家族成員一般在多于50個(gè)氨基酸,而少于80個(gè)氨基酸,與我們所熟悉的胰島素一樣,表皮生長(zhǎng)因子是由前體加 工成的成熟的多肽,在具有生物活性.如人體中的表皮生長(zhǎng) 因子是由53個(gè)氨基酸組成.整個(gè)hEGF分子由兩個(gè)結(jié)構(gòu)域組成.殘基133,形成N一端結(jié)構(gòu)域；3453為C一端結(jié)構(gòu)域；成熟 hEGF的序列位 于單鏈多肽的C 一末端附近,由53個(gè)氨基酸殘基組成,并 且其C 一端和N一端分別由Arg/Asp /Arg/His鄰接,故成熟的EGF分子,可以經(jīng)專一性 Arg內(nèi)肽酶的作用,從 前體釋放.二級(jí)結(jié)構(gòu)上存在著反平行B片層結(jié)構(gòu)是EGF骨架的常見(jiàn)結(jié)構(gòu),N 一端和C一